豬細小病毒病的綜合防治

張穎/天津市動物疫病預防控制中心

豬細小病毒病的綜合防治

張穎/天津市動物疫病預防控制中心

豬細小病毒病（porcine parvovirus,PPV）是引起豬繁殖障礙性疾病之一。該病主要特征為母豬孕前期感染病毒后，經胎盤使胚胎或胎兒受到侵襲，引起母豬流產、死胎、胎兒畸形、胎兒木乃伊化及不孕等，同時還可引起仔豬的皮炎和腹瀉。1966年，德國人Mayr和Mahnel在進行豬瘟病毒組織培養時首次發現了細胞內潛伏感染的病毒，并隨后自一些正常的豬腎細胞中發現了直徑22 nm～23 nm的病毒粒子，經核酸鑒定為DNA。1967年，英國人Cartwringht和Huck等首次自不孕母豬、流產胎兒、死胎中分離到PPV，并證實了該病原的致病作用。隨后該病在比利時、美國、日本、荷蘭、澳大利亞、芬蘭、法國、加拿大等國都相繼報道。

在國內，潘雪珠等于1983年首次分離到豬細小病毒，隨后國內其它學者相繼在四川、廣西、江西、黑龍江等地分離到病毒，這表明豬細小病毒病已呈全國性分布。上世紀80年代到90年代中期，國內豬群PPV感染率極高，感染率普遍在60%以上，個別省份甚至達87.5%，隨著疫苗的大量投入使用，使得PPV得到了有效的控制，到上世紀90年代中期，豬群的發病率顯著下降。但近幾年來，該病感染率和發病率又呈不斷升高的趨勢，且該病毒除能單獨引起豬繁殖障礙外，還能與在豬圓環病毒Ⅱ型（porcine circovirus type 2，PCV2），可引起斷奶仔豬多系統衰竭綜合征（PMWS），即協同作用引起臨床型豬繁殖障礙性疾病。

一、病原學

豬細小病毒屬于細小病毒科、細小病毒屬，病毒粒子呈圓形或六角形，直徑約20 nm，無囊膜，為單鏈線狀DNA，可在豬腎、豬睪丸細胞等豬原代細胞及PK15、ST、IBRS2等細胞中生長。目前國內PPV只有一個血清型。

二、流行病學

本病主要來自感染PPV的母豬，感染母豬的糞、尿及其分泌物可排毒，感染的公豬可從其精液、精索、附睪中分離出PPV。感染PPV母豬可通過胎盤垂直傳播，所產的死胎、仔豬中均含有大量的病毒；大多數母豬若在懷孕前已受到自然感染，而產生主動免疫力，甚至可終生免疫，并通過哺乳使仔豬從初乳中獲得高滴度的PPV抗體；若在懷孕前沒有產生免疫力的后備母豬，被感染和形成繁殖障礙的幾率很高；感染PPV公豬往往通過配種將PPV傳染給易感母豬；公豬、育肥豬和母豬可通過污染的飼料、環境、用具等經呼吸道、消化道感染；另外，鼠類也能傳播PPV。

當前豬細小病毒病已在世界各地普遍流行，尋找陰性豬群已比較困難。近些年，隨著集約化的發展，發病的季節性越來越不明顯，即一年四季均可發生。PPV的繁殖障礙性疾病已不局限于初產母豬，臨床病例發現，在3～4胎后的死胎中仍能分離到該病毒。隨著豬藍耳病在全世界的流行，加之圓環病毒病的出現和興風作浪，更多的人們將注意力轉向了藍耳病和圓環病毒病，往往疏忽了PPV這個導致母豬繁殖障礙及仔豬死亡的主要病原，掩蓋了PPV對母豬繁殖障礙和仔豬死亡的危害，據報道，全國范圍內PPV陽性感染率較高，且西南地區、華南地區、華北地區的陽性感染率顯著高于其他地區。

三、臨床癥狀

PPV感染對于母豬主要是引起繁殖障礙，可能表現為再度發情，或不發情、不產仔，或產仔少，或產出木乃伊胎。唯一的癥狀是在懷孕的中期或后期，胎兒死亡，胎水被重吸收，母豬的腹圍減小，有時可表現不孕、流產、死胎、新生仔豬死亡和產弱仔。具體表現主要取決于在妊娠期的哪個階段感染該病毒。若母豬在妊娠前期感染PPV，則引起胚胎或胎兒死亡，并被母體完全吸收；若妊娠50 d左右感染PPV，病毒可通過胎盤，選擇性地殺死胎豬，而妊娠70 d時感染PPV，大多數胎豬的免疫系統已經開始形成，已能夠對病毒產生保護性免疫應答并產生抗體。該病毒對初產母豬的危害尤為明顯。對于存活的帶毒仔豬，可引起皮炎、腸炎性腹瀉、呼吸道癥狀。

四、病理變化

在非妊娠母豬及懷孕母豬感染PPV時，均看不到病理變化，但胎豬呈現出不同程度的發育不良，隨著體腔內漿液性滲出物的淤積及血液滲入組織，胎兒出現淤血、水腫和出血，胎兒最終死亡，隨著死胎逐漸變黑及體液的重吸收，呈現“木乃伊”化。

五、診斷

（一）病原學檢測

最初，以腸系膜淋巴結和肝臟進行病毒分離鑒定在PPV診斷中發揮了重要作用，但檢測結果易受胎兒死亡時間的影響，即PPV感染力隨胎兒死亡時間的延長而降低，而且分離病毒過程繁瑣，時間長，易受其他病毒干擾，因此，在臨床應用上受限。

（二）血清學診斷

1.血凝抑制試驗。用于檢測或定量分析體液PPV抗體。操作簡便、快速，適合大量樣本的檢測，在基層獸醫中廣泛使用，但是不能區分滅活疫苗和野毒感染，而且被檢血清需加熱滅活，然后用紅細胞和高嶺土吸附以減少血清中非特異性血凝抑制因子。

2.血清中和試驗。通過檢查細胞核內包涵體、感染細胞的熒光和細胞培養液中血凝素是否消失或減少來確定病毒的感染性是否被中和。曾有報道，病毒中和試驗要比血凝抑制試驗更敏感，但操作要比血凝抑制試驗復雜。

3.酶聯免疫吸附試驗。1989年Westenbrink F等建立，經大量試驗試驗證明，利用雙抗體夾心法檢測PPV，具有較高的特異性，操作簡便，便于基層的快速診斷。

4.乳膠凝集試驗。該方法在我國率先成功地用于PPV的檢測，不需特殊設備，在現場數秒或3～5 min即可得出結果，適合基層診斷，但只能檢測IgM用于PPV定性診斷，不能進行抗體滴度的檢測。

（三）分子生物學診斷

1.聚合酶鏈式反應（PCR）。自1985年Mullis發明該技術，已被作為一種快速、高效、敏感性高、特異性強的技術廣泛運用于病原微生物的診斷，并延伸出套式PCR、熒光定量PCR等，其中熒光定量PCR比常規PCR的檢出率更高。

2.核酸探針技術。具有快速、敏感、特異性強等特點，適用于疾病的早期診斷和類癥鑒別診斷，但該方法對操作要求高，只適用于實驗室監測。

3.基因芯片技術。該技術是以核酸雜交與測序為基礎，在保持基因序列的特異性的條件下，能夠快速鑒別大量基因序列。具有特異性強，靈敏，快速等優點，但是在制備診斷基因芯片的過程中比較復雜，成本高，不利于基層人員使用。

4.環介導等溫擴增技術（LAMP）。該技術是2000年由日本學者建立，利用兩對引物在鏈置換DNA聚合酶的作用下，等溫擴增靶序列，并在反應體系中加入SYBR Green I，可直接肉眼觀察反應結果。用時短，對設備要求低，非常適合基層和現場使用，目前，該技術商品化的試劑盒已問世。

六、防治

（一）疫苗預防

1.滅活疫苗。1976年國外已有關于PPV滅活疫苗的研究報道，20世紀80年代，在美國、澳大利亞、法國等國家普遍使用。我國于1987年由潘雪珠等首次研制成功PPV滅活疫苗，以氫氧化鋁和油水乳劑為佐劑的效果較好，當前國內使用的是滅活疫苗，為了簡化免疫程序，降低臨床應激反應，豬細小病毒滅活多聯疫苗的使用比較廣泛，主要有豬細小病毒-豬偽狂犬病、豬細小病毒-乙腦病毒等二聯苗。

2.弱毒疫苗。目前的弱毒疫苗主要有NADL-2、HT株、HTSK-C株和N株，這些弱毒疫苗主要在國外應用。最早用于臨床的NADL-2弱毒株，是PPV強毒株在細胞上經連續傳50代以上致弱的，該毒株的VP2基因比強毒株NADL-8少300bp左右。經大量試驗證明，該毒株經口鼻接種后，不能通過胎盤感染胎兒，而經子宮接種，則造成胎兒死亡，因此，僅限非懷孕母豬使用。HT株是日本學者將豬細小病毒野毒株在豬腎細胞上低溫（30℃）連續傳54代產生，接種后可產生高低度的抗體，但不產生病毒血癥，HT-SK-C株是在豬腎細胞上培養并用紫外線照射后繼續傳代所得，安全性更好，但由于PPV強毒株的大量存在，有病毒重組及毒力反強的可能，因此弱毒苗的應用受到一定的限制。

3.基因工程活病毒載體疫苗。病毒載體疫苗與弱毒疫苗相似，不僅能誘導強而持久的免疫反應，又比傳統疫苗具有更高的安全性，但生產技術復雜，成本高，目前仍多處于實驗室研究階段，華中農大陳煥春院士將豬細小病毒VP2基因插入豬偽狂犬病毒，構建重組偽狂犬病毒TK-/gG-/VP2+株及二價基因工程疫苗，于2007年通過了湖北省科技廳組織的技術鑒定，并獲得國家發表明專利及農業部轉基因生物安全證書。

（二）加強管理

1.定期對豬群進行血清學監測，發現可疑豬，進行淘汰，并對其豬舍、飼具、車輛等進行徹底消毒。

2.堅持自繁自養，引進種豬要進行PPV的血凝抑制試驗，陰性才可引進。

3.改善飼養環境，驅除和消滅鼠類，嚴禁飼養貓、狗及鳥。

（略）