郁福來膠囊質量標準研究

倪玉佳，瞿發林

（中國人民解放軍第102醫院制劑中心，江蘇 常州 213003）

·檢驗檢測·

郁福來膠囊質量標準研究

倪玉佳，瞿發林

（中國人民解放軍第102醫院制劑中心，江蘇 常州 213003）

目的制訂郁福來膠囊的質量控制標準。方法采用薄層色譜法對郁福來膠囊中貫葉金絲桃藥材、金絲桃苷進行定性鑒別，并采用高效液相色譜法測定郁福來膠囊中金絲桃苷的含量。結果供試品色譜中，在與對照品貫葉金絲桃藥材、金絲桃苷相應位置上有相同的斑點，且分離效果好；金絲桃苷進樣量在 0．173～1．73 g范圍內與峰面積線性關系良好，r＝0．999 9(n＝6），平均加樣回收率為99．65%，RSD＝1．00%(n＝6)。結論該研究中建立的定性和定量分析方法操作簡便，結果準確可靠，可用于控制郁福來膠囊的質量。關鍵詞：郁福來膠囊；貫葉金絲桃；金絲桃苷；質量標準

郁福來膠囊為醫院非標準制劑，是由中藥材貫葉金絲桃經現代制劑工藝制備而成，具有清心明目、安神之功效，主要用于輕、中度抑郁癥的治療，已在臨床應用10余年，療效確切[1]。貫葉金絲桃，又名貫葉連翹，為藤黃科金絲桃屬植物，廣泛分布于我國西南與西北地區，含豐富的金絲桃苷。筆者對郁福來膠囊質量標準進行過研究，當時由于2005年版《中國藥典（一部）》未收載貫葉金絲桃，故參考文獻采用薄層色譜（TLC）法對郁福來膠囊中槲皮素及蘆丁進行定性分析，采用紫外分光光度（UV）法測定了郁福來膠囊的金絲桃素含量，但因槲皮素及蘆丁并不是貫葉金絲桃中代表性物質，且金絲桃素對光和熱不穩定，其對照品無法從法定單位購買，故原質量標準存在不足。為保證制劑質量，參照2010年版《中國藥典（一部）》[2]再次修訂郁福來膠囊的質量標準，采用TLC法對其中貫葉金絲桃藥材、金絲桃苷進行了薄層鑒別，并采用高效液相色譜（HPLC）法測定郁福來膠囊中金絲桃苷的含量。現報道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Waters 2487型高效液相色譜儀，Waters CapLC 2487型雙 λ吸光度檢測器，Empower2數據處理系統（美國Waters公司）；FA1004型電子分析天平（上海精密科學儀器有限公司天平儀器廠）；XS105型電子分析天平（梅特勒－托利多儀器有限公司）；KH2200DB型數控超聲波清洗器（昆山禾創超聲儀器有限公司）；ZF－20D型暗箱式紫外分析儀（鞏義市英峪予華儀器廠）；HHS型恒溫水浴鍋（上海醫療器械五廠）。

1．2 試藥

金絲桃苷對照品（批號為111521－201406，供含量測定用，含量為92．5%），貫葉金絲桃（批號為121506－200501），均購于中國食品藥品檢定研究院；郁福來膠囊（解放軍第102醫院制劑中心，批號分別為20150422，20150506，20150617，規格為每粒0．3 g）；甲醇與乙腈為色譜純，水為純化水，磷酸為分析純。

2 薄層鑒別[2]

2．1 貫葉金絲桃

2．1．1 溶液制備

供試品溶液：取郁福來膠囊內容物0．1 g，加甲醇10mL，超聲處理10min，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

對照品溶液：取貫葉金絲桃對照品0．1 g，加甲醇10 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液蒸干，殘渣用甲醇定容至1 mL，作為對照品溶液。

陰性對照品溶液：按處方組成取不含貫葉金絲桃的其他成分，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。

2．1．2 展開及檢視

照TLC法試驗，吸取對照品溶液4 μL，供試品溶液2 μL，陰性對照品溶液2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲酸（25∶1）為展開劑，展開，取出，置紫外燈（365 nm）下檢視。結果，供試品溶液色譜中，在與貫葉金絲桃藥材色譜相應位置上有相同的斑點，且陰性無干擾。詳見圖1。

圖1 貫葉金絲桃薄層色譜圖

2．2 金絲桃苷

2．2．1 溶液制備

對照品溶液：取金絲桃苷對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的對照品溶液。

供試品溶液：取本品內容物0．3 g，加甲醇10 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。

陰性對照品溶液：按處方組成取不含貫葉金絲桃的其他成分，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。

2．2．2 展開及檢視

照TLC法試驗，吸取金絲桃苷對照品溶液2 μL，供試品溶液、陰性對照品溶液各3 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲酸－水（8∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外燈（365 nm）下檢視。結果，供試品溶液色譜中，在與對照品溶液相應的位置上有相同的斑點，且陰性無干擾。詳見圖2。

3 含量測定(HPLC法)

3．1 色譜條件

色譜柱：Lichrospher C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動相：甲醇－0．025 mol／L磷酸（50∶50）；流速：1．0 mL／min；檢測波長：360 nm；進樣量：20 μL；柱溫：20℃。

圖2 金絲桃苷薄層色譜圖

3．2 溶液制備

對照品貯備液：精密稱取金絲桃苷對照品10．82 mg，置50 mL容量瓶中，加55%乙醇定容，即得。

對照品溶液：精密量取對照品貯備液1 mL，置10 mL容量瓶中，加55%乙醇定容，用有機濾膜（0．45 μm）濾過，棄初濾液，即得。

供試品溶液：取郁福來膠囊10粒，精密稱定，倒出其內容物，研細混勻，精密稱取膠囊內容物0．2 g，置50 mL容量瓶中，加55%乙醇30 mL，密塞，超聲處理10 min，取出，放冷，加55%乙醇稀釋至刻度，搖勻，用有機濾膜（0．45 μm）濾過，取續濾液，即得。

陰性對照品溶液：按處方組成，取除貫葉金絲桃以外的其他成分，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。

3．3 方法學考察

專屬性試驗：取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，結果處方中其他成分對金絲桃苷測定無干擾，詳見圖3。

線性關系考察：分別精密量取對照品貯備液0．4，0．5，1，2，3，4 mL，置10 mL容量瓶中，加 55%乙醇定容，制成不同濃度的對照品溶液。按擬訂色譜條件依次進樣，以進樣量（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標，以最小二乘法進行線性回歸，得金絲桃苷回歸方程 Y＝2．08×107X－2．62×105，r＝0．9999（n＝6）。結果表明，金絲桃苷進樣量在0．173～1．73 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取對照品溶液，按3．1項下色譜條件重復進樣5次，測得金絲桃苷峰面積分別為767 729，770 010，751 318，767 139，766 775，結果的 RSD為0．98%（n＝5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，3，6，9，12 h時按擬訂色譜條件進樣，測定峰面積，測得金絲桃苷峰面積分別為 763 336，767 729，781 383，773 173，766 698，結果的 RSD為0．88%(n＝5)，表明供試品溶液在12 h內穩定。

圖3 高效液相色譜圖

表1 金絲桃苷加樣回收試驗結果（n＝6）

重復性試驗：取同一批（批號為20150422）樣品，按供試品溶液制備方法平行制備5份，依法進樣測定。結果金絲桃苷含量分別為1．38，1．39，1．43，1．42，1．40 mg／粒，RSD為1．48%(n＝5)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：稱取已知含量的供試品（批號為20150422）6份，每份約0．1 g，精密稱定，依法制備供試品溶液，進樣測定，計算回收率。結果見表1。

3．4 樣品含量測定

取3批（批號分別為20150422，20150506，20150617）樣品，依法制備供試品溶液，同法進樣測定，記錄峰面積，計算金絲桃苷含量。結果見表2。

4 討論

4．1 鑒別

原質量標準[1]中，以槲皮素及蘆丁為參照鑒別郁福來膠囊中貫葉金絲桃，但這2種物質并非貫葉金絲桃中代表性物質，特征性不強，故參照2010年版《中國藥典(一部)》[2]，以貫葉金絲桃藥材及金絲桃苷為參照進行鑒別，經驗證，方法簡便，結果可靠。

表2 樣品含量測定結果（n＝3）

4．2 含量測定

4．2．1 質控指標確定

金絲桃苷為黃酮醇苷類化合物，具有較強的鎮痛，護心、腦、肝臟，抗心肌缺氧損傷和保護腦缺血損傷等作用[3－6]，為貫葉金絲桃的活性成分之一，且其對照品能從法定單位購買；而原質控指標中的金絲桃素，對光和熱不穩定[7]，且無法從法定單位購買，故選擇金絲桃苷替代金絲桃素作為郁福來膠囊含量測定的質控指標。

4．2．2 提取溶劑選擇

金絲桃苷極性較大，常采用甲醇、乙醇進行提取，筆者通過預試驗比較了甲醇、乙醇作溶劑時金絲桃苷的提取率，發現乙醇提取效率高于甲醇，且毒性較低，故選用乙醇作為金絲桃苷的提取溶劑。又通過正交試驗，優選用55%的乙醇30 mL超聲提取樣品10 min，金絲桃苷提取結果滿意。

4．2．3 測定波長選擇

對一定濃度的金絲桃苷對照品溶液進行光譜掃描，結果在360 nm波長處有較大吸收，同時考慮其他雜質干擾最小，故確定在此波長下進行測定。

4．2．4 流動相選擇

本試驗中參考2010年版《中國藥典(二部)》及相關文獻，比較了不同體系和不同比例的流動相，如乙腈－0．1% 磷酸（16∶84）[2]，乙腈－水（其中含0．3%檸檬酸和2%四氫呋喃）（25∶75）[8]，乙腈－0．2% 磷酸（15∶85）[9]，水－乙腈－磷酸（82．5∶17．5∶1）[10]，甲醇－0．5%磷酸（45∶55，V／V，用三乙胺調pH至3．0）[11]，甲醇－0．1%磷酸水溶液（40∶60，V／V）[12]等，結果以甲醇－0．025 mol／L磷酸（50∶50）[13]為流動相時保留時間適宜，峰形好，分離效果好，故以此為流動相。

本研究中采用TLC法對郁福來膠囊中貫葉金絲桃藥材、金絲桃苷進行定性鑒別，采用HPLC法測定郁福來膠囊中金絲桃苷含量，并進行了方法學考察，發現建立的方法具有操作簡單、重復性好、結果可靠等優點。經檢測，3批樣品中金絲桃苷含量均穩定，故可用于郁福來膠囊中金絲桃苷的質量控制。

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Quality Control Standard of Yufulai Capsules

Ni Yujia，Qu Falin
（PLA 102nd Hospital，Changzhou，Jiangsu，China 213003）

Objective To study the quality control standard of Yufulai Capsules．Methods Herba hyperici perforati and hyperoside in Yufulai Capsules were identified by thin－layer chromatogram（TLC）．An HPLC method was used for the determination of hyperoside in Yufulai Capsules．Results Herba hyperici perforati and hyperoside were separated from other components well．The linear ranges of hyperoside was 0．173－1．73 μg，r＝0．999 9(n＝6）．The average recovery of hyperoside was99．65%，RSD＝1．00%(n＝6）．Conclusion The method is simple，sensitive and reliable，which can be applied in the quality control of Yufulai capsules．

Yufulai Capsules；herba hyperici perforati；hyperoside；quality standard

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2017)04－0016－04

2016－10－14)

10．3969／j．issn．1006－4931．2017．04．004

軍隊醫療機構制劑標準提高科研專項課題[13ZJZ16－3]。

倪玉佳（1990－），女，江蘇常州人，碩士研究生，藥師，研究方向為藥物分析，（電子信箱）523869088＠qq．com。

瞿發林（1965－），男，上海人，碩士研究生，主任藥師，研究方向為生藥學，（電話）0519－83064780。