高效液相色譜法測(cè)定舒肝和胃丸中芍藥苷含量

王禎旭

（1．重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，重慶 401121； 2．重慶市藥物過(guò)程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121）

·檢驗(yàn)檢測(cè)·

高效液相色譜法測(cè)定舒肝和胃丸中芍藥苷含量

王禎旭1，2

（1．重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，重慶 401121； 2．重慶市藥物過(guò)程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121）

目的優(yōu)化舒肝和胃丸中芍藥苷含量的測(cè)定方法。方法色譜柱采用AgilentZobax SB C18柱(250mm×4．6mm，5μm)，以乙腈-0．1%磷酸（14∶86）為流動(dòng)相，流速為2．0 mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm，柱溫為30℃。結(jié)果芍藥苷進(jìn)樣量在0．061 26～1．225 2 g范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好（r＝0．999 9）；平均加樣回收率為97．98%，RSD為1．64%（n＝6）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、快速，可為提高舒肝和胃丸質(zhì)量控制方法提供參考。

高效液相色譜法；舒肝和胃丸；芍藥苷；含量測(cè)定

舒肝和胃丸由醋香附、白芍、佛手等13味中藥組方，具有舒肝解郁、和胃止痛的功效，主要用于肝胃不和、兩脅脹滿、胃脘疼痛、食欲不振、呃逆嘔吐、大便失調(diào)等癥[1]1603。舒肝和胃丸收載于 2015年版《中國(guó)藥典（一部）》[1]105，445，465，其中芍藥苷的高效液相色譜（HPLC）含量測(cè)定法采用乙腈-0．05mol／L磷酸二氫鉀溶液（14∶86）為流動(dòng)相，含緩沖鹽，對(duì)液相儀器系統(tǒng)和色譜柱損傷較大。現(xiàn)參考文獻(xiàn)[2-13]，經(jīng)試驗(yàn)研究，對(duì)流動(dòng)相組成進(jìn)行了優(yōu)化，以0．1%磷酸溶液替代0．05 mol／L磷酸二氫鉀溶液，同時(shí)簡(jiǎn)便了流動(dòng)相配制的操作，為提高舒肝和胃丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司)；BP211S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；Simplicity-185型超純水機(jī)（美國(guó)Millipore公司）。

1．2 試藥

芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110736-201035，含量為96．5%）；乙腈（色譜純，美國(guó)Fisher公司），水為超純水，其他試劑均為分析純；舒肝和胃丸（市售品，批號(hào)分別為150901，150902，1510028，水蜜丸，規(guī)格為每袋9 g）。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent Zobax SB C18柱(250mm×4．6mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-0．1% 磷酸（14∶86）；流速：2．0m L／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：對(duì)照品溶液5μL，供試品溶液10μL。在此色譜條件下，供試品中溶液芍藥苷色譜峰分離良好，其色譜圖見(jiàn)圖1。

2．2 溶液制備

稱取芍藥苷對(duì)照品0．010 58 g，精密稱定，置50m L容量瓶中，加稀乙醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3 m L，置10 mL容量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。另取舒肝和胃丸，研碎，取0．55 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30min，放冷，再稱定質(zhì)量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液用微孔濾膜（0．45μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。再取缺白芍的陰性對(duì)照品，按照供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：取陰性對(duì)照品溶液10μL，注入液相色譜儀。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液色譜中，在與芍藥苷對(duì)照品色譜峰相應(yīng)位置上無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明陰性對(duì)照無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：分別精密吸取2．2項(xiàng)下對(duì)照品溶液1，5，10，15，20μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y＝746．59X-5．237 7，r＝0．9999（n＝5）。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在0．06126～1．225 2μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液5μL，連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定5次，記錄峰面積。結(jié)果芍藥苷峰面積的 RSD為0．86%(n＝5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取新制備的同一供試品溶液（批號(hào)為150901），分別于0，2，4，8，12 h時(shí)進(jìn)樣10μL測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果芍藥苷峰面積的 RSD為1．31%（n＝5），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為150901）樣品適量，混勻，按2．2項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6份，照擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果芍藥苷平均含量為1．2mg／g，RSD為1．62%(n＝6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：稱取已知含量的同一批（批號(hào)為150901）樣品0．27 g，精密稱定，共6份，分置具塞錐形瓶中，分別精密加入芍藥苷對(duì)照品稀乙醇溶液5mL，再精密加入稀乙醇20m L，密塞，依法制備供試品溶液，照擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．4 樣品含量測(cè)定

取 3批舒肝和胃丸樣品（批號(hào)分別為 150901，150902，1510028)，分別按本試驗(yàn)改進(jìn)的含量測(cè)定方法和2015年版《中國(guó)藥典（一部）》收載方法測(cè)定芍藥苷的含量。兩種方法測(cè)定結(jié)果相同，即3批樣品測(cè)得含量分別為1．2，1．9，1．4mg／g。

3 討論

2015年版《中國(guó)藥典（一部）》收載的舒肝和胃丸中芍藥苷的HPLC含量測(cè)定供試品溶液制備方法、檢測(cè)波長(zhǎng)均與《中國(guó)藥典(一部)》白芍藥材含量測(cè)定相同，供試品溶液制備方法簡(jiǎn)單、快捷，檢測(cè)波長(zhǎng)靈敏。故本研究中僅參照白芍藥材和文獻(xiàn)報(bào)道的芍藥苷HPLC法測(cè)定所用流動(dòng)相乙腈-0．1%磷酸對(duì)舒肝和胃丸進(jìn)行了考察，結(jié)果樣品中芍藥苷峰峰形對(duì)稱，分離度良好，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

經(jīng)DAD檢測(cè)，樣品中芍藥苷色譜峰與芍藥苷對(duì)照品色譜峰UV光譜一致。色譜柱分別采用Waters SunFire C18柱（150 mm×4．6 mm，5μm），Agilent Zobax SB柱(250mm×4．6 mm，5μm)和Phenomenx Gemini-NX柱(250mm×4．6mm，5μm)對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，芍藥苷含量結(jié)果一致，方法耐用性良好。

綜上所述，本試驗(yàn)改進(jìn)方法與2015年版《中國(guó)藥典（一部）》白芍藥材中芍藥苷含量測(cè)定方法完全一致，有利于大生產(chǎn)中舒肝和胃丸的質(zhì)量控制。

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Content Determ ination of Paeoniflorin in Shugan Hewei Pills by HPLC

Wang Zhenxu1，2
(1．Chongqing Institute for Food and Drug Control,Chongqing,China 401121; 2．Chongqing Engineering Center for Pharmaceutical Process and Quality Control,Chongqing,China 401121)

Objective To improve the HPLC method for the content determination of Paeoniflorin in Shugan Hewei Pills．M ethods A C18column was used with the mobile phase of acetonitrile-0．1% phosphoric acid(14∶86)at the flow rate of 2．0 mL／min．The detection wavelength was 230 nm and the column temperature was 30℃．Resu lts The linear range of Paeoniflorin was 0．061 26-1．225 2μg(r＝0．999 9)．The average recovery was 97．98% with RSD＝1．64%(n＝6)．Conclusion The improved method is simple,rapid and accurate,which can be used for the quality control of Shugan Hewei Pills．

HPLC;Shugan Hewei Pills;paeoniflorin;content determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2017)03-0025-03

2016-10-05；

2016-11-05)

10．3969／j．issn．1006-4931．2017．03．008

王禎旭，男，工程師，研究方向?yàn)樗幤贰⒈＝∈称泛突瘖y品質(zhì)量檢測(cè)和控制方法，（電子信箱）35668808＠qq．com。