魯斯可皂苷元制備方法研究

曹青云，李 琦，王 敏，肖順麗，高榮凱，張宏桂

（北京中醫藥大學中藥學院，北京 100102）

·實驗研究·

魯斯可皂苷元制備方法研究

曹青云，李 琦，王 敏，肖順麗，高榮凱，張宏桂

（北京中醫藥大學中藥學院，北京 100102）

目的探尋從麥冬中分離、純化魯斯可皂苷元的方法。方法80%乙醇提取總皂苷，兩相酸水解總皂苷，硅膠柱層析分離，甲醇重結晶，薄層色譜（TLC）法、高效液相色譜（HPLC）法檢查純度。結果魯斯可皂苷元經TLC檢查與對照品一致，無雜質斑點，HPLC法檢查純度達98．58%。結論該試驗中建立的制備方法簡單、安全、可行性強，成本低，效率高，可用于制備魯斯可皂苷元。

麥冬；魯斯可皂苷元；制備；薄層色譜法；高效液相色譜法

麥冬 Ophiopogonis Radix為百合科植物麥冬Ophiopogon japonicus（Linn．f．）Ker－Gawl．的干燥塊根，味甘、微苦，歸心、肺、胃經，有養陰生津、潤肺清心等功效，常用于治療肺燥干咳、陰虛癆嗽、喉痹咽痛、津傷口渴等癥[1]。麥冬中所含化學成分主要有皂苷類、黃酮類、氨基酸類、多糖類及揮發油等。研究表明，麥冬有抗心肌缺血[2－4]、降血糖[2，5－6]、抗炎[7－8]、抗腫瘤[9－11]、增強免疫[12－13]等作用。麥冬甾體皂苷是麥冬的主要活性成分，魯斯可皂苷元是其藥材質量控制的關鍵性指標，是2015年版《中國藥典(一部)》規定的麥冬藥材質量檢驗的化學對照品，現有文獻針對魯斯可皂苷元的提取分離多用制備型高效液相分離儀，但制作成本較高，不適合工業化生產。本試驗中采用乙醇提取，兩相酸水解，硅膠柱層析分離，甲醇重結晶的方法制備魯斯可皂苷元，效果滿意。現報道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Waters 1525型高效液相色譜儀，Breeze 2色譜工作站，Waters 2489型紫外可見檢測器，色譜柱為Waters SunfireTMC18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm）(美國 Waters公司)；FLBP－250型萬能高速粉碎機（上海菲力博食品機械有限公司）；SHB－Ⅲ型循環水式多用真空泵（上海振捷實驗設備有限公司）；BS223S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；薄層色譜及柱色譜用硅膠（青島海洋化工廠）。

1．2 試藥

魯斯可皂苷元對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為111909－201204，質量分數大于98．4%；甲醇（賽默飛世爾科技＜中國＞有限公司）為色譜純；其他試劑均為分析純；麥冬藥材購自河北安國，經北京中醫藥大學張貴君教授鑒定為 Ophiopogon japonicus（Linn．f．）Ker－Gawl．的干燥塊根。

2 方法與結果

2．1 提取與分離

取麥冬藥材2 kg，粉碎，過20目篩，置圓底燒瓶中，用10倍量80%乙醇加熱回流提取3次，每次1 h，合并提取液，減壓回收乙醇至無乙醇味，得總皂苷浸膏。采用兩相酸水解法，將總皂苷浸膏置圓底燒瓶中，加入10倍量5%硫酸（下層），6倍量石油醚與二氯甲烷（3∶1）混合液，加熱水解5 h，冷卻后得酸水層和有機層，用等體積的二氯甲烷萃取酸水層3次，與有機層合并，用水洗至pH接近7，濃縮至干，得浸膏。將硅膠（200～300目）石油醚濕法裝柱。將酸水解得到的浸膏用硅膠（100～200目）拌樣，揮干溶劑，干法上樣，進行柱色譜分離。用二氯甲烷－石油醚－甲醇（V∶V∶V，10∶10∶1）洗脫，收集餾分，根據薄層色譜檢識，合并相同斑點的餾分。含有魯斯可皂苷元的餾分濃縮后放置，析出白色針晶，即為魯斯可皂苷元粗品，粗品用甲醇重結晶多次，即得魯斯可皂苷元純品。

2．2 結構鑒定

白色針狀結晶（甲醇），與魯斯可皂苷元對照品同條件下薄層層析顯示二者保留因子（Rf）值一致；1H－NMR（500 MHz，CDCl3），δ：0．79（3H，s，H－18），0．98（3H，d，H－27），1．05（3H，s，H－19），1．46（3H，d，H－21），3．37（1H，m，H－1），3．56（1H，m，H－3），5．54（1H，d，H－6），與文獻[14]研究數據一致，鑒定為魯斯可皂苷元。

2．3 純度檢查

2．3．1 薄層色譜（TLC）法

將制備的魯斯可皂苷元和對照品分別點樣于硅膠G254板上，分別以石油醚－二氯甲烷－甲醇（10∶10∶1）、環己烷－乙酸乙酯－冰乙酸（6∶2∶0．6）、二氯甲烷－甲醇（12∶1）為展開劑進行硅膠薄層層析，以10%硫酸乙醇溶液為顯色劑，加熱，在紫外燈365 nm波長下觀察。結果樣品與對照品Rf值相同，均無雜質斑點，見圖1。

2．3．2 高效液相色譜（HPLC）法

色譜條件：色譜柱為WatersSunfireTMC18柱（150mm× 4．6 mm，5 μm）；流動相為甲醇－水溶液（85∶15），流速為1．0 mL／min；檢測波長為205 nm；柱溫為35℃。樣品與對照品的質量濃度均為1 mg／mL。在此色譜條件下，理論板數按魯斯可皂苷元峰計應不低于3 000。取魯斯可皂苷元對照品與樣品各10 μL進樣，相應的樣品與對照品出峰時間一致，按面積歸一化法計算，魯斯可皂苷元的純度為98．58%，見圖2。

3 討論

本試驗中設計的制備工藝主要包括麥冬總皂苷的提取、兩相酸水解、硅膠柱層析得粗品、重結晶4個步驟，在較短時間內應用簡單的常規提取分離方法，從麥冬中分離出符合2015年版《中國藥典（一部）》標準的魯斯可皂苷元對照品，且較傳統方法優勢明顯。現有文獻中關于麥冬中魯斯可皂苷元的分離純化較少，且相關文獻、專利大多采用制備型高效液相分離儀，試驗成本較高，而本試驗中采用傳統的硅膠柱層析分離，甲醇重結晶的方法制備魯斯可皂苷元，試驗成本低，易于工業化生產。

圖1 不同展開劑的薄層色譜圖

圖2 高效液相色譜圖

傳統水解總皂苷常用酸水解法，可能破壞苷元結構，且硅膠柱層析分離中多采用含有三氯甲烷的洗脫系統進行洗脫，會對環境造成污染。而本試驗中采用兩相酸水解法，水解得到的苷元得以迅速進入有機相中，可保護苷元結構不被破壞，且由于采用二氯甲烷，減少了對環境的污染，相對更安全。

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Preparation Method of Ruscogenin

Cao Qingyun，Li Qi，Wang Min，Xiao Shunli，Gao Rongkai，Zhang Honggui
（Beijing University of Chinese Medicine，Beijing，China 100102）

Objective To investigate the method of separating and purifying ruscogenin from Ophiopogon japonicus．Methods 80% ethanol was used to extract the total saponins，two－phase acid hydrolysis of total saponins，silica gel column chromatography separation，methanol recrystallization；TLC，HPLC methods were used to check the purity．Results Ruscogenin was consistent with the control substance by TLC and no impurity spots．The purity was 98．58% by HPLC．Conclusion The preparation method is simple，safe，feasible with low cost and high efficiency．The obtained ruscogenin can be used as a reference substance for qualitative and quantitative analysis of traditional Chinese medicine．

Ophiopogon japonicus；ruscogenin；preparation；TLC；HPLC

R282．4；R282．71

A

1006－4931(2017)04－0006－03

2016－11－07；

2016－11－18)

10．3969／j．issn．1006－4931．2017．04．002

國家自然科學基金[31070328]。

曹青云（1992－），女，碩士研究生，研究方向為中藥藥效物質基礎，（電子信箱）caoqingy＠126．com。

張宏桂（1955－），男，教授，研究方向為中藥藥效物質應用及體內代謝，（電話）010－84738642（電子信箱）bzy714＠163．com。