小酸棗湯對(duì)小鼠自主活動(dòng)及睡眠時(shí)間影響的拆方研究Δ

張立峰，劉燦仿（邢臺(tái)醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校藥劑教研室，河北 邢臺(tái) 054000）

小酸棗湯對(duì)小鼠自主活動(dòng)及睡眠時(shí)間影響的拆方研究Δ

張立峰＊，劉燦仿（邢臺(tái)醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校藥劑教研室，河北 邢臺(tái) 054000）

目的：考察小酸棗湯對(duì)小鼠自主活動(dòng)及睡眠時(shí)間的影響，并進(jìn)行拆方研究。方法：將小酸棗湯組方中7味藥材（酸棗仁、茯苓、川芎、知母、甘草、生姜、桂心）作為實(shí)驗(yàn)因素，每個(gè)因素選取有或無2個(gè)水平，按L8（27）正交表安排試驗(yàn)。采用直觀分析法和方差分析法比較小酸棗湯組方和方中各單味藥對(duì)小鼠2 min內(nèi)自主活動(dòng)及閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時(shí)間的影響。結(jié)果：小酸棗湯組方中對(duì)小鼠自主活動(dòng)具有明顯影響作用的是酸棗仁和知母；對(duì)閾上劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時(shí)間有明顯影響的是酸棗仁。結(jié)論：小酸棗湯具有抑制小鼠自主活動(dòng)及延長(zhǎng)閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時(shí)間的作用，方中酸棗仁作用最強(qiáng)。

小酸棗湯；拆方研究；正交試驗(yàn)；自主活動(dòng)；睡眠時(shí)間；小鼠

小酸棗湯出自唐代王燾根據(jù)歷代文獻(xiàn)輯錄而成的綜合性醫(yī)書《外臺(tái)秘要》第十七卷《深師方》，主治虛勞不得眠、煩不可寧[1]。該方組成來源于張仲景《金匱要略》中的治療失眠之名方——酸棗仁湯。小酸棗湯是在酸棗仁湯處方基礎(chǔ)上加入了生姜和桂心2味中藥而成，此2味中藥可補(bǔ)肝腎不足，用于治療心血之虛[2-3]。相關(guān)學(xué)者研究了酸棗仁湯對(duì)小鼠自主活動(dòng)及閾上劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時(shí)間的影響[4-5]，結(jié)果提示酸棗仁湯可明顯抑制小鼠自主活動(dòng)及延長(zhǎng)閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時(shí)間。但針對(duì)小酸棗湯還無此方面的研究。故本研究采用正交試驗(yàn)分析小酸棗湯和方中各單味藥對(duì)小鼠自主活動(dòng)以及對(duì)閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時(shí)間的影響，從而探討該方的藥理作用，為該方在失眠疾病的臨床應(yīng)用和處方優(yōu)化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

ZH-YLS-1A多功能小鼠自主活動(dòng)記錄儀（安徽省濉溪正華教學(xué)實(shí)驗(yàn)器械廠）。

1.2 藥材與試劑

方中所有藥材飲片均購(gòu)自河北合慶堂大藥房，經(jīng)邢臺(tái)醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校生藥學(xué)副教授劉燦仿鑒定均為正品；戊巴比妥鈉原料藥（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：F20141117，純度：≥99%）。

1.3 動(dòng)物

昆明種清潔級(jí)小鼠160只，♂，體質(zhì)量（25±30）g，由河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供[合格證號(hào)：140305，許可證號(hào)：SCXK（冀）2008-1-003]。

2 方法與結(jié)果

2.1 小鼠自主活動(dòng)的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將藥材粉碎，過60目篩，按《資師方》原方所載的藥味和配方比例[酸棗仁18 g、知母10 g、甘草（炙）3 g、茯苓10 g、川芎10 g、桂心10 g、生姜10 g]，以小酸棗湯組方中7種單味藥即酸棗仁（A）、知母（B）、甘草（C）、茯苓（D）、川芎（E）、桂心（F）、生姜（G）為因素，每個(gè)因素設(shè)有或無2個(gè)水平，參考相關(guān)研究方法[6-10]制備小酸棗湯8種不同配方的提取液（3.6 g/mL，以生藥計(jì)，pH 7.0）。因素與水平見表1。

表1 因素與水平（g）Tab 1 Factors and levels（g）

取小鼠80只，隨機(jī)分為8組，每組10只。分別ig上述8種配方的提取液，每天1次，連續(xù)6 d。末次給藥1 h后，在安靜、通風(fēng)、室溫為26℃、濕度為45%的環(huán)境下進(jìn)行曠野實(shí)驗(yàn)[11]。依次將小鼠投入自主活動(dòng)箱中，先適應(yīng)2 min，然后觀察小鼠2 min內(nèi)的自主活動(dòng)次數(shù)（即小鼠2 min內(nèi)經(jīng)過的格子數(shù)）。以小鼠自主活動(dòng)次數(shù)為指標(biāo)，按L（827）正交表安排試驗(yàn)。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表2 小鼠自主活動(dòng)的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Tab 2 Design and results of orthogonal test of spontaneous motion in mice

表3 小鼠自主活動(dòng)的方差分析結(jié)果Tab 3 Results of variance analysis of spontaneous motion in mice

根據(jù)表2中直觀分析可知，各因素作用主次順序?yàn)锳＞B＞D＞E＞C＞F＝G，提示配方中對(duì)小鼠自主活動(dòng)抑制作用較強(qiáng)的是酸棗仁。根據(jù)表3結(jié)果可知，A、B因素均對(duì)小鼠自主活動(dòng)具有明顯的抑制作用（P＜0.05），而其余因素的作用均不明顯（P＞0.05）。結(jié)果提示，對(duì)小鼠自主活動(dòng)抑制作用最強(qiáng)的為酸棗仁，其次是知母。

2.2 小鼠睡眠時(shí)間的正交試驗(yàn)

另取80只小鼠，分組及給藥方法均同“2.1”項(xiàng)下，每天給藥1次，連續(xù)給藥5 d。末次給藥30 min后，各組小鼠均按35 mg/kg的劑量ip 0.25%戊巴比妥鈉溶液，記錄各組小鼠的睡眠時(shí)間（以翻正反射消失為睡眠開始，至翻正反射恢復(fù)作為小鼠的睡眠時(shí)間）。以小鼠睡眠時(shí)間為指標(biāo)，按L8（27）正交表安排實(shí)驗(yàn)。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表4，方差分析結(jié)果見表5。

表4 小鼠睡眠時(shí)間的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Tab 4 Design and results of orthogonal test of sleep time in mice

表5 小鼠睡眠時(shí)間的方差分析結(jié)果Tab 5 Results of variance analysis of sleep time in mice

由表4中直觀分析可知，各因素對(duì)小鼠睡眠時(shí)間具有一定延長(zhǎng)作用，作用主次順序?yàn)锳＞E＞B＞D＞F＞C＞G，其中酸棗仁作用最為明顯。由表5結(jié)果可知，A因素對(duì)小鼠睡眠時(shí)間有明顯的影響（P＜0.05），而其余因素的作用均不明顯（P＞0.05）。這提示在小酸棗湯組方各單味藥中，發(fā)揮延長(zhǎng)小鼠睡眠時(shí)間作用的主要是酸棗仁。

3 討論

中醫(yī)對(duì)方劑配伍的認(rèn)識(shí)主要集中在對(duì)處方中君、臣、佐、使組成分析的論述上。方劑的配伍研究試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法很多，很多學(xué)者為研究《金匱要略》中酸棗仁湯中君、臣、佐、使的作用和地位進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)[12-13]。但對(duì)處方增添2味藥材后的小酸棗湯藥效研究基本沒有。增加的桂心、生姜2味藥材味辛入肝，與其余5味藥材組合則心煩之病可除。本研究采用逆向思維，從小酸棗湯處方整體出發(fā)，分別去掉相應(yīng)的各味中藥，采用曠野實(shí)驗(yàn)法和閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠法[11，14]研究各味中藥在原處方中發(fā)揮的鎮(zhèn)靜、安神的作用和地位。本研究發(fā)現(xiàn)，原處方中如果去掉酸棗仁，其對(duì)小鼠自主活動(dòng)及睡眠時(shí)間的影響較小，而有酸棗仁藥材的處方對(duì)小鼠自主活動(dòng)及睡眠時(shí)間的影響較大，這說明作為君藥的酸棗仁在處方中對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜安神的功效為最大。酸棗仁性平，味酸甘，養(yǎng)肝血、安心神，為治療失眠之主藥。酸棗仁藥材的藥理實(shí)驗(yàn)也證實(shí)其含有的酸棗仁皂苷為鎮(zhèn)靜安神的有效成分[15-17]。同時(shí)本研究還表明，原處方在去掉知母藥材后其鎮(zhèn)靜、安神的藥效也有所下降，說明知母作為臣藥在全方中起鎮(zhèn)靜安神的作用僅次于酸棗仁，其可滋陰清熱，起到了輔助君藥酸棗仁加強(qiáng)鎮(zhèn)靜安神的作用。處方中川芎具有調(diào)暢氣機(jī)、疏達(dá)肝氣功效，與君藥酸棗仁配伍，一辛散一酸收，相反相成，以達(dá)養(yǎng)血調(diào)肝之妙。使藥甘草起到了調(diào)和諸藥的作用。另外，閾上劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)表明，酸棗仁湯的催眠作用是君、臣、佐、使各味藥材搭配共同起作用的結(jié)果，從中醫(yī)理論上來講，酸棗仁味酸入肝，桂心、生姜、川芎味辛也入肝，4味藥辛酸相合入肝以平木；知母味苦入腎，甘草茯苓味甘也入腎，3味藥苦甘相合入腎以補(bǔ)水；7味藥組合共達(dá)水生木而木生火之效。去掉原方中任何一味藥，其催眠的作用都有明顯的減弱。雖然這種具體機(jī)制有待通過藥理研究進(jìn)一步闡明，但本實(shí)驗(yàn)研究體現(xiàn)了中醫(yī)方劑嚴(yán)謹(jǐn)配伍的原則，只有在君、臣、佐、使搭配得當(dāng)?shù)臈l件下，處方才能達(dá)到原方的功效。同時(shí)，該處方比酸棗仁湯多加了2味藥材，具體藥效比較有待于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步研究。

中藥復(fù)方制劑講究的是在病因病機(jī)基礎(chǔ)上，采用辨證論治的原則，結(jié)合中藥藥性理論，以處方所含多種活性成分通過多途徑、多靶點(diǎn)以及整體調(diào)節(jié)而發(fā)揮綜合其治療作用的，因此考察配方本質(zhì)不但要考慮其單味藥的作用，還需考察組方各藥物的交互作用以及各藥性之間的調(diào)節(jié)作用，這樣才能從整體上闡明中藥復(fù)方的配伍本質(zhì)，所以小酸棗湯各藥味之間的交互作用對(duì)小鼠睡眠時(shí)間的影響有待進(jìn)一步探討。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)證明了小酸棗湯具有抑制小鼠自主活動(dòng)及延長(zhǎng)閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時(shí)間的作用，其中酸棗仁作用最強(qiáng)，但是與酸棗仁湯作用大小之間的比較還有待進(jìn)一步考察。

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Study on the Effects of Disassembled Formulation of Xiaosuanzao Decoction on Spontaneous Motion and Sleep Time in Mice

ZHANG Lifeng，LIU Canfang（Pharmacy Teaching and Research Section，Xingtai Medical College，Hebei Xingtai 054000，China）

OBJECTIVE：To investigate the effects of Xiaosuanzao decoction on spontaneous motion and sleep time in mice，and to study its disassembled formulation.METHODS：Seven ingredients of Xiaosuanzao decoction were selected as the influential factors，includingZiziphus jujuba，Poria cocos，Ligusticum chuanxiong，Anemarrhena asphodeloides，Glycyrrhiza uralensis，Zingiber officinaleandCortex cinnamoni.Two levels of with or without were designed for each factor，and the experiment was arranged according to L8（27）orthogonal test table.The effects of Xiaosuanzao decoction and each ingredient on spontaneous motion within 2 min and sleep time induced by superthreshold dosage of pentobarbital sodium were compared by visual analysis method and analysis of variance.RESULTS：Z.jujubeandA.asphodeloideswere the main active ingredients of Xiaosuanzao decoction on spontaneous motion；Z.jujubewas the main active ingredient of Xiaosuanzao decoction on sleep time induced by superthreshold dosage of pentobarbital sodium.CONCLUSIONS：Xiaosuanzao decoction can inhibit spontaneous motion and prolong sleep time induced by superthreshold dosage of pentobarbital sodium，andZ.jujubeis the main ingredient of Xiaosuanzao decoction.

Xiaosuanzao decoction；Disassembled formulation；Orthogonal test；Spontaneous motion；Sleep time；Mice

R285.5

A

1001-0408（2017）04-0487-03

2016-06-07

2016-11-07）

（編輯：林靜）

河北省教育廳河北省高等學(xué)校科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（No.ZC2016121）

＊副教授，碩士。研究方向：中藥新藥開發(fā)及藥效物質(zhì)。電話：0319-2233365。E-mail：816601@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.04.15