保存期末紅細胞冰凍保存效果體外評估

黃輝，鄒麗敏，楊南，杜忻

(南昌市血站，江西南昌330025)

保存期末紅細胞冰凍保存效果體外評估

黃輝，鄒麗敏，楊南，杜忻

(南昌市血站，江西南昌330025)

目的探討應用冰凍技術將離體后較長時間的紅細胞的保存期延長至數年，確保解凍后紅細胞的質量，提高輸血的應急能力。方法收集血站2015年10月至2016年2月CPD保存液保存了34d的紅細胞（2u/袋）30袋，利用全自動細胞處理系統(Haemonetics ACP215)對紅細胞進行冰凍及解凍復蘇操作，比較產品與《全血與成分血質量要求》的差異性。結果利用全自動細胞處理系統(Haemonetics ACP215)對紅細胞進行冰凍及解凍操作，終產品在外觀、容量、血紅蛋白含量、游離Hb、甘油殘留量、白細胞殘留量和細菌培養結果等方面與標準無顯著差異。結論無論從延長紅細胞保存時間，還是提高輸血應急能力，冰凍紅細胞都起到了實效。

全自動細胞處理系統;保存期末；冰凍保存;解凍復蘇；質量評價

正常紅細胞的保存期在35d以內，應用冰凍技術可以將紅細胞的保存期延長到數個月甚至數年[1]。但目前該技術僅限于稀有血型的保存，且要求在離體后6d內的血液進行冰凍。我們研究利用全自動細胞處理系統(Haemonetics ACP215)對保存期末的普通血型紅細胞進行冰凍保存，檢測紅細胞解凍后的質量指標，從而保證在延長紅細胞保存時間的情況下制備出符合國家質量要求的冰凍及解凍去甘油紅細胞，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 血液來源濾白懸浮紅細胞30袋(2u/袋)，來自于南昌地區無償獻血中健康的Rh陽性獻血員30人，按獻血規范要求完成血液的檢測與入庫。將采集到的紅細胞用CPD保存液懸浮至34d時制成冰凍紅細胞，保存360d以內，解凍進行質量評估。

1.2 主要材料57%甘油(160ml，北京博德桑特輸血器材公司)、9%NaCl(80ml，山東威高集團醫用高分子制品股份有限公司)，0.9%NaCl(1000ml，山東威高集團醫用高分子制品股份有限公司)，轉移袋(1000ml，四川南格爾生物醫學股份有限公司)，全自動血細胞處理系統配套的甘油化耗材(REF 225)和去甘油化耗材(REF 236)(美國血液技術公司)。所有材料均在有效期內使用。

1.3 主要設備全自動細胞處理系統(Haemonetics ACP215)(美國血液技術公司)，-80℃三洋冰箱M DF-2136(日本三洋公司)，CRYOFUGE6000i離心機(德國賽黙飛世爾科技公司)，HTR-Ⅱ冰凍血漿融化箱(濰坊漢唐生物工程有限公司)，CompoDock無菌接口機(費森尤斯卡比)，COULTER Ac.T 5diff血液分析儀（美國），BD BACTEC 9120全自動血液培養儀（美國），752紫外可見分光光度計（上海）。

1.4 實驗步驟

1.4.1 冰凍紅細胞制備將保存期末的濾白懸浮紅細胞的血袋與1000ml轉移袋用無菌接管機相連接，然后將血液轉移至空袋中。將濾白懸浮紅細胞袋與ACP-215配套的REF 225（甘油化耗材）用無菌接管機相連接。耗材REF 225另一端與復方甘油袋穿刺連接。按照ACP-215設備要求安裝。以先慢后快的速度滴入320ml甘油保存液入2U濾白懸浮紅細胞，同時水平勻速振蕩，滴完全部的甘油保存液后，水平靜置血袋30min。2450r/min 4℃離心10min，去上清，甘油化細胞完成。加貼標簽，登記入庫，放置-80℃以下冰箱保存。

1.4.2 低溫保存保存于-80℃冰箱中，冰箱設有溫度監控器，24h實時監控保證溫度在-80℃以下。

1.4.3 解凍復蘇甘油化細胞從冰箱取出后，直接放入37～40℃循環水浴中融化。稱解凍紅細胞重量(凈重)。將甘油化細胞與去甘油化耗材(REF 236)連接。安裝到ACP-215機器上。滴加9%NaCl 160ml（2U），50ml/min，同時搖勻，水平靜置1min，再加0.9%NaCl 1600ml，洗滌7次。讓紅細胞逆流入輸血管內，熱合三段血辮做交叉配血標本。血袋貼上標簽，登記入庫，放置4℃冰箱保存好24h內供臨床輸用。

1.4.4 質量檢測按COULTER Ac.T 5diff血液分析儀說明書要求記錄紅細胞Hb和白細胞殘留量；按752紫外可見分光光度計說明書要求檢測甘油殘余量。

2 結果

冰凍解凍去甘油紅細胞30袋(2u/袋)檢測結果見表1。

3 討論

正常采集的紅細胞用CPD保養液懸浮僅僅保存35d[2，3]。采用冰凍紅細胞保存技術后，血液的保存期限大幅延長[4]。可以將平時采集到的富余血液冰凍保存下來；遇到患者需要緊急用血時，將適合的血液解凍提供給臨床，緩解了旺季采血過多造成血液過期報廢、淡季缺血影響臨床輸血治療的問題，保障臨床血液供應。冰凍紅細胞在解凍洗滌過程中去除了白細胞的數量，因而大大減少了因輸同種異體血引起的免疫反應及白細胞相關性病毒傳播的發生率，并且也減少了輸血免疫抑制的發生。在條件允許的情況下，可在紅細胞冰凍保存6個月后對獻血者進行輸血傳播疾病的復檢以規避經血傳播疾病的發生。

同時，去甘油洗滌也去除了細胞代謝產物及抗凝劑，大量輸注亦不會出現酸中毒及高鉀血癥，同時洗滌減少了引起患者產生免疫調節效應的生物活性物質，因此減少了輸血不良反應[5，6]。

使用ACP215全自動細胞處理系統制備的冰凍紅細胞，在保存期限360d以內解凍復蘇，結果顯示，復蘇后每袋成品血的紅細胞回收率，游離血紅蛋白濃度，溶血率，甘油殘余量，細菌培養試驗等質控指標[7-10]均符合《全血及成分血質量要求》[11]，沒有出現極值不符合《全血及成分血質量要求》的情況。

與國內外多家血液機構用ACP 215全自動細胞處理系統進行冰凍及解凍去甘油紅細胞的制備效果相比，結果一致。ACP 215全自動細胞處理系統可以實現除更換液體外的冰凍紅細胞的全自動制備[12，13]，最大程度減少人為差錯事故的發生，保證了產品質量；減少了勞動強度，可做到一人多機同時操作。克服了手工洗滌操作步驟多、時間長、效率低、人為因素干擾大等諸多問題。

結果表明，相比于正常保存的濾白懸浮紅細胞，冰凍解凍去甘油紅細胞在各項指標上均與之相似，能起到相似的臨床作用。但因去甘油過程會損失部分紅細胞，一般認為每提升Hb10g/L需要輸注2或3個單位冰凍解凍去甘油紅細胞[14，15]。

本次冰凍紅細胞保存效果的體外評估效果良好，所有解凍紅細胞質量評估均符合全血及成分血質量要求。下一步我們將與臨床合作，向醫院臨床提供冰凍解凍去甘油紅細胞，根據臨床反饋評估冰凍解凍去甘油紅細胞的臨床效果，進一步推動冰凍解凍去甘油紅細胞的臨床應用。

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R457.1+2

A

1674-1129(2017)03-0449-03

2017-04-01；

2017-05-11)

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.03.055