梨幼果多酚的純化及其抗氧化性

朱 潔，王紅寶，孔佳君，宋小飛，陶書田

（南京農業大學園藝學院，江蘇 南京 210095）

梨幼果多酚的純化及其抗氧化性

朱 潔，王紅寶，孔佳君，宋小飛，陶書田*

（南京農業大學園藝學院，江蘇 南京 210095）

采用5 種大孔吸附樹脂分離純化梨幼果多酚，并測定其抗氧化性。結果表明，綜合分析吸附與解吸效果，NKA-9大孔樹脂性能較好，最適合用來純化梨幼果多酚；NKA-9大孔樹脂對梨幼果多酚進行純化時，最適宜的條件為：將2 mg/mL的多酚提取液調至pH值為5.0，設定進樣流速為1 mL/min，充分吸附，然后用70%的乙醇為洗脫液進行動態洗脫，洗脫流速為1 mL/min，用此方法純化后的梨幼果多酚的純度從6.23%提高到30.68%；梨幼果多酚粗品對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radicals，DPPH）自由基、2,2-聯氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽自由基（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate) radicals，ABTS＋·）、亞硝酸基的IC50值分別為：151.07、152.48、490.35 μg/mL；梨幼果多酚純品對DPPH自由基、ABTS＋?、亞硝酸基的IC50值分別為：122.12、130.78、392.09 μg/mL；純化后的多酚樣品抗氧化能力比粗品有所增強。

大孔樹脂；梨幼果多酚；純化；抗氧化性

朱潔, 王紅寶, 孔佳君, 等. 梨幼果多酚的純化及其抗氧化性[J]. 食品科學, 2017, 38(5): 14-20. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201705003. http://www.spkx.net.cn

ZHU Jie, WANG Hongbao, KONG Jiajun, et al. Purification and antioxidant activity of polyphenols from young pear fruits[J]. Food Science, 2017, 38(5): 14-20. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201705003. http://www.spkx.net.cn

梨屬于薔薇科梨屬，在我國栽培歷史悠久，已種植3 000多年。梨中不僅富含蛋白質、維生素、碳水化合物等營養物質[1]，還含有如兒茶素、沒食子酸等酚類物質[2-3]。研究證明，多酚類物質在梨幼果中廣泛存在[4]。在農業生產過程中，因為疏花疏果或梨樹本身正常的生理落果，許多梨幼果被丟掉，使多酚類物質被大量浪費。因此應當對梨幼果加以充分利用。

植物多酚（plant polyphenol）別名單寧，包含所有多羥基類化合物，通過植物體的次生代謝過程產生，含量很高，主要存在于植物的根、莖、葉、皮、核和果肉中[5-7]。因為植物多酚中含有大量的酚羥基，所以其具有清除自由基等抗氧化活性。多酚類物質對自由基的清除作用在其他物種上已有很多報道，比如蘋果皮渣多酚能夠還原Fe3＋，清除2,2-聯氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽自由基（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate) radicals，ABTS＋·）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基和超氧陰離子自由基[8]；板栗總苞多酚能夠清除DPPH自由基和ABTS＋·[9]；玫瑰果多酚對DPPH自由基、超氧陰離子自由基、羥自由基都有清除作用[10]。但是，關于梨多酚對自由基的清除作用的報道卻較少。

植物多酚具有抗氧化、抗腫瘤等多種生理功能[11-13]，但因為普通的溶劑提取法提取的多酚粗提液中雜質較多，會對多酚含量及其活性的測定產生干擾，所以將多酚粗提液進行純化，得到純度更高的多酚物質，對其后續研究至關重要。目前多酚的純化方法主要有：層析法、沉淀分離法、色譜分離法、大孔樹脂吸附法等。大孔吸附樹脂是一種性質穩定的高分子材料，不會受到酸堿和有機溶劑的影響，其具有的巨大比表面積，使得吸附容量很大，多孔性的結構還能起到篩分的作用。同時，大孔樹脂還能再生可以重復利用，既環保又降低了成本，是目前分離純化多酚類物質應用較廣泛的一種方法[14]。雖然大孔樹脂純化多酚類物質的研究很多，但是在梨多酚的純化上卻鮮有報道。

因為在生產上梨幼果被大量丟棄，其所含的多酚類資源被浪費，所以本實驗以梨幼果為材料，采用5 種大孔吸附樹脂分離純化梨幼果多酚，篩選出最適樹脂，并對梨多酚純化的工藝條件進行優化，對其抗氧化活性進行測定，為梨幼果的充分利用和梨多酚的純化及其進一步研究提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

梨幼果：‘翠冠’幼果（花后一個月）采自南京農業大學江浦梨資源圃。

A B-8型、D 1 0 1型、S-8型大孔吸附樹脂上海源葉生物公司；X-5型大孔吸附樹脂 安徽三星樹脂有限公司；NKA-9型大孔吸附樹脂 鄭州華溢有限公司；沒食子酸、福林-酚、無水碳酸鈉、DPPH、VC、ABTS等均為分析純。

1.2 儀器與設備

JA1203精密電子天平 上海良平儀器儀表有限公司；臺式高速冷凍離心機 美國貝克曼庫爾特公司；臺式恒溫振蕩器 江蘇太倉市華美生化儀器廠；水浴鍋 上海新苗醫療器械有限公司；玻璃層析柱（25 mm×300 mm） 上海滬西分析儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 梨幼果多酚粗提液的制備

將梨幼果果肉用液氮速凍研磨成粉末，加入60%的乙醇溶液，溶液和樣品比為30∶1（V/m），70 ℃水浴避光浸提2 h，然后12 000 r/min離心20 min，取上清液，就是梨幼果多酚粗提液[15]。

1.3.2 多酚含量的測定

將沒食子酸作為基準物質，用福林-酚法[16]測定梨幼果多酚含量。回歸方程為y=0.003 3x＋0.064 3，R2=0.999 3。

1.3.3 大孔吸附樹脂純化梨幼果多酚

1.3.3.1 樹脂的預處理

用95%的乙醇浸泡各種大孔吸附樹脂24 h，再用去離子水沖洗至無酒精味道。接著用5%的NaOH溶液浸泡8 h，然后蒸餾水沖洗至中性，再用5%的HCl溶液浸泡8 h，蒸餾水處理至中性，預處理活化結束[17]。

1.3.3.2 最佳樹脂類型的選擇

將活化后的5 種樹脂各稱取1 g，加入50 mL梨多酚粗提液，放在25 ℃、120 r/min的恒溫搖床上避光充分振蕩24 h，測定上清液的多酚質量濃度。過濾，所得樹脂用蒸餾水沖洗幾次，再加入50 mL 70%的乙醇溶液進行解吸，對解吸液的多酚質量濃度進行測定。吸附量、吸附率、解吸率的計算見公式（1）～（3）：

式中：C0為吸附前粗提液的多酚質量濃度/（mg/mL）；Cl為吸附后梨幼果多酚質量濃度/（m g/m L）；V1為加入梨幼果多酚粗提液體積/mL；m為樹脂質量/g；C2為解吸液中梨幼果多酚質量濃度/（mg/mL）；V2為解吸液體積/mL；W為吸附量/（mg/g）。

1.3.3.3 靜態吸附曲線的測定

稱取活化后的NKA-9樹脂1 g，加入50 mL的多酚粗提液，放在25 ℃、120 r/min的恒溫搖床上避光充分振蕩24 h，隔一段時間取一次樣，測定多酚質量濃度。分別以時間和吸附率為橫縱坐標，繪制靜態吸附曲線。

1.3.3.4 靜態解吸曲線的測定

將吸附飽和的樹脂，用蒸餾水沖洗幾次，放在100 mL錐形瓶中，加入50 mL 70%的乙醇，在25 ℃、120 r/min的恒溫搖床上避光充分振蕩24 h，隔一段時間取一次樣，測定多酚質量濃度。分別以時間和解吸率為橫縱坐標，繪制靜態解吸曲線。

1.3.3.5 pH值對吸附效果的影響

將活化后的NKA-9樹脂稱取5 份，每份各1 g，并加入20 mL多酚粗提液，然后用0.01 mol/L 的氫氧化鈉溶液和鹽酸溶液調節梨多酚粗提液的pH值至 3、4、5、6、7。于25 ℃、120 r/min 恒溫搖床避光充分振蕩吸附24 h后，測定多酚質量濃度，計算樹脂對多酚的吸附率。

1.3.3.6 上樣液質量濃度對吸附效果的影響

將活化后的NKA-9樹脂稱取7份，每份各1 g，加入不同質量濃度（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mg/mL）的梨幼果多酚粗提液，于25 ℃、120 r/min恒溫搖床避光充分振蕩吸附24 h后，測定多酚質量濃度，計算樹脂對多酚的吸附率。

1.3.3.7 上樣速率對吸附效果的影響

稱取活化的樹脂20 g，濕法裝進內徑2.5 cm、高30 cm的層析柱中，首先用去離子水平衡層析柱，后將多酚粗提液分別以0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL/min的流速進行上樣吸附，將流出液進行收集，并對其多酚質量濃度進行測定。

1.3.3.8 洗脫劑種類對解吸率的影響

將活化后的NKA-9樹脂稱取5份，每份各1 g，加入20 mL多酚粗提液，于25 ℃、120 r/min恒溫搖床避光充分振蕩吸附24 h后，測定其多酚質量濃度，并計算其吸附量。把吸附飽和的樹脂取出用蒸餾水沖洗幾次，然后放到100 mL的錐形瓶中，分別加入體積分數為70%的甲醇、乙醇和乙酸乙酯溶液50 mL，于25 ℃、120 r/min恒溫搖床避光充分振蕩解吸24 h后，對解吸液中多酚的質量濃度進行測定，并計算其解吸率。

1.3.3.9 洗脫劑體積分數對解吸率的影響

將活化后的NKA-9樹脂稱取5 份，每份各1 g，加入20 mL多酚粗提液，于25 ℃、120 r/min恒溫搖床避光充分振蕩吸附24 h后，測定其多酚質量濃度，并計算其吸附量。把吸附飽和的樹脂取出用蒸餾水沖洗幾次，然后放到100 mL的錐形瓶中，分別加入體積分數為 40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液50 mL，于25 ℃、120 r/min恒溫搖床避光充分振蕩解吸24 h后，對解吸液中多酚的質量濃度進行測定，并計算其解吸率。

1.3.3.10 洗脫劑洗脫流速對解吸率的影響

將20 g樹脂放在燒杯中，加入100 mL的多酚粗提液，充分振蕩吸附24 h，測定吸附后溶液的多酚質量濃度，并計算其吸附量。將吸附飽和的樹脂濕法裝進內徑2.5 cm、高30 cm的層析柱中，用去離子水沖洗樹脂去除雜質，然后用70%乙醇溶液分別以0.5、1.0、1.5、2.0、 2.5 mL/min的流速進行洗脫，將洗脫液進行收集，并對其多酚質量濃度進行測定。

1.3.4 梨幼果多酚的抗氧化性測定

1.3.4.1 總抗氧化能力測定

總抗氧化能力測定采用亞鐵還原能力（ferric reducing antioxidant power，FRAP）法，梨幼果多酚的總抗氧化能力測定參照章丹丹等[18]的方法。先將3.6 mL的FRAP溶液（現配）加入到試管中，然后加入35 μL不同質量濃度的梨幼果多酚提取液，靜置10 min后于593 nm波長處測定吸光度。FRAP溶液由3 種溶液配制：0.3 mol/L的pH 3.6醋酸鹽緩沖液，溶于40 mmol/L HCl溶液的2,4,6-三（2-吡啶基）三嗪（2,4,6-tris(2-pyridyl)-striazine，TPTZ）和FeCl3溶液以10∶1∶1（V/V）混合。吸光度越高說明總抗氧化能力越強。

1.3.4.2 DPPH自由基清除率測定

分別取不同質量濃度的樣品溶液0.2 mL，加入0.8 mL 60 μmol/L的DPPH溶液（無水乙醇配制），混勻后反應30 min（避光），在517 nm波長處測定吸光度為A1，用70%乙醇溶液代替樣品測定吸光度為A0，無水乙醇代替DPPH溶液測定吸光度為A2。DPPH自由基清除率的計算見公式（4）：

1.3.4.3 ABTS＋·清除率測定

ABTS母液配制：ABTS溶液（7 mmol/L）和過硫酸鉀溶液（2.45 mmol/L）以1∶1（V/V）混合搖勻。室溫放置12～16 h（避光）。然后將ABTS母液用10 mmol/L、pH 7.4的磷酸鹽緩沖液稀釋，稀釋液在734 nm波長處測定吸光度A0，要達到0.70±0.002。分別取不同質量濃度的樣品溶液50 μL，加入750 μL的ABTS測定液，混合均勻，充分反應6 min，734 nm波長處測定吸光度為A1，用無水乙醇溶液代替ABTS溶液測定吸光度為A2，ABTS＋·清除率的計算同公式（4）。

1.3.4.4 亞硝酸基清除率測定

分別取不同質量濃度的樣品溶液500 μL，加入亞硝酸鈉溶液（5 μg/mL）250 μL，振蕩搖勻，37 ℃水浴30 min，然后加入0.4%對氨基苯磺酸溶液250 μL，搖勻靜置15 min，再加入0.2%鹽酸萘乙二胺溶液125 μL，混合均勻顯色15 min，在536 nm波長處測定吸光度A1，將樣品換為乙醇其他條件不變測的吸光度為A0，無水乙醇代替顯色劑測定吸光度A2，亞硝酸基清除率的計算同公式（4）。

2 結果與分析

2.1 大孔吸附樹脂的篩選

對X-5、AB-8、D101、S-8、NKA-9 5 種樹脂的吸附解吸效果進行比較，篩選最適樹脂。所用的5 種樹脂的物理性質見表1，這5 種大孔樹脂對于梨幼果多酚的吸附率和解吸率的結果如圖1所示。

表 1 5 種大孔樹脂的物理特性Table 1 Physical properties of fi ve macroporous resins

圖 1 5 種大孔樹脂的吸附率和解吸率Fig. l Adsorption and desorption rates of 5 macroporous resins

從圖1可以看出，吸附率最高的是S-8樹脂，為85.13%，NKA-9樹脂次之；S-8樹脂雖然吸附率很高，但是解吸率很低，僅為53.89%，D101樹脂和NKA-9樹脂的解吸率都較高。綜合考慮，NKA-9樹脂的吸附率和解吸率都較高，故NKA-9樹脂為純化梨幼果多酚的最適樹脂。

以上結果說明大孔樹脂吸附性能的好壞與樹脂的極性有較大關系。李鴻江等[19]指出極性樹脂對極性物質有較強的吸附效果。S-8和NKA-9樹脂都是極性樹脂，所以容易吸附極性的梨幼果多酚。艾志錄等[20]研究發現對于蘋果多酚的純化效果最佳的也是NKA-9樹脂。

2.2 NKA-9樹脂的靜態吸附解吸分析

2.2.1 NKA-9樹脂的靜態吸附曲線

圖 2 NKA-9樹脂靜態吸附曲線Fig. 2 Static adsorption curve of NKA-9 resin

如圖2所示，隨著時間的延長樹脂的吸附率變化越來越小，逐漸趨于平緩，2 h后NKA-9樹脂的吸附基本達到飽和，即使時間繼續延長，吸附率也幾乎不再變化，所以NKA-9大孔樹脂的靜態吸附時間為2 h。

圖 3 NKA-9大孔樹脂靜態解吸曲線Fig. 3 Static desorption curve of NKA-9 resin

2.2.2 NKA-9樹脂的靜態解吸曲線如圖3所示，在2 h時NKA-9樹脂基本已經達到解吸平衡，解吸時間繼續延長解吸率也幾乎不再變化，此時其解吸率可以達到74.45%。所以NKA-9大孔樹脂的靜態解吸時間為2 h。

2.2.3 pH值對吸附效果的影響

圖 4 pH值對吸附效果的影響Fig. 4 Effect of pH on adsorption eff i ciency

如圖4所示，溶液的酸性或堿性太強都會降低NKA-9樹脂對梨幼果多酚的吸附率。在pH值較低時，NKA-9樹脂對多酚的吸附率逐漸增加，pH 5時吸附率最大，達到85.19%；pH＞5以后，溶液堿性越來越強，NKA-9樹脂對多酚的吸附率下降，所以最適pH值為5。

pH值不同之所以能夠導致樹脂吸附效果的不同，是由多酚類物質的酸堿性造成的。在酸性條件下，樹脂對于酸性物質的吸附效果好；在堿性溶液中，樹脂對于堿性物質的吸附效果好[21]。梨幼果多酚中由于存在咖啡酸、綠原酸等酚酸類物質，所以其溶液呈弱酸性，在弱酸性條件下梨幼果多酚多數呈分子態，且形成共價結構，以氫鍵的方式與樹脂結合吸附，故在pH值為5時吸附效果較好。

2.2.4 上樣液質量濃度對吸附效果的影響

將不同質量濃度梨幼果多酚粗提液充分振蕩吸附。上樣液質量濃度對樹脂吸附效果的影響如圖5所示。當上樣液質量濃度較低時，NKA-9樹脂對梨幼果多酚的吸附率逐漸增加，當質量濃度達到2.0 mg/mL時吸附率最大，為51.78%；質量濃度超過2.0 mg/mL后，吸附率幾乎不再變化，所以2.0 mg/mL為最適的質量濃度。當多酚溶液質量濃度較低時，被樹脂吸附的多酚分子較少，不能使樹脂達到飽和狀態，增大多酚溶液的濃度，可以使更多的多酚分子與樹脂接觸，從而被其吸附[10]。但是隨著多酚溶液的質量濃度增大，樹脂吸附的多酚分子越來越多最終達到飽和，再增大多酚的質量濃度，其吸附率也不會改變，反而會出現沉淀，阻塞樹脂。

圖 5 上樣液質量濃度對吸附效果的影響Fig. 5 Effect of sample concentration on adsorption eff i ciency

2.2.5 上樣速率對吸附效果的影響

圖 6 上樣速率對吸附效果的影響Fig. 6 Effect of sample loading fl ow rate on adsorption eff i ciency

如圖6所示，上樣速率為0.5 mL/min時的吸附率與1.0 mL/min時的吸附率差距不大，隨后上樣流速逐漸加快，其吸附率反而呈下降趨勢。當上樣速率較慢時，多酚分子能有更多的時間與樹脂接觸，使其被充分吸附，增加吸附率。隨著上樣速率的加快，多酚分子與樹脂接觸的時間越來越短，還來不及被吸附，就已經通過了樹脂，其吸附率迅速下降[22]。但是上樣速率過慢會延長工作時間，增加成本。綜合考慮以上因素，本實驗選擇上樣速率為1.0 mL/min。

圖 7 洗脫劑種類對靜態解吸率的影響Fig. 7 Effect of eluent type on static desorption eff i ciency

2.2.6 洗脫劑種類對解吸率的影響由圖7可知，洗脫劑的種類不同，解吸效果也不同，乙醇的解吸率顯著高于甲醇和乙酸乙酯（P＜0.05），洗脫效果最好，所以選擇乙醇為洗脫劑。梨多酚是混合物，含有很多成分，各成分極性不同，所以不同極性溶劑對多酚物質的解吸率不同。

2.2.7 洗脫劑體積分數對解吸率的影響

圖 8 乙醇體積分數對靜態解吸率的影響Fig. 8 Effect of ethanol concentration on static desorption eff i ciency

如圖8所示，當乙醇體積分數小于70%時，其解吸率逐漸增大。當乙醇體積分數達到70%時解吸率最高為

92.95 %；隨后乙醇體積分數再增大，其解吸率反而下降。梨幼果多酚與樹脂間形成氫鍵從而被吸附，乙醇體積分數增大，會增強對氫鍵的破壞作用，使多酚類物質被洗脫下來[23]。但是隨著乙醇體積分數的增加，其中含有的水分越來越少，一些水溶性多酚類物質不能被溶解[24]，

所以解吸率降低。因此70%的乙醇溶液為梨幼果多酚的最佳解吸劑。

2.2.8 洗脫劑洗脫流速對解吸效果的影響

圖 9 乙醇洗脫流速對解吸效果的影響Fig. 9 Effect of ethanol fl ow rate on desorption eff i ciency

如圖9所示，當洗脫流速為1.0 mL/min時其解吸率最高，為91.8%；當洗脫流速超過1.0 mL/min時，繼續加快流速，解吸率開始下降。洗脫流速較慢時，解吸液與樹脂接觸充分，能夠更好地破壞氫鍵，使多酚類物質被解吸出來。隨著洗脫流速的加快，洗脫液與樹脂接觸的時間縮短，使得一部分多酚類物質來不及被解吸出來，所以解吸率降低[25]。所以選擇1.0 mL/min做為解吸流速。

2.2.9 NKA-9樹脂對梨幼果多酚的純化效果

取梨幼果多酚粗提液及在最優條件下純化的精提液進行冷凍干燥，得到粗提物與純化物的粉末。分別將兩種粉末配成溶液，測定其質量濃度，計算多酚純度，發現粗提物純度為6.23%，而純化物可達到30.68%，純度提高5 倍。

2.3 梨幼果多酚的抗氧化性

2.3.1 梨幼果多酚的總抗氧化能力

圖 10 梨幼果多酚的總抗氧化能力Fig. 10 Total antioxidant capacity of polyphenols from young pear fruits

抗氧化物在酸性溶液中可以將Fe3＋-TPTZ還原成藍色的Fe2＋-TPTZ，然后在593 nm波長處測定其吸光度，就能得到被測液的總抗氧化能力[26]。梨幼果多酚粗提物、純化物和VC的總抗氧化能力如圖10所示，隨著多酚質量濃度的增大，吸光度一直在增加，說明多酚質量濃度越高總抗氧化能力越強。純化物的總抗氧化能力低于VC，高于粗提物。梨幼果多酚經NKA-9樹脂純化后，總抗氧化能力增強。

2.3.2 梨幼果多酚對DPPH自由基的清除效果

圖 11 梨幼果多酚對DPPH自由基的清除效果Fig. 11 DPPH radical scavenging capacity of polyphenols from young pear fruits

多酚清除DPPH自由基的原理：多酚類物質可以與DPPH自由基中存在的單電子配對，使其被還原，減弱其紫色醇溶液的顏色，然后在517 nm波長處測定其吸光度，吸光度變化越大則其清除能力越強[27]。由圖11可知，梨幼果多酚粗提物、純化物和VC都有清除DPPH自由基的能力，VC的清除效果最好，多酚純化物次之，多酚粗提物的效果最差。而且多酚的質量濃度越大，對DPPH自由基的清除效果越好。梨幼果多酚經樹脂純化后，對DPPH自由基的清除效果增強。

2.3.3 梨幼果多酚對ABTS＋·的清除效果

圖 12 梨幼果多酚對ABTS＋·的清除效果Fig. 12 ABTS radical scavenging capacity of polyphenols from young pear fruits

ABTS與氧化劑反應會變成ABTS＋·自由基（藍綠色），多酚類物質會將ABTS＋·還原成無色的ABTS，在734 nm或405 nm波長處測定其吸光度。吸光度變化越大，其清除能力越強。由圖12可知，梨幼果多酚粗提物、純化物和VC清除ABTS＋·的效果都很顯著，多酚純化物的清除率高于VC和多酚粗提物，最高能夠達到90%

以上，其清除效果最好。

圖 13 梨幼果多酚對亞硝酸基的清除效果Fig. 13 Nitritel scavenging capacity of polyphenols from young pear fruits

2.3.4 梨幼果多酚對亞硝酸基的清除效果梨幼果多酚粗提物、純化物和VC對亞硝酸基的清除效果如圖13所示，VC的清除效果高于多酚粗提物和純化物；多酚質量濃度越高，對亞硝酸基的清除能力越強。梨幼果多酚經NKA-9樹脂純化后對亞硝酸基的清除效果更佳。

2.3.5 IC50值法比較樣品的抗氧化活性

表 2 3 種樣品在不同抗氧化方法下的IC50值Table 2 IC50values of three samples in different radical scavenging assays

IC50可以用來判斷樣品的抗氧化活性，該值表示當清除率達到50%時所對應的樣品濃度。結果如表2所示，梨幼果多酚經過純化后，抗氧化活性顯著增強，在這4 種方法中，純化物的清除能力均強于粗提物；在總抗氧化能力上，多酚純化物能力比VC強，在DPPH自由基、ABTS＋·和亞硝酸基的清除能力上，多酚純化物與VC相差不多，所以說明梨幼果多酚具有抗氧化活性。

3 討論與結論

目前關于多酚類物質的純化，在蘋果、葡萄和茶等物種中研究較多，在梨上卻鮮有報道。賀金娜等[28]對蘋果多酚的純化條件進行了優化，得到的結果為：上樣質量濃度1.46 mg/mL、上樣pH 5.50、上樣速率1.25 mL/min，洗脫劑種類丙酮、洗脫劑體積分數90%、洗脫速率1 mL/min；袁林穎等[29]研究發現，茶多酚純化的最優條件為：上樣質量濃度0.46 mg/mL、上樣流速1.4 mL/min、溶液pH 3.0、洗脫劑種類乙醇、洗脫劑體積分數80%、洗脫流速2.0 mL/min。這2 個研究結果與本實驗結論都不相同，這可能是由于物種不同，其中含有的多酚類物質種類不同所致。

梨中含有兒茶素、沒食子酸等多酚類物質，所以具有抗氧化活性。趙金偉等[30]研究證明蘋果梨酚類物質可以有效清除羥自由基、DPPH自由基和亞硝酸基；李麗梅等[31]研究發現，梨的果皮、果肉、果心中含有的多酚類物質對DPPH自由基和羥自由基都有清除能力。他們的研究結果和本實驗結果相符。但是他們所研究的是梨多酚的粗提物，其中所含的雜質較多，對多酚抗氧化活性的測定會有影響，本實驗將梨多酚粗提物進行純化，對粗提物和純化物的抗氧化活性進行比較，發現梨多酚純化后其抗氧化活性顯著增強。

本實驗通過對X-5、AB-8、D101、S-8、NKA-9 5 種樹脂的吸附率和解吸率進行比較，篩選出吸附率和解吸率都較高的NKA-9樹脂為純化梨幼果多酚的最佳樹脂；通過靜態和動態吸附實驗得到NKA-9大孔樹脂對梨幼果多酚進行純化時，最適宜的條件為：將2 mg/mL的多酚提取液調至pH值為5.0，設定進樣流速為1 mL/min，充分吸附，然后用70%的乙醇為洗脫液進行動態洗脫，洗脫流速為1 mL/min；經過NKA-9樹脂在最優工藝條件下的純化，梨幼果多酚的純度從6.23%提高到了30.68%，純度提高5 倍；梨幼果多酚粗提物和純化物都有很強的總抗氧化能力，對DPPH自由基、ABTS＋·、亞硝酸基都有清除作用，經NKA-9樹脂純化后的梨幼果多酚抗氧化能力明顯增強。

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Purif i cation and Antioxidant Activity of Polyphenols from Young Pear Fruits

ZHU Jie, WANG Hongbao, KONG Jiajun, SONG Xiaofei, TAO Shutian*
(College of Horticulture, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China)

The polyphenols from young pear fruits were purif i ed by 5 kinds of macroporous adsorption resins, and their antioxidant activity was determined. The results indicated that NKA-9 resin had better adsorption and desorption properties than four other resins. Therefore, it was the most suitable resin to purify polyphenols from young pear fruits. The optimum conditions for purification were as follows: after pH adjustment to 5.0, the polyphenol at 2 mg/mL was passed through the resin at a fl ow rate of 1 mL/min, followed by desorption with 70% ethanol at a fl ow rate of 1 mL/min. Under these conditions, the purity of the polyphenols from young pear fruits increased from 6.23% to 30.68%. Both the crude and purif i ed samples had the ability to scavenge 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), 2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate) (ABTS) radicals and nitrite, with IC50values of 151.07, 152.48 and 490.35 mg/mL versus 122.12, 130.78 and 392.09 mg/mL, respectively. Conclusively, the antioxidant capacity of the purif i ed polyphenols was better than that of the crude sample.

macroporous resins; polyphenols from young pear fruits; purif i cation; antioxidation

10.7506/spkx1002-6630-201705003

S661.2

A

2016-04-08

國家自然科學基金面上項目（31372044）；國家自然科學基金青年科學基金項目（31000888）；

國家高技術發展研究計劃（863計劃）項目（2011AA10020602）

朱潔（1992—），女，碩士研究生，研究方向為果實生理品質。E-mail：458121514@qq.com

*通信作者：陶書田（1980—），男，副教授，博士，研究方向為果品品質發育生理。E-mail：taost@njau.edu.cn