參知健腦膠囊單次灌胃對Beagle犬心血管和呼吸系統功能的影響

馬大勇++++++蔡舒婷++++++張斐姝++++++高強++++++馬克信+++++韓振蘊

[摘要] 目的 觀察參知健腦膠囊單次灌胃對Beagle犬心血管和呼吸系統功能的影響。 方法 參知健腦膠囊單次灌胃給予Beagle犬的試驗設供試品（50、200、800 mg/kg）3個劑量組和1個滅菌注射用水陰性對照組，每組6只動物，雌雄各半。給藥容量2.5 mL/kg，給藥后連續采集4 h動物血壓、心電、呼吸等各項指標的數據，并在檢測時間點-5、0（給藥結束）、15、30、60、90、120、150、180、240 min對上述各指標數據進行統計學分析和評估。 結果 供試品各劑量給藥組動物的心電圖各參數值（心率、P-R間期、QRS間期、QRS電壓、Q-T間期和QTc間期）與同一時間點陰性對照組比較，差異均無統計學意義（P > 0.05）。未見異常心電圖波形，未發現對心臟傳導有影響。供試品各劑量給藥組動物的收縮壓、平均動脈壓和舒張壓與同一時間點陰性對照組比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。各劑量給藥組動物的呼吸頻率和呼吸幅度與陰性對照組比較，差異均無統計學意義（P > 0.05）。 結論 在本試驗條件下，參知健腦膠囊單次灌胃給予Beagle犬在50、200、800 mg/kg劑量范圍內對動物的呼吸系統和心血管系統均無明顯影響。

[關鍵詞] 參知健腦膠囊；Beagle犬；單次灌胃；安全藥理學

[中圖分類號] R977 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）02（b）-0004-05

Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100040， China

[Abstract] Objective To observe the effects of single intragastric administration of Shenzhi Jiannao Capsules on the function of cardiovascular and respiratory systems in Beagle dogs. Methods The experiment of single intragastric administration of Shenzhi Jiannao Capsules for Beagle dogs were set up for 3 doses groups （50， 200， 800 mg/kg） of test samples and 1 negative control group of sterile water for injection， with 6 animals in each group， half male and female. The volume of administrated drugs was 2.5 mL/kg， after administration， the related data of blood pressure， electrocardiogram， breath and others was collected continuously for 4 h， and the data above at the time points of -5， 0 （end of administration）， 15， 30， 60， 90， 120， 150， 180， 240 min was taken statistical analysis and evaluation. Results The values of each electrocardiogram parameter （heart rate， P-R interval， QRS interval， QRS voltage， Q-T interval and QTc interval） in each dose group of test samples had no statistically significant differences compared with the negative control group of the same tine points （P > 0.05）. There were no abnormal electrocardiogram waveform and no effects on cardiac conduction. The systolic blood pressure， mean arterial pressure， diastolic blood pressure in each dose group of test samples had no statistically significant differences compared with the negative control group of the same time points （P > 0.05）. The respiratory frequency and breathing extent in each dose group of test samples had no statistically significant differences compared with the negative control group （P > 0.05）. Conclusion Under the condition of this experiment， single intragastric administration of Shenzhi Jiannao Capsules at the doses of 50， 200， 800 mg/kg for Beagle dogs has no obvious effects on the respiratory and cardiovascular systems.

[Key words] Shenzhi Jiannao Capsules； Beagle dogs； Single intragastric administration； Safety pharmacology

隨著腦血管病發病率的逐年增高，血管性癡呆（vascular dementia）的患病率也相應提高[1]，目前北京地區血管性癡呆的患病率達1.5%[2]。目前血管性癡呆的治療手段有限，西藥作用靶點單一，療效難以滿足患者的需求。發揮中醫藥多靶點優勢，優化組方配伍，開發有效治療血管性癡呆的現代中藥是擺在中醫藥工作者面前的一項重要課題。參知健腦膠囊由人參、知母、赤芍等藥物提取物按一定比例優化配伍而成[3]，具有扶正、通絡、解毒的功效，是以王永炎等提出的“正虛毒損絡阻”血管性癡呆創新病因病機理論為基礎研發而來[4-6]。本研究旨在觀察參知健腦膠囊單次灌胃對Beagle犬心血管和呼吸系統功能的影響，為本藥物的臨床應用提供可靠的安全藥理毒理學研究數據。現將試驗總結報道如下：

1 材料與方法

1.1 實驗藥物

參知健腦膠囊（批號：20100907），由北京中醫藥大學中藥學院提供，臨床擬用劑量：1.05 g/（人·d），口服，療程6個月；滅菌注射用水，500 mL/瓶，批號：20100901，由北京立時達藥業有限公司生產；戊巴比妥鈉，批號：100808，25 g/瓶，北京化學試劑公司德國進口分裝。

1.2 實驗儀器

MP150多導生理記錄儀，美國Biopac公司生產。

1.3 實驗動物

7～8個月普通級Beagle犬20只，實際使用18只，雌雄各半，雌性：6.70～8.23 kg，雄性：7.40～8.93 kg；由北京瑪斯生物技術有限公司提供，實驗動物質量合格證編號：0165147，動物生產許可證編號：SCXK（京）2011-0003。剩余2只未用動物分組結束后交給獸醫處理。

1.4 動物分組方法

采用區段隨機分組法，將動物分組，給出正式動物號，確定每組動物，并記錄每個正式動物號對應的ID號。

1.5 實驗設計

1.5.1 劑量設計 實驗動物分為4組，分別為陰性對照組和低、中、高劑量組，具體劑量設計見表1。

1.5.2 動物分組 首次試驗前1 d動物稱體重，進行心電圖檢測。將檢疫合格的18只動物分為3組（陰性對照組、中劑量組、高劑量組），每組6只動物，雌雄各半。陰性對照組動物試驗結束后，經過18～19 d麻醉藥物消除期，用于低劑量組試驗。見表2。

1.5.3 給藥途徑及方法 單次灌胃給藥。根據藥前測定體重用2 mL或20 mL的無菌注射器抽取所需溶液，用16號胃管經口灌胃給藥。給藥結束后再抽取1～2 mL/kg的滅菌注射用水沖洗灌胃，確保藥液灌入胃中。每只動物的給藥量根據藥前測量的體重計算。給藥容量為2.5 mL/kg。

1.5.4 藥物配制 陰性對照組：直接使用市售制劑，無需配制。給藥組：稱取適量的供試品，用滅菌注射用水溶解，配制濃度為20、80、320 mg/mL的供試品溶液。溶解后的供試品常溫保存。

1.5.5 觀測指標及頻率 心電指標：心率（次/min），P-R間期（s），QRS時限（s），QRS電壓（mV），Q-T間期（s）；血壓指標：收縮壓（kPa），舒張壓（kPa），平均動脈壓（kPa）；呼吸指標：呼吸頻率（次/min），呼吸幅度或潮氣量（mL）。考慮到前期藥代動力學實驗提示該藥半衰期約4 h，故檢測各指標4 h內變化情況，具體檢測時間點：-5、0（給藥結束）、15、30、60、90、120、150、180、240 min。

1.5.6 試驗步驟 試驗前動物稱體重，動物禁食17～18 h。試驗當天將動物用35 mg/kg的戊巴比妥鈉（可以根據犬的具體情況適當調整劑量）靜脈注射麻醉后固定。待角膜反射消失、四肢及腹部肌肉松弛，呼吸平穩認為麻醉適度，用麻醉導管經口腔進行氣管插管，手術分離股動脈，進行股動脈插管，聯接呼吸傳感器、血壓傳感器及心電極，觀察描記血壓、心電、呼吸各參數值。待基線平穩后，記錄動物各項指標藥前值，按上述設計給藥，連續采集給藥后4 h動物血壓、心電、呼吸等各項指標的數據，并在檢測時間點-5、0、15、30、60、90、120、150、180、240 min進行標記。在試驗過程中，認真觀察動物的臨床癥狀，及時記錄陰性對照組及給藥組試驗期間動物的血壓、心電、心率、心律的變化及呼吸頻率和呼吸幅度等各項指標的變化及臨床癥狀，記錄每次給予麻醉藥的量和時間，異常情況要進行詳細描述。

1.6 統計學方法

采用SPSS 13.0 統計軟件進行統計處理。計量資料以均數±標準差（x±s）表示，Q-T間期使用QTcF校正進行分析。QTc Fridercia'rate校正公式=QT/RR1/3。所有檢測數據統計分析采用雙尾檢驗，以P < 0.05為差異有統計學意義。采用Leneve test進行方差齊性檢驗，如果方差齊（P > 0.05），采用單因素方差分析（ANOVA）進行統計分析；如果方差不齊（P < 0.05），用Kruskal-Wallis檢驗。供試品組均與陰性對照組比較，分析時既考慮統計學差異，也考慮生物學意義。

2 結果

2.1 對Beagle犬一般狀況的影響

試驗過程中，犬基本上處于比較穩定的麻醉狀態，角膜反射消失，四肢及腹部肌肉松弛，呼吸深大且平穩。

2.2 對Beagle犬心血管系統的影響

參知健腦膠囊以50、200、800 mg/kg灌胃給藥后，低、中、高劑量組動物心電圖各參數值（心率、P-R間期、QRS間期、QRS電壓、Q-T間期、QTc間期）與同一時間點陰性對照組比較，差異均無統計學意義（P > 0.05），各組動物心電圖波形均未見異常改變，未見對心臟的傳導有影響，見表3～8。血壓指標：給藥后，低、中、高劑量組動物的收縮壓、舒張壓和平均動脈壓與同一時間點陰性對照組比較，差異均無統計學意義（P > 0.05），見表9～11。

2.3 對Beagle犬呼吸系統功能的影響

呼吸系統指標：參知健腦膠囊以50、200、800 mg/kg灌胃給藥后，各劑量給藥組動物的呼吸頻率和呼吸幅度與同一時間點陰性對照組比較，差異均無統計學意義（P > 0.05）。見表12～13。

2.4 影響研究可靠性和造成研究工作偏離實驗方案的異常情況

試驗過程中，飼養室濕度出現異常波動（33%～39%、71%～94%），最長持續時間不超過2.5 h，由于各劑量給藥組動物和陰性對照組動物是在同一條件下進行試驗的，并且未見動物出現異常表現，因此認為此波動對研究結果的可靠性無影響。此外，未見影響研究可靠性和造成研究工作偏離實驗方案的其他異常情況。

3 討論

在本試驗條件下，參知健腦膠囊以50、200、800 mg/kg單次灌胃給藥后，動物的心電、血壓、呼吸各參數值與陰性對照組比較均無顯著差異，說明供試品對Beagle犬呼吸系統和心血管系統均無明顯影響。

人參、知母和赤芍是臨床治療血管性癡呆的常用藥物，全方具有“扶正、祛毒、通絡”的作用。人參為五加科草本植物人參的根，具有大補元氣，補肺、脾、心、腎氣，生津，安神益智的功效。研究發現，人參皂苷具有廣泛的藥理作用，包括抗疲勞、抗應激、抗自由基、抗腫瘤、增強免疫力等，其中還能保護神經細胞，提高記憶力[7-12]，可以用來“扶正”，但久服亦可出現脘腹脹滿、食欲減退、初感外邪而無虛證時若投人參，也可使表邪久滯不去，加重病情[13]。知母，苦、寒、無毒，為百合科植物知母的根莖，能清熱降火，滋陰潤燥。研究發現，知母皂苷能夠抗凝血、抗氧化、抗腫瘤、抗骨質疏松、抗炎、降血壓、降血糖及降血脂，另外還能抗腦缺血，改善記憶力，防治老年癡呆[14-19]，可以用來“清熱以祛毒”，該藥臨床安全性高，曾有研究表明，知母水提取液的小鼠經口最大耐受量為生藥35.0 g/kg，相當于人用量的145～291倍，知母乙醇提取液的小鼠經口最大耐受量為生藥37.5 g/kg，相當于人用量的156～312倍[20]。赤芍，苦，微寒，歸肝經，清熱涼血，散瘀止痛。研究發現，赤芍化學成分除了具有保肝、抗凝血、抗血栓、抗炎、抗氧化等作用外，還有神經保護、抗抑郁、改善學習記憶的作用，可以“散瘀涼血，以通腦絡”[21-22]，但過量服用可有心悸、頭暈等不良反應[23]。該方劑組方精巧，療效顯著，未見有明顯的不良反應，為全面了解該復方中藥對心血管及呼吸系統的可能的毒性反應，特進行該試驗研究。根據本研究結果，參知健腦膠囊單次灌胃給予Beagle犬，在50、200、800 mg/kg劑量范圍內對動物的呼吸系統和心血管系統均無明顯影響。

[參考文獻]

[1] 何婷婷，張允嶺，金香蘭，等.中醫藥治療血管性癡呆臨床近況[J].北京中醫藥大學學報：中醫臨床版，2012，19（3）：9-14.

[2] 張振馨，魏鏡，洪霞，等.北京城鄉癡呆及其主要亞型的患病率[J].中華精神科雜志，2001，34（4）：199-203.

[3] 楊傲然，田昕，鐘華，等.參知健腦片有效組分的最佳配伍篩選[J].中華中醫藥學刊，2009，27（12）：2600-2602.

[4] 王永炎.關于提高腦血管疾病療效難點的思考[J].中國中西醫結合雜志，1997，17（2）：195-196.

[5] 唐啟盛.“濁毒痹阻腦絡”對老年期癡呆的影響[J].北京中醫藥大學學報，1997，20（6）：24-25.

[6] 李澎濤，王永炎，黃啟福.“毒損腦絡”病機假說的形成及其理論與實踐意義[J].北京中醫藥大學學報，2001，24（1）：1-6.

[7] 趙遠，張凡，曲勝軍，等.人參主要成分藥理研究進展[J].亞太傳統醫藥，2012，8（12）：171-174.

[8] 李文娜，肖苑，黃燮南.人參皂苷Rg1非心血管和神經系統藥理活性研究進展[J].中國藥理學通報，2012，28（6）：751-754.

[9] 孟凡麗，蘇曉田，鄭毅男.人參皂苷Rb3對糖尿病模型小鼠的降血糖和抗氧化作用[J].華南農業大學學報，2013， 34（4）：553-557.

[10] 呼建民，王述蓮，劉獻增，等.人參皂苷Rb1對癲癇大鼠的腦保護作用及機制[J].廣東醫學，2016，37（12）：1803-1805.

[11] 余錄，胡光強，陳碧瓊，等.人參皂苷Rbl對大鼠腦缺血再灌注JAK2/STAT3信號轉導通路的影響[J].重慶醫學，2013，42（17）：1932-1934.

[12] 王巧云，劉鳳，李金蓮，等.人參皂苷Rb3保護低糖低氧/復氧誘導乳鼠皮層神經元凋亡的離子通道機制[J].中國老年學雜志，2014，34（15）：4283-4285.

[13] 葉鳳.幾種滋補中藥的補益作用與不良反應[J].陜西中醫，2009，30（4）：481-482.

[14] 蔡飛，王維泓，高守紅，等.知母皂苷及其苷元的藥理作用研究進展[J].藥學實踐雜志，2011，29（5）：331-335.

[15] 楊成，金英，李世章，等.知母總皂苷對老年大鼠學習記憶行為和海馬突觸相關蛋白表達的影響[J].中國藥理學與毒理學雜志，2012，26（2）：145-150.

[16] 吳瑩，宋澤璧，高慧，等.知母鹽制前后降血糖作用及其機制[J].中國醫院藥學雜志，2014，34（23）：1977-1980.

[17] 趙子劍，胡曉娟，張恩戶，等.知母藥理作用的文獻再評價[J].中成藥，2012，34（7）：1350-1353.

[18] 王琦，隋海娟，屈文慧，等.知母皂苷元對谷氨酸引起的皮層神經元損傷的保護作用研究[J].中國藥理學通報，2013，29（2）：281-285.

[19] 鐘艷梅，馮毅凡.知母醇提物藥效學研究[J].亞太傳統醫藥，2016，12（16）：16-17.

[20] 劉芳，李蘭芳，劉廣杰，等.知母水、醇提取液的急性毒性實驗研究[J].天津中醫藥，2014，31（6）：361-364.

[21] 陸小華，馬驍，王建，等.赤芍的化學成分和藥理作用研究進展[J].中草藥，2015，46（4）：595-602.

[22] 陶春，宣麗穎，林琳.赤芍的主要化學成分及藥理作用研究概況[J].內蒙古民族大學學報：自然科學版，2014， 29（2）： 198-201.

[23] 黃秋云，張錦銘，李丹.赤芍急性毒性實驗觀察[J].海峽藥學，2008，20（10）：40-41.