離子色譜－積分脈沖安培檢測法測定－環糊精中的有關物質

王 淼，靳貴英，王彩媚

（廣東省藥品檢驗所，廣東 廣州 510180）

·檢驗檢測·

離子色譜－積分脈沖安培檢測法測定－環糊精中的有關物質

王 淼，靳貴英，王彩媚

（廣東省藥品檢驗所，廣東 廣州 510180）

目的建立測定 －環糊精中有關物質含量的方法。方法采用 Dionex ICS－500型色譜儀，利用糖分離柱、糖保護柱，以水、250 mmol／L NaOH溶液和500 mmol／L NaAC溶液為流動相，以電化學檢測器（金為工作電極、Ag／AgCl為參比電極），測定 －環糊精

－環糊精；離子色譜；積分脈沖安培檢測；有關物質

β－環糊精是由芽孢桿菌屬所產生的葡萄糖基轉移酶作用于淀粉而生成的7個葡萄糖以α－1，4糖苷鍵結合的環狀低聚糖，其最顯著的分子特征是具有一個外環親水、內環疏水，并有一定尺寸的立體手型空腔結構，可以包合各種小分子[1－2]。β－環糊精可作為藥物的載體材料和緩釋材料，適用于乳劑、乳膏劑、微囊劑、栓劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑等多種劑型，增加藥物穩定性，提高藥物的生物利用度，減少藥品不良反應，用于矯味防潮及使液體藥物固體化等[3－6]。β－環糊精也應用于食品、化妝品工業。β－環糊精生產中可能會產生6個葡萄糖結合的α－環糊精和8個葡萄糖結合的γ－環糊精雜質，同時還可能產生葡萄糖和麥芽糖等單糖還原糖雜質，因此，有必要對有關物質進行研究及考察。筆者系統地研究了全國6個廠家12批β－環糊精樣品，運用離子色譜－積分脈沖安培檢測法測定β－環糊精中有關物質，為β－環糊精產品質量控制提供科學依據。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Thermo ICS－5000型色譜儀（美國賽默飛世爾有限公司），配置有安培檢測器（金電極為工作電極，Ag／Ag-Cl為參比電極，糖四電位波形），色譜柱（CarPac PA200分析柱，250 mm×3 mm），保護柱（CarPac PA200保護柱，50 mm×3 mm），工作站為Chromeleon 6．8；MS205DU型電子天平（瑞士梅特勒－托利多公司）；醋酸鈉（優級純，美國賽默飛世爾有限公司）；試驗用水為超純水。

1．2 試藥

倍他環糊精（安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號為16050431、160601，曲阜天利藥用輔料有限公司，批號為160516、160203，郁南永光集團有限公司，批號為20160101、20160201，山東新大化工有限公司，批號為 160309、160415，孟州華興有限責任公司，批號為20160562、20160126，湖南爾康制藥股份有限公司，批號為109420160403，109420160701）；β－環糊精（中國食品藥品檢定研究院，批號為100317－201203）；α－環糊精（批號為1507070），γ－環糊精（批號為1529084），均購于阿拉丁試劑有限公司；葡萄糖（批號為110833－201506），果糖（批號為111504－200001），乳糖（批號為10058－201204），半乳糖（批號為100206－200404），麥芽糖（批號為100287－201303），均購于中國食品藥品檢定研究院。

2 方法與結果

2．1 色譜條件

色譜儀：Dionex ICS－5000型色譜儀；檢測器類型及工作參數：安培檢測器，金電極 Ag／AgCl參比模式，糖四電位波形；色譜柱：CarPac PA200型保護柱（50 mm×3 mm）和CarPac PA200型分析柱（250 mm× 3 mm）；柱溫：30℃；流速：0．45 mL／min；進樣量：10 μL。洗脫程序見表1。

2．2 溶液制備

供試品溶液：取β－環糊精樣品適量，加水溶解并稀釋成質量濃度為1 mg／mL的溶液，即得。

對照品溶液：取葡萄糖、乳糖、半乳糖、果糖、麥芽糖、α－環糊精、β－環糊精和γ－環糊精對照品適量，加水溶解并稀釋成葡萄糖、乳糖、半乳糖、果糖、麥芽糖、α－環糊精、β－環糊精和γ－環糊精質量濃度分別為1．0，1．0，1．0，1．0，1．0，2．5，2．5，2．5 μg／mL的對照品混合溶液，即得。

表1 洗脫程序表(%)

2．3 方法學考察

系統適用性試驗：取對照品混合溶液進樣。在此條件下，7種雜質均能較好分離，其色譜圖見圖1。

線性關系考察：取各雜質對照品，加水制成10，5，2，1，0．5倍于上述質量濃度的對照品溶液，以峰面積對各成分質量濃度進行線性回歸。結果見表2。

圖1 離子色譜圖

表2 線性關系考察結果

精密度試驗：取對照品混合溶液，連續進樣6次，記錄色譜圖。結果半乳糖、葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖、α－環糊精、γ－環糊精峰面積的 RSD分別為1．6%，1．4%，1．0%，1．3%，1．0%，1．0%，3．0%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取β－環糊精樣品（安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號為160504），依法制備供試品溶液，重復測定6次。結果均只測得有γ－環糊精雜質，測得值為0．15% ～0．19%（n＝6），說明方法重復性良好。

定量限和檢測限：取制備的各雜質對照品溶液，逐步稀釋，進樣，以信噪比為8～10時的質量濃度為定量限，以信噪比約為3的質量濃度為檢測限，半乳糖、葡萄糖、果糖和麥芽糖的定量限為0．05 μg／mL，乳糖的定量限為0．03 μg／mL，α－環糊精的定量限為0．4 μg／mL，γ－環糊精的定量限為1．0 μg／mL，半乳糖、葡萄糖、果糖和麥芽糖的檢測限為0．02 μg／mL，乳糖的檢測限為0．02 μg／mL，α－環糊精的檢測限為0．2 μg／mL，γ－環糊精的檢測限為0．5 μg／mL。

回收率試驗：取β－環糊精樣品（安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號為 160504，只含 γ－環糊精0．17%）9份，依法制備質量濃度為1 mg／mL的供試品溶液，分別加入10倍濃度的對照品混合溶液0．8，1．0，1．2 mL各3份，依法進樣測定。結果各雜質成分的回收率及 RSD詳見表3。

表3 回收率試驗結果（n＝9）

續表3 回收率試驗結果（n＝9）

2．4 樣品含量測定

取6個廠家的12批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂方法進樣測定，均未檢測到乳糖、半乳糖、果糖和α－環糊精，其余3種雜質的測定結果見表4。

3 討論

β－環糊精質量標準首次收載于2000年版《中國藥典（二部）》，作為賦形劑使用；經《中國藥典》2002增補本修訂了還原糖限度后，2005年版《中國藥典》未作變動，后該品種質量標準經過較大修訂和提高，收載于2010年版《中國藥典（二部）》，增加了紅外、雜質吸光度、殘留溶劑（環己烷）、微生物限度，修訂了含量測定的限度，并將類別修訂為藥用輔料，包合劑和穩定劑等。2015年版《中國藥典（四部）》收載的β－環糊精質量標準，與2010年版《中國藥典（二部）》收載的β－環糊精質量標準一致，未作變動。英國藥典(BP2016版)、歐洲藥典(EP8．0版)、美國藥典(USP39版)均有收載β－環糊精質量標準，與國外藥典標準比較，主要缺少有關物質的控制項目[7－9]。

因工藝原因，β－環糊精生產過程中會同時產生6個葡萄糖結合的α－環糊精雜質和8個葡萄糖結合的γ－環糊精雜質，同時淀粉酶解還會產生葡萄糖及麥芽糖等，這些單糖或二糖大多具有還原性，對產品尤其是制劑的相容性有影響。因此，控制β－環糊精中的有關物質的含量意義極大。國外藥典采用高效液相色譜法測定α－環糊精和γ－環糊精雜質，所用色譜條件：C18色譜柱，示差檢測器，以乙腈和水為流動相。筆者曾嘗試該方法，但2種雜質無法有效分離，可能因為α－環糊精和γ－環糊精的極性較相似，用反相高效液相色譜法無法完全分離這2種雜質，故嘗試用離子色譜法分離該雜質。國內外藥典均對還原糖進行控制，分別采用滴定法和紫外分光光度法，2種方法的專屬性不高。故有必要采用新方法對上述雜質進行控制。

表4 樣品雜質含量測定結果（%）

積分安培離子色譜法是近年發展起來的一種分析方法，分離機理主要為離子交換，即基于離子交換樹脂上可解離的離子與流動相中具有相同電荷的溶質離子之間進行可逆交換，不需要進行衍生化，可直接分離測定樣品中的糖類物質，具有極高的靈敏度[10－15]。α－環糊精、γ－環糊精和還原糖均為糖類物質，故該方法可對β－環糊精中有關物質進行一次性測定，且該方法靈敏高，精密度好，分離效果良好，且能準確測定β－環糊精中上述7種糖類雜質的含量。

采用離子色譜－積分脈沖安培檢測法，對12批β－環糊精樣品中的有關物質進行測定，測定結果顯示，均含γ－環糊精雜質，甚至有的含量超出了國外藥典對該種雜質的限度（0．25%），并說明各廠家產品生產過程中成環工藝控制均需改進。而測定葡萄糖和麥芽糖雜質，則說明淀粉被酶作用后生產的葡萄糖和麥芽糖等原料的去除不完全，亦說明純化工藝有待改進。由于現行《中國藥典》未進行該項目的控制，建議盡快對現有標準進行修訂，以更好地對β－環糊精的質量進行控制。

[1]Raymond CR，Sheskey PJ．藥用輔料手冊[M]．第4版．鄭俊民，譯．北京：化學工業出版社，2005：218－222．

[2]羅明生，高天惠，宋民憲，等．中國藥用輔料[M]．北京：化學工業出版社，2006：362．

[3]周志敏，劉偉林．頂空毛細管氣相色譜法測定倍他環糊精中的殘留溶劑[J]．中國藥師，2010，13（6）：830－831．

[4]刑其毅，徐瑞秋，周 政，等．基礎有機化學（下冊）[M]．第2版．北京：高等教育出版社，1994：995－996．

[5]劉華卿，黃振中，丁秋平，等．差熱分析與核磁共振研究 －環糊精包合物[J]．現代科學儀器，2006，18（4）：81－82．

[6]姚 力，姚 靜，于洪生．環糊精在藥物制劑方面的新應用[J]．藥學進展，2003，27（5）：279－283．

[7]美國藥典委員會．美國藥典39[M]．美國洛克威爾：美國藥典委員會出版社，2016：7179－7181．

[8]歐洲藥典委員會．歐洲藥典8．0[M]．法國斯特拉斯堡：歐洲藥品質量管理局出版社（EDQM），2010：1653－1655．

[9]英國藥典委員會．英國藥典2016[M]．英國倫敦：英國藥監機構出版社（MHRA），2016：274－276．

[10]羅 君，劉 毅，張建玲，等．離子色譜－積分脈沖安培檢測法測定低聚木糖顆粒中低聚木糖的含量[J]．微量元素與健康研究，2014，11（6）：53－54．

[11]關皓月，孫會敏．HPLC法同時測定伏立康唑制劑中磺丁基－環糊精鈉、羥丙基－ －環糊精和 －環糊精的含量[J]．中國新藥雜質，2016，25（20）：2386－2389．

[12]馬甲民，崔 鶴，李慧新，等．離子交換色譜－積分安培檢測器測定葡萄酒中的天然糖[J]．食品科學，2015，36（12）：108－112．

[13]林 敏．離子色譜法測定轉化糖注射液的含量[J]．海峽藥學，2014，26（1）：60－61．

[14]沈 潔，周光明，于 露．離子色譜－脈沖安培檢測法測定原桃膠中的多糖含量[J]．食品工業科技，2016，37（5）：298－301．

[15]費 棟，陳梅蘭，朱 巖，等．離子交換色譜－積分脈沖安培檢測法測定食品中糖[J]．理化檢驗 －化學分冊，2010，46（1）：76－78．

Determination of Related Substance in Betacyclodextrin by Ion Chromatography with Integral Pulse Amperometric Detection

Wang Miao，Jin Guiying，Wang Caimei
（Guangdong Institute for Drug Control，Guangzhou，Guangdong，China 510180）

Objective To establish a method of ion chromatography with integral pulse amperometric detection for the determination of related substance in betacyclodextrin．M ethods Dionex ICS－500 and CarPac PA200 column were used．The mixtures of pure water，250 mmol／L NaOH solution and 500 mmol／L NaAC solution in different ratio were used as mobile phase in the gradient elution．In the amperometric detection，gold electrode was used as working electrode，Ag／AgCl electrode was used as reference electrode．Results The peaks of different impurities were separated completely．The calibration curve of each solvent of each impurity showed a good liner relationship with good precision and recovery rate．Conclusion The method showed good sensitivity，precision and reproducibility，which can be used to determine the related substance in betacyclodextrin．

betacyclodextrin；ion chromatography；integral impulse amperometric detection；related substance

R927．1；TQ460．4

A

1006－4931(2017)04－0027－05

2016－10－05；

2016－11－24)

10．3969／j．issn．1006－4931．2017．04．007

王淼（1980－），男，碩士研究生，副主任藥師，研究方向為藥用輔料質量標準，（電子信箱）949319255＠qq．com。

中有關物質含量。結果各雜質峰能較好分離，峰面積與質量濃度線性關系良好，回收率良好。結論該方法靈敏度高，重復性好，可用于－環糊精中有關物質含量的測定。