高效液相色譜法測(cè)定筋骨痛寧膠囊中梔子苷的含量

逯小萌，趙群濤

（1．濮陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河南 濮陽(yáng) 457000；2．信陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 信陽(yáng) 464000）

高效液相色譜法測(cè)定筋骨痛寧膠囊中梔子苷的含量

逯小萌1，趙群濤2

（1．濮陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河南 濮陽(yáng) 457000；2．信陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 信陽(yáng) 464000）

目的：為完善筋骨痛寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增加該制劑中梔子苷的含量測(cè)定項(xiàng)，建立梔子苷含量測(cè)定的方法。方法：色譜柱為Waters-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈∶水（15∶85），流速為1.0 mL/min，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為238 nm。結(jié)果：梔子苷進(jìn)樣量在0.021 5～0.538 5 μg與峰面積呈良好線(xiàn)性關(guān)系，r＝0.999 7，平均回收率為99.05%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）＝0.55%（n＝9）。結(jié)論：建立的方法準(zhǔn)確度、靈敏度及重復(fù)性均較好，可用于筋骨痛寧膠囊中梔子苷含量的測(cè)定。

筋骨痛寧膠囊；梔子苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

筋骨痛寧膠囊是濮陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院協(xié)定處方［豫藥制字：H20120348（濮）］，由大黃、連翹、梔子（炒）、紅花、川芎、土鱉蟲(chóng)、乳香（制）、當(dāng)歸、冰片、沒(méi)藥（制）10味中藥組成。以上10味，大黃粉碎成細(xì)粉，冰片研細(xì)過(guò)80目篩，備用。連翹、梔子（照清炒法炒至黃褐色）等8味加水煎煮2次，煎煮2 h，合并藥液，濃縮至相對(duì)密度1.30～1.35（80℃），加入大黃細(xì)粉和適量淀粒，混勻，干燥（60～80℃），得干浸膏。干浸膏粉碎為細(xì)粉，加入冰片細(xì)粉配研，混勻，裝入膠囊，即得。功效：清熱涼血祛瘀，消腫止痛，用于骨折前期疼痛、腫脹，并促進(jìn)骨折愈合。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較簡(jiǎn)單，無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)，不能準(zhǔn)確把握產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量，梔子在本制劑中的作用是清熱散結(jié)、消腫止痛，梔子苷作為本制劑中梔子的主要活性成分[6]有必要對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制。故采用高效液相色譜法并參考有關(guān)文獻(xiàn)[1-5]，對(duì)筋骨痛寧膠囊中梔子苷成分進(jìn)行了含量測(cè)定方法的研究，增加了本制劑梔子的含量測(cè)定項(xiàng)。

1 儀器和試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；G1314F型Agilent 1260可變波長(zhǎng)檢測(cè)器（美國(guó)安捷倫公司）；Agilent chemstation（美國(guó)安捷倫公司）；XS205DU型電子天平（瑞士mettler公司）；UV-2550紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司）；KS-500E11型超聲儀（寧波海曙科生超聲設(shè)備有限公司）；0.45 μm微孔濾膜（天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；梔子苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110749-200714，供含量測(cè)定用）；筋骨痛寧膠囊（批號(hào)：20160501，20160601，20160901，規(guī)格均為0.35 g）；乙腈為進(jìn)口色譜純；水為純化水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈∶水（15∶85）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：238 nm；進(jìn)樣量：10 μL，理論板數(shù)＞5 000。

2.2 溶液的制備

精密稱(chēng)取梔子苷對(duì)照品10.77 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，再取10 mL，置50 mL容量瓶中，準(zhǔn)確稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液；取筋骨痛寧膠囊20粒，其內(nèi)容物置研缽中研勻，取1.05 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液10 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得樣品溶液。按處方量及工藝制備方法制備缺梔子的陰性樣品，依樣品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專(zhuān)屬性試驗(yàn)分別精密吸取經(jīng)微孔濾膜濾過(guò)的對(duì)照品溶液、樣品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”色譜條件分析，記錄色譜圖。由圖1可見(jiàn)，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照溶液無(wú)干擾，證明方法可行。

2.3.2 線(xiàn)性關(guān)系考察精密吸取經(jīng)微孔濾膜濾過(guò)的對(duì)照品溶液1，3，5，10，15，20，25 μL注入液相色譜儀，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，

回歸方程：Y＝25.759X－4.674 5 r＝0.999 8。

結(jié)果表明，梔子苷在0.021 5～0.538 5 μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

圖1 梔子苷含量測(cè)定高效液相色譜圖

2.3.3 精密度試驗(yàn)精密吸取經(jīng)微孔濾膜濾過(guò)的同一供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，重復(fù)6次。結(jié)果峰面積平均值為259.61，RSD＝0.33%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10，12，24 h進(jìn)樣10 μL，結(jié)果峰面積的平均值為259.56，RSD＝0.29%（n＝8）。表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品，按擬定方法平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果得RSD＝0.38%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn)精密量取已知含量的同一批號(hào)的樣品（批號(hào)：20160901，平均裝量：0.370 6 g/粒）9份，加入適量對(duì)照品依“2.2”項(xiàng)方法配成高（120%）、中（100%）、低（80%）3個(gè)量級(jí)的樣品溶液，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率和RSD值，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 梔子苷加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果 （n＝9）

2.4 樣品含量測(cè)定

取樣品3批（批號(hào)：20160501，20160601，20160901）樣品適量，按“2.2”項(xiàng)方法制得供試品溶液，按擬定方法測(cè)定樣品含量，梔子苷含量分別為0.47 mg/粒，0.49 mg/粒，0.46 mg/粒。

3 討論

3.1 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取對(duì)照品溶液在UV-2550紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)200～300 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，測(cè)得在238 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇238 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相及比例的選擇

流動(dòng)相及其比例的選擇分別采用了甲醇–水、乙腈–水及甲醇–1%冰醋酸溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)對(duì)比，結(jié)果顯示用乙腈–水（15∶85）作為流動(dòng)相，樣品主成分峰型良好，與其他苷類(lèi)分離效果滿(mǎn)意，保留時(shí)間合理，且陰性對(duì)照溶液峰對(duì)其無(wú)干擾，故選擇乙腈–水（15∶85）作為流動(dòng)相。

3.3 超聲溶解時(shí)間的選擇

超聲處理是藥品檢驗(yàn)中常用的樣品處理方法，有著簡(jiǎn)便、快捷、溶解效果好等特性，本實(shí)驗(yàn)同樣采用對(duì)同一樣品，分別超聲15，30，45，60 min的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)對(duì)比，結(jié)果表明超聲30 min即可將梔子苷提取完全。

高效液相色譜法作為測(cè)定筋骨痛寧膠囊中梔子苷的方法，操作簡(jiǎn)單易行，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，線(xiàn)性關(guān)系良好，可用于筋骨痛寧膠囊中梔子苷含量質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(2015年版)一部[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:248.

[2] 趙劍,唐燦,蒲清榮,等.HPLC法測(cè)定江西紅梔子中梔子苷含量[J].四川中醫(yī),2009,27(4):52-53.

[3] 朱曉靜,朱文娟,宋粉云,等.RP-HPLC法小兒止咳清肺片中梔子苷的含量[J].海峽藥學(xué),2015,27(8):63-65.

[4] 姜勇.HPLC法測(cè)定丹梔逍遙散中梔子苷的含量[J].中國(guó)藥房,2014,25(12):1125-1127.

[5] 胡亞男.清開(kāi)靈滴丸中梔子苷的HPLC含量測(cè)定研究[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2004,9(2):252-253.

[6] 陳紅,肖永慶,張村,等.梔子炒制過(guò)程中梔子苷和藏紅花素的含量變化[J].中國(guó)中藥雜志,2007,32(10):990-992.

本文編輯：魯守琴

Determination of Geniposide Content in Jingu Tongning Capsules by HPLC

Lu Xiao-meng1, Zhao Qun-tao2
(1. Puyang Food and Drug Inspection and Testing Center, Henan Puyang 457000, China; 2.Xinyang Food and Drug Inspection Institute, Henan Xinyang 464000, China)

Objective：To determine the gardenoside content in jingu tongning capsules, improve the quality standard of this Chinese patent medicine for pain in bones and muscles, and set up the gardenoside content determination method.Methods：The gardenoside content in Jingu Tongning capsules was determined by HPLC using Waters-C18column (4. 6 mm × 250 mm, 5 μm), serving the mixture of acetonitrile and water (15︰85) as mobile phase at a f ow rate of 1. 0 mL / min, a column temperature of 30℃, and a detection wavelength of 238 nm.Results：Geniposide sample load at a range of 0.021 5 ～ 0.538 5 μg showed good linear relationship to the peak area (r＝0.999 7). The average recovery rate was 99.05%, with a RSD of 0.55% (n＝9).Conclusion：To developed method has high accuracy, sensitivity and reproducibility, which may be used for the determination of geniposide content in jingu tongning capsules.

Jingu Tongning Capsules; Geniposide; HPLC; Content Determination

R917；R926

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.02.007

2016 - 09 - 27

逯小萌，男，主管藥師。研究方向：藥物分析。通訊作者E-mail：lumeng911@163.com