豬瘟的實驗診斷和防控措施

于艷萍

（黑龍江省動物衛生監督所，黑龍江哈爾濱 150001）

豬瘟的實驗診斷和防控措施

于艷萍

（黑龍江省動物衛生監督所，黑龍江哈爾濱 150001）

豬瘟是由黃病毒科瘟病毒屬的豬瘟病毒（HCV）引起豬的一種急性疫病。急性病例表現為發病急、高熱稽留和敗血癥；慢性病例表現為纖維素性壞死性腸炎。隨著飼養管理方式的變化和飼養管理技術水平的提高，各種疫（菌）苗的廣泛使用，豬瘟的發生和流行也發生了較大的變化，出現了非典型豬瘟、溫和型豬瘟，并常以散發流行，流行時還常與其他病原體一起形成混合感染或繼發感染。使豬瘟特征性臨床癥狀現地不明顯，并且常缺乏特征性病理變化。

豬瘟；實驗診斷；防控措施

1 實驗室診斷

豬瘟的實驗室診斷方法有本種動物接種試驗、雞新城疫病毒強化試驗、家兔接種驗、間接血凝試驗及其抑制試驗、反向間接血凝試驗、中和試驗、瓊脂擴散試驗、熒光抗體試驗、酶標抗體試驗、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）等。其中檢查病毒抗原的本動物種試驗，雖然確切而可靠，但手續繁雜、所需時間較長、費用也較高，如非特別需要一般很少進行。

（1）病料采集：采取病豬的扁桃體、脾、淋巴結（置冰瓶內送檢，不加固定劑）。

（2）試驗方法：①免疫熒光染色法：該法是用來檢測組織材料中是否存在有豬瘟病毒（抗原）的方法。此法約3h即可作出診斷，歐美一些國家已規定為豬瘟的標準診斷法。免疫熒光染色法又分為直接法和間接法兩種。方法一：直接法。此法可因材料的處理方法不同而有兩種實驗程序。一是冰凍切片或觸片，經丙酮固定15min、PBS液漂洗數次、以熒光抗體（市場有供應，如購不到也要自己制作）染色（37℃，30min）、以PBS液浸洗2～3次、緩沖甘油封片。以熒光顯微鏡檢查，如見上皮細胞和淋巴細胞內有亮綠色熒光，即為陽性；呈青灰色或橙色無熒光者，則為陰性。二是將所取病豬組織先做成無菌懸液，接種于豬腎細胞單層培養物上，繼續培養24～72h，取出后用熒光抗體染色，熒光顯微鏡檢查，如見有亮綠色熒光斑，為陽性；反之為陰性。方法二：間接法。先用抗豬瘟抗體免疫羊，制備羊抗豬免疫球蛋白，用熒光素標記做成羊抗豬熒光抗體。將病豬的組織切片或觸片分為兩組，對照組用正常豬血清，實驗組用抗豬瘟血清（1：4倍稀釋）處理30min，洗后，兩組同時用羊抗豬熒光抗體染色30min，漂洗、干燥、緩沖甘油封固，熒光顯微鏡下檢查，對照組無熒光，實驗組有熒光為陽性，均無熒光為陰性。

②雞新城疫病毒強化試驗：此法敏感性很高，幾乎能與易感豬接種法相比，故在日本已定為檢驗豬瘟病毒的標準方法。豬瘟病毒和雞新城疫病毒，單獨在豬睪丸細胞培養中均不產生細胞病變，但在接種豬瘟病毒3d后再接種雞新城疫病毒，不但可以產生明顯的細胞病變，并且可提高雞新城疫病毒的滴度。故可根據細胞病變的有無，間接地測知豬瘟病毒的存在。該強化試驗可被抗豬瘟血清所抑制，這種抑制作用除作上述試驗的對照組外，尚可用于豬瘟病毒的中和試驗。試驗方法：先將被檢材料接種于豬睪丸細胞培養物中，繼代適應后再接種106蝕斑成單位的新城疫病毒，37℃培養3d。根據是否出現細胞病變進行判定。同時應設對照組。若試驗組出現有明顯的細胞病變，而對照組沒有出現細胞病變，則表示有豬瘟病毒存在。

③家兔接種試驗：豬瘟病毒不使家兔發病，亦無體溫反應，但能使之產生免疫性；而豬瘟兔化弱毒苗能使家兔發生熱反應。試驗時以病豬組織懸液或血液，除菌后肌肉接種家兔兩只。7d后另取未注射病豬組織懸液的家兔兩只作為對照，試驗兔和對照兔同時靜脈注射豬瘟兔化弱毒苗。每6h測溫一次，連續3d。如實驗組不出現定型熱反應，而對照組出現定型熱反應，即為陽性；如兩組均出現定型反應則為陰性。

④酶聯免疫吸附試驗（ELISA）：豬瘟ELISA診斷試劑盒，中國獸藥監察所有供。該試劑盒用于檢測血清中的豬瘟病毒抗體，并且可以區分強毒（野毒）感染和弱毒（疫苗）免疫后所產生的抗體。操作方法按抗原說明書進行，若OD值≥0.5，判為豬瘟強毒抗體陽性；若OD值＜0.5，判為豬瘟強毒抗體陰性。該試劑盒是進行豬瘟抗體監測、了解豬群強毒感染狀況和豬瘟流行病學調查十分有效的診斷試劑盒。

⑤間接血凝試驗：用豬瘟病毒抗原致敏的醛化紅細胞，檢測血清中的抗體。當抗體滴度低于1：16時，應及時接種豬瘟弱毒苗。

2 治療方法

目前還沒有治療豬瘟的有效藥物，對貴重豬種在病的早期，可采用注射高免血清進行被動免疫來搶救。高免血清注射后沒有誘導期，可立即發揮作用，但存在免疫期短（約為兩周）和價格較高等問題。抗豬瘟血清的治療量為1.0ml/kg；豬瘟苗原血清為2～3.0ml/kg，可作靜脈或肌肉注射。為了促使豬只的早日康復可配合以對癥療法、支持療法等進行綜合性治療。同群的健康豬，可用抗豬瘟血清或豬瘟苗原血清作緊急預防接種，其劑量減半。

抗豬瘟血清生物藥廠很少生產，市場上一般購買不到，大、中型豬廠可以根據自身條件自己生產以備急用?？关i瘟血清的制備：挑選體重70～80kg，未經過任何疫（菌）苗接種的健康豬，隔離飼養。首先每頭豬接種豬瘟兔化弱毒疫苗2.0ml。10d后進行強化免疫，每頭豬接種豬瘟兔化弱毒疫苗10.0ml；10d后，每頭豬肌肉注射豬瘟血毒（豬血內加抗凝劑）50.0ml；再過10d，每頭豬肌肉注射豬瘟血毒200.0ml；再過10d，每頭豬肌肉注射豬瘟血毒400.0ml。在第4次攻毒后10～12d，由頸動脈采血，一次采完，并分離血清，此血清即抗豬瘟血清。若一時不用，可加0.01%硫柳汞防腐，分裝無菌瓶內，置4℃冰箱可保存2年。豬瘟苗原血清的制備：選用確知已經豬瘟兔化弱毒疫苗免疫過的健康豬，再用200頭份的豬瘟兔化弱毒疫苗強化免疫一次。經10～15d后，常規采血致死，按常規方法分離血清，加0.01%硫柳汞防腐，分裝無菌瓶內備用，置4℃冰箱內可保存2年。另外，患豬瘟痊愈豬的血清抗體滴度極高，也可收集保存備用。

3 預防措施

該病傳染性極強，死亡率甚高，一旦發生，就會導致嚴重損失。因此，平時應抓緊預防措施，杜絕該病的傳入；發生之后，應立即采取緊急防疫措施，盡快撲滅疫情。（1）捕殺病豬。病豬一般以屠宰為宜，因為經過治療，即使不死，也不易完全康復。從全局考慮，病豬存毒時間較長，保留病豬就等于保留傳染源，不利于撲滅豬瘟。（2）平時預防。養豬場應經常做好清潔衛生工作，定期進行消毒，禁止非工作人員進、出，管理人員和運輸車輛的進、出都應該進行嚴格消毒。（3）自繁自養。養豬場應貫徹自繁自養的方針，不從外地購入豬只。如確屬必需，則應到飼養管理水平較高，疾病控制嚴密的豬場購入，豬只入場后應隔離飼養2～3周，并進行嚴格檢疫，確認健康后方可并群飼養。（4）定期進行免疫接種。我國的兔化毒疫苗是全世界使用最廣、也是最優秀的疫苗，接種后1周可產生免疫力，免疫期持續1年以上。免疫接種不僅可保護接種豬不發生豬瘟，而且可以減少受HCV強毒攻擊時病毒的復制和向接觸豬的傳播。免疫接種應制定行之有效的免疫程序，在豬群免疫前，應對豬群進行抗體水平檢測，根據抗體水平來確定接種時機。門常平等的研究表明，母源抗體滴度為1：32～1：64，此時攻毒可獲得100%保護，當抗體滴度下降至1：16～1：32時尚能80%保護；當滴度下降至1：8時，則完全不能保護。一般認為，間接血凝試驗所測的血清抗體滴度低于1：16時，應及時進行免疫接種。為了克服體內尚存抗體的干擾，可適當加大免疫劑量。為了防止免疫接種后的免疫應答受到母源抗體抑制，仔豬出生后應立即接種豬瘟兔化弱毒疫苗，2h再讓仔豬吮吸初乳，這種哺乳前進行豬瘟兔化弱毒疫苗免疫接種的方法，有效地預防了豬瘟的發生，現以廣泛推廣應用。豬瘟免疫失敗時有發生，其中有許多是由于亞臨床感染豬瘟的懷孕母豬，病毒經胎盤感染胎兒所致，早期感染多發生流產；中后期感染則產弱仔，這些豬可終生帶毒，形成持續感染，增加了豬場豬瘟不穩定性。防止豬群亞臨床感染，可采用加大免疫劑量，母豬在配種前7～15d，一般以4頭份劑量進行強化免疫，可取得良好效果。（5）緊急免疫接種。豬瘟兔化弱毒疫苗，安全性很好，免疫原性極佳，接種后4～6d即可產生對豬瘟的免疫力。成豬的免疫期可達18個月，乳豬的免疫期可達6個月。近年來的生產實踐證明，在豬場發生豬瘟時，除病豬和潛伏期豬外，對無癥狀的豬以4～5頭份的豬瘟兔化弱毒疫苗進行緊急預防接種，可迅速撲滅疫情。進行緊急免疫接種時，應注意不得使用二聯或三聯疫苗，也不可應用加有氫氧化鋁膠等佐劑的稀釋液，因佐劑能抑制早期免疫力的產生。

[1] 袁學華.豬瘟的實驗室診斷及防控凈化[A].中國畜牧獸醫學會動物傳染病學分會豬病防控學術研討會[C].2008：112.

于艷萍（1978—），女，黑龍江省巴彥縣人，碩士，高級獸醫師，主要從事獸醫工作。