基于核糖開關的新型基因表達調控系統的應用

熊瑩喆 曹苑青 肖玲慧 李招發

（1. 華僑大學分子藥物研究院，泉州 362021；2. 華僑大學生物醫學學院，泉州 362021）

基于核糖開關的新型基因表達調控系統的應用

熊瑩喆 曹苑青 肖玲慧 李招發

（1. 華僑大學分子藥物研究院，泉州 362021；2. 華僑大學生物醫學學院，泉州 362021）

核糖開關是能對細胞環境的改變做出反應的順式作用元件，通過改變自身的構象實現對基因表達的調控。基于核糖開關調控方式簡潔，無需蛋白質參與，響應迅速，且自身片段小，結構簡單，易于設計和改造等特性使其在生物醫學領域體現出諸多應用優勢。對核糖開關的結構，調節機理以及這種新型基因表達調控系統在基因治療、抗生素新靶點的開發、病毒疫苗的安全控制、新型核糖選擇器和生物體內傳感器的應用進行了綜述，旨為啟示我國核糖開關的新型應用。

核糖開關；基因表達調控系統；機理

核糖開關（riboswitch）是一段長度為34-200 bp的天然核苷酸序列，多存在于mRNA的5'非編碼區（5'UTR）或3'非編碼區（3'UTR），它是通過特異性結合配體進行基因表達調控的順式作用元件。2002年，Winkler等［1］發現硫胺素衍生物結合mRNA某結構元件后能直接調節細菌基因表達，同年，Nahvi等［2］也證實了這類mRNA非編碼區的某些結構元件具有調控基因表達的能力，之后關于這些RNA結構元件的研究便迅速發展，并將這些RNA結構元件命名為核糖開關。在短短的十幾年里，已經在原核細胞和真核細胞中發現不少于20種天然存在的核糖開關，并且它們在與一系列小分子配體結合后能廣泛參與基因的轉錄、轉錄后的修飾以及翻譯等調控作用。

大多數的基因調節機制都涉及到蛋白質的參與，然而核糖開關這種mRNA的調控元件無需蛋白質參與，就能直接與環境中的小分子代謝物、第二信使、tRNA、離子、維生素和氨基酸結合，調控下游的基因表達，且調控基因的能力與蛋白質相比毫不遜色［3］。這種簡單且高效的新型基因表達調控系統使核糖開關在生物醫學領域展現出特有的優勢。本文綜合國內外核糖開關的最新研究進展，對核糖開關的結構機理，特別是在生物醫學領域的應用進行了介紹，旨為啟示開發人工高效的新型核糖開關，開辟其新型應用。

1 核糖開關的結構特點

核糖開關一般由兩部分組成：（1）適體結構域（aptamer domain），作為感應器結合特異性的配體；（2）表達平臺域（expression platform），位于適體結構域的下游，作為效應器調控基因的表達。兩部分由作為傳送器的轉換序列（switching sequence）連接［4］。適體與配體結合后，適體結構域構象發生改變，這種變化的信號通過轉換序列傳遞給表達平臺域，從而進行相應的基因表達調控［5］。核糖開關控制的基因通常參與細胞的關鍵代謝途徑，所以能特異性結合配體的適體結構域序列通常高度進化保守，不容易發生基因突變［6］。

能與核糖開關結合的配體有很多，每一種配體分子需要與之完全匹配的獨特的適體結構，另外，屬于同一類型的不同細菌中的核糖開關常常可以調節不同基因的表達。因此，核糖開關在二級或三級結構上必然有巨大的差異性。根據結構特征的不同，我們可以將大多數核糖開關分為兩類，連接型核糖開關（junctional riboswitch）和假結型核糖開關（pseudoknoted riboseitch）［7］。連接型核糖開關是由連接點與幾個徑向的螺旋連接在一起的結構，如嘌呤（purine）核糖開關［8］和TPP核糖開關［9］。假結型核糖開關是由RNA莖環結構的環與外側部分通過堿基對連接的結構，如SAM-Ⅱ核糖開關［10］、氟化物（fluoride）核糖開關［11］以及PreQ1核糖開關［12］。

2 核糖開關的調控機制

2.1 核糖開關的配體

核糖開關結構的多樣性使它能識別多種不同結構的配體。最常見的結合配體是輔酶及其衍生物，如焦磷酸硫胺素（TPP）和黃素輔酶黃素單核苷酸（FMN）等［13］，其次是嘌呤及其衍生物，如鳥嘌呤（Gua）［13］和環二鳥苷（c-di-GMP）［14］。另外，氨基酸如賴氨酸（Lys）也可作為結合配體［13］。而最小的配體家族是金屬離子配體，如Mg2+，近年來發現Ni2+/Co2+，Mn2+也可以結合核糖開關［15，16］。除此之外，還有一群被稱為“孤核糖開關”（orphan riboswitch）［17］的與核糖開關功能極其類似的mRNA元件，目前沒有已鑒定的配體，但也有研究表明這種孤核糖開關能感應一些新型的化學物質，如ATP［18］。

2.2 基因表達調控機制

核糖開關基因表達調控系統通常存在3種調節機制：轉錄終止型、翻譯的起始或抑制型以及自身剪切作用型［19］。

轉錄終止型核糖開關通常在結合配體后會形成一個終止子發夾結構以終止轉錄的繼續［20］，但是當配體濃度降低，無法與核糖開關適體域充分結合時，表達平臺域會轉換終止子發夾結構成為抗終止子結構，于是轉錄激活，可以繼續轉錄。另外，部分核糖開關的轉錄終止也涉及到了Rho因子的參與。Rho因子是存在于原核生物中具有解旋酶活性的轉錄蛋白，當它結合到RNA轉錄復合物中隨著轉錄一起移動，識別終止信號后，可使新產生的RNA從RNA-DNA轉錄復合物中釋放出來，從而可以使轉錄提前終止［21］。FMN核糖開關在大腸桿菌中表達上游ribB基因就是運用這種調節機制進行的［22］。

翻譯的起始或抑制型核糖開關中，表達平臺域的結構改變與核糖體結合位點（RBS）聯系在一起。配體與適體域結合與否，會改變表達平臺域的構象，使RBS暴露或屏蔽進而決定翻譯的起始或抑制。SAM-Ⅱ核糖開關就是在S-甲硫氨酸（SAM）結合適體結構域后屏蔽RBS，抑制翻譯的典型例子［23］。而存在于創傷弧菌mRNA的腺嘌呤核糖開關則是在配體結合后暴露SD序列（原核生物中的RBS序列），開始翻譯［24］。

自身剪切作用型核糖開關是基于表達平臺域具有核酶活性，在與配體結合后，能催化自我剪切RNA，使RNA降解，斷裂或重新拼接。6-磷酸葡糖胺合成酶（GlmS）核糖開關就是具有核酶活性的核糖開關，當與配體6-磷酸葡糖胺（GlcN6P）結合后，GlmS核酶被激活剪切GmlS RNA，使mRNA 5'端三磷酸帽子結構降解，暴露出5'-OH基團，極易被核糖核酸酶（RNase J1）識別并降解GlmS mRNA［25］。

3 核糖開關的應用

3.1 基因治療的新型調節方式

基因治療是指通過基因工程的方法將外源基因引入患者的受體細胞，從根本上糾正受體細胞有缺陷的基因，或通過外源基因表達的產物治療某些疾病，在臨床試驗中已經取得重大成功［26］。實時調控基因表達水平是基因治療的關鍵，外源基因表達過多或過少都不能使治療達到理想狀態。目前常用的是轉錄因子調節［27］，而轉錄因子這種蛋白質調控方式需將編碼相應轉錄因子的基因與治療基因一起轉染入細胞，異源蛋白的免疫毒性便是首要考慮問題，其次，調節元件的復雜結構和過大體積，響應調節信號不夠靈敏，響應時間長，這些都限制了其臨床應用［28］。相比之下，核糖開關這一新型基因表達調控系統具有多種應用優勢：第一，核糖開關是一段少于200 bp的核苷酸序列，不需要啟動子元件，結構簡單，易于改造與設計；第二，核糖開關對基因表達的調控不需要輔助因子，減少了免疫原性；第三，核糖開關的引發配體都是簡單的小分子或離子，降低了開發應用成本，如乳糖誘導體系就比IPTG這種誘導劑便宜很多；第四，大多數核糖開關的配體都可以直接穿入細胞壁或細胞膜，使核糖開關對細胞所處環境改變的反應更靈敏，調節效率更高；第五，核糖開關位于mRNA中，是一種順式作用元件，可使調節更緊密。隨著環境中配體濃度的改變，核糖開關可以相應的啟動或抑制基因表達，這種新型且簡單的調控方式使核糖開關為基因治療提供了新的研究思路［29］。例如，用核糖開關調節T細胞內白介素-2（IL-2）和白介素-5（IL-5）基因的表達從而控制T細胞增殖的研究［30］。另外，也有研究表明，核糖開關在基因治療中確實具有良好的效果，已達臨床試驗階段［31］，這也使核糖開關在基因治療的應用方面受到廣泛的關注。

3.2 抗生素開發的新靶點

隨著日益嚴重的細菌耐藥性問題，尋找可以優化傳統抗生素對抗細菌的方法迫在眉睫［32］。由于大多數核糖開關存在于原核生物中，且其調控的基因通常是致病菌生存或致病的關鍵基因，使得核糖開關可以作為抗生素研究的新靶點［33］。相比于傳統的抗生素，核糖開關擁有更低的人體細胞毒性，因為目前還沒有在高等哺乳動物細胞內發現核糖開關。其次，核糖開關的配體通常是小型復合物、簡單的代謝物和離子等，易于改造和設計，也方便進出細胞應用于基因調控系統，這為開發新型抗生素奠定了基礎。另外，核糖開關的適體結構域序列高度進化保守，一種類型的核糖開關可存在于多種細菌中，且單一的突變不會影響抗菌效果，抗菌范圍更廣闊。因此，核糖開關在抗生素新靶點的開發與應用領域具有良好的前景。目前已發現的可應用于抗生素新靶點的核糖開關分為5種［13］：TPP核糖開關、FMN核糖開關、Lys核糖開關、Gua核糖開關和glmS核酶核糖開關。近年來在抗生素耐藥性的細菌病原體中還發現了廣泛存在的氨基糖苷類結合核糖開關［34］，為新型抗生素核糖開關靶點提供了又一研究方法。在藥物治療方面，我們還需要尋找更多的配體及其類似物，以及在沒有配體存在下用其他化合物誘導核糖開關，為核糖開關這一抗生素新靶點的研究提供了更多的思路。

3.3 病毒疫苗的安全開關

研究發現一些病毒會傾向于感染并殺死腫瘤細胞，于是被稱為“溶瘤病毒”（oncolytic viruses），將這種溶瘤病毒注入人體內治療腫瘤，其安全性和可控性是首要考慮問題，而用于控制病毒以防其在治療期間產生副作用的抗病毒藥物僅在極少數病毒藥物中起作用。因此，找到一種能有效控制溶瘤病毒的致病性和其他副作用的安全開關是迫切需要的［35］。核糖開關是一種能被小分子配體誘導的新型基因調控元件，利用基因工程的方法在病毒基因中插入核糖開關，經藥物誘導實時控制病毒的復制、侵染及細胞毒性。這種基于核糖開關的基因安全開關能廣泛應用于DNA或RNA病毒，使新型活病毒疫苗的安全性進一步提高。在2014年已報道了核糖開關可成功應用于控制人類致病性病毒：腺病毒和麻疹病毒的功能系統［36］。Ketzer等［36］將具有自切割核酶活性的人工適體酶核糖開關插入腺病毒的基因，致使病毒僅在腫瘤細胞中具有復制能力。該核糖開關可以在沒有配體結合的情況下啟動基因表達，而在加入茶堿配體后，核酶轉換為活性構象并開始mRNA的自切割，從而抑制基因表達。研究表明，該核糖開關關閉了腺病毒E1A基因的表達后，可使病毒復制減少約200倍。這項研究同樣適用于麻疹病毒，在加入茶堿配體后，麻疹病毒的復制在48 h后減少了50倍。這是核糖開關第一次成功應用于人類致病性病毒的研究。基于核糖開關這種結構簡單的RNA固有調控元件，將會是真核基因表達系統中誘導型啟動子的第一備選。

3.4 高產代謝物菌株的核糖選擇器（riboselectors）

微生物工程是利用微生物生產對人類有用的產品的一類技術，然而大多數目標產物沒有典型的特征，不易被常規的篩選工具識別而不能獲取［37］。由于核糖開關是對細胞內代謝物的濃度產生快速反應的基因表達調控元件，能特異性感應不易篩選的代謝物，其與目標代謝物結合后，核糖開關適體結構域構象發生改變，然后將信號傳遞給下游基因，在篩選壓力下僅使目的細胞存活，這種基于核糖開關而設計的選擇裝置稱之為“核糖選擇器”［38］。目前已成功應用于大腸桿菌中的Lys核糖開關［39］，將Lys核糖開關與TatA基因篩選模型［40］聯合應用，當細胞內賴氨酸與Lys核糖開關結合后，可抑制下游篩選基因-tatA基因的表達，使已在細胞質內積累豐富賴氨酸的細胞在Ni2+的存在下可以存活，即在Ni2+的篩選壓力下得到賴氨酸含量豐富的細胞。實驗表明，在這種篩選系統中，賴氨酸的產率可在4輪篩選之后成功增長75%［39］。綜上所述，基于核糖開關這種新型基因表達調控系統的核糖選擇器，是篩選高產目的代謝物菌株的有效手段。

3.5 體內傳感器

生物傳感器可檢測多種生命物質或化學物質，識別一種給定物質后通常會引起一系列的電化學反應或光學信號用于進一步的分析。目前常用的是酶生物傳感器，但其價格昂貴，分離純化目標物質操作復雜，研究者們期望能在細胞內找到一種固有且穩定的生物傳感器［41］。核糖開關是RNA固有的順式作用元件，能通過適體結構域的一小段序列識別小分子配體，將信號傳遞給表達平臺域調控下游基因的表達。通常可在體外通過配體指數富集系統進化技術（systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX）從頭合成所需要的適體，然后設計成為核糖開關的適體域，理論上應用SELEX技術能篩選到自然界幾乎所有靶分子的適體［42］。例如，用核酶核糖開關作為體內傳感器檢測酵母細胞內代謝物的含量變化情況，在適體域與黃嘌呤結合后，下游綠色熒光蛋白（GFP）基因能順利表達，通過檢測GFP的變化便可分析黃嘌呤的含量變化［43］。這種人工設計的核糖開關與天然核糖開關相似，并能與低濃度配體結合，響應更靈敏，在生物傳感器領域擁有廣闊的應用前景。

4 展望

從核糖開關的發現至今的十幾年時間里，核糖開關這種新型基因表達調控系統在多個生物醫學領域中展現出無可比擬的應用優勢。為了設計出更理想的人工核糖開關，我們需要注意幾個方面：（1）目前高等哺乳動物體內沒有發現核糖開關，可能是核糖開關存在潛在的免疫反應，前不久就有報道稱核糖開關可以激活人體固有免疫因子PKR［44］；（2）人工設計的配體可能不容易進入宿主細胞固有代謝物的代謝途徑；（3）部分天然存在的核糖開關可能在一定的背景條件下才會發揮作用，如溫度和pH等。同時，我們還需要進一步探索和認識核糖開關結構和功能的關系，以及核糖開關識別配體的機制，為設計新型核糖開關，尋找靶向配體奠定基礎。本文所涉及的核糖開關的應用只是核糖開關廣泛應用前景中的冰山一角，更多的新型核糖開關及其應用還有待開發，在未來的生物醫學、藥物治療等領域，核糖開關這種天然RNA調控元件及其新型基因表達調控系統必將發揮巨大作用。

［1］Winkler W, Nahvi A, Breaker RR. Thiamine derivatives bind messenger RNAs directly to regulate bacterial gene expression［J］. Nature, 2002, 419（6910）：952-956.

［2］Nahvi A, Sudarsan N, Ebert M, et al. Genetic control by a metabolite binging Mrna［J］. Chem Biol, 2002, 9（9）：1043-1049.

［3］ Breaker RR. Complex riboswitches［J］. Science, 2008, 319（5871）：1795-1797.

［4］王佳穩, 馮婧嫻, 林俊生, 等. 適體核酶型人工核糖開關的設計［J］. 中國生物工程雜志, 2014, 34（2）：59-64.

［5］Grundy FJ, Henkin TM. From ribosome to riboswitch：control of gene expression in bacteria by RNA structural rearrangements［J］. Critical Reviews in Biochemistry & Molecular Biology, 2006, 41（6）：329-338.

［6］Barrick JE, Breaker RR. The distributions, mechanisms, and structures of metabolite-binding riboswitches［J］. Genome Biology, 2007, 8（11）：R239.

［7］Serganov A, Nudler E. A decade of riboswitches［J］. Cell, 2013, 152（152）：17-24.

［8］Serganov A, Yuan YR, Pikovskaya O, et al. Structural basis for discriminative regulation of gene expression by adenine- and guanine-sensing mRNAs［J］. Chemistry & Biology, 2004, 11（12）：1729-1741.

［9］Serganov A, Polonskaia A, Phan AT, et al. Structural basis for gene regulation by a thiamine pyrophosphate-sensing riboswitch［J］. Nature, 2006, 441（7097）：1167-1171.

［10］Gilbert SD, Rambo RP, Van TD, et al. Structure of the SAM-II riboswitch bound to S-adenosylmethionine［J］. Nature Structural & Molecular Biology, 2008, 15（2）：177-182.

［11］Li S, Breaker RR. Fluoride enhances the activity of fungicides that destabilize cell membranes［J］. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2012, 22（9）：3317-3322.

［12］Liberman JA, Salim M, Krucinska J, et al. Structure of a class II preQ1 riboswitch reveals ligand recognition by a new fold［J］. Nature Chemical Biology, 2013, 9（6）：353-355.

［13］賈東方, 林俊生, 刁勇. 抗生素開發的新靶點：核糖開關［J］.藥學學報, 2013, 48（9）：1361-1368.

［14］Furukawa K, Gu H, Sudarsan N, et al. Identification of ligand analogues that control c-di-GMP riboswitches［J］. Acs Chemical Biology, 2012, 7（8）：1436-1443.

［15］Furukawa K, Ramesh A, Zhou Z, et al. Bacterial riboswitches cooperatively bind Ni2+, or Co2+, ions and control expression of heavy metal transporters［J］. Molecular Cell, 2015, 57（6）：1088-1098.

［16］Price IR, Gaballa A, Ding F, et al. Mn2+-sensing mechanisms of yybP-ykoY orphan riboswitches［J］. Mol Cell, 2015, 57（6）：1110-1123.

［17］Meyer MM, Hammond MC, Salinas Y, et al. Challenges of ligand identification for riboswitch candidates［J］. RNA Biol, 2011, 8（1）：5-10.

［18］Watson PY, Fedor MJ. The ydaO motif is an ATP-sensing riboswitch in Bacillus subtilis［J］. Nat Chem Biol, 2012, 8（12）：963- 965.

［19］ 馮婧嫻. 人工核酶核糖開關調控轉基因表達的性能及優化［D］. 廈門：華僑大學, 2015.

［20］Mandal M, Boese B, Barrick JE, et al. Riboswitches control fundamental biochemical pathways in Bacillus subtilis and other bacteria［J］. Cell, 2003, 113（5）：577-586.

［21］Gilbert SD, Montange RK, Stoddard CD, et al. Structural studies of the purine and SAM binding riboswitches［J］. Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology, 2006, 71：259-268.

［22］Hollands K, Proshkin S, Sklyarova S, et al. Riboswitch control of Rho-dependent transcription termination［J］. PNAS, 2012, 109（14）：5376-5381.

［23］Haller A, Rieder U, Aigner M, et al. Conformational capture of the SAM-II riboswitch［J］. Nature Chemical Biology, 2011, 7（6）：393-400.

［24］ Reining A, Nozinovic S, Schlepckow K, et al. Three-state mechanism couples ligand and temperature sensing in riboswitches［J］. Nature, 2013, 499（7458）：355-359.

［25］Collins JA, Irnov I, Baker S, et al. Mechanism of mRNA destabilization by the glmS ribozyme［J］. Genes & Development, 2007, 21（24）：3356-3368.

［26］Alberts B. The breakthroughs of 2009［J］. Science, 2009, 326（5960）：1589.

［27］Klauser B, Atanasov J, Siewert LK, et al. Ribozyme-based aminoglycoside switches of gene expression engineered by genetic selection in S. cerevisiae［J］. Acs Synthetic Biology, 2014, 4（5）：516-525.

［28］楊會勇, 刁勇, 林俊生, 等. 新型基因表達調控元件——人工核糖開關的構建及篩選［J］. 生物工程學報, 2012, 28（2）：134-143.

［29］馮婧嫻, 王佳穩, 林俊生, 刁勇. 核酶核糖開關在基因治療中的應用及挑戰［J］. 藥學學報, 2014, 49（11）：1504-1511.

［30］Chen YY, Jensen MC, Smolke CD. Genetic control of mammalian T-cell proliferation with synthetic RNA regulatory systems［J］. PNAS, 2010, 107（19）：8531-8536.

［31］Liang JC, Bloom RJ, Smolke CD. Engineering biological systems with synthetic RNA molecules［J］. Mol Cell, 2011, 43（6）：915-926.

［32］Theuretzbacher U. Accelerating resistance, inadequate antibacterial drug pipelines and international responses［J］. International Journal of Antimicrobial Agents, 2012, 39（4）：295-299.

［33］Blount KF, Breaker RR. Riboswitches as antibacterial drug targets［J］. Nature Biotechnology, 2006, 24（12）：1558-1564.

［34］Jia X, Zhang J, Sun W, et al. Riboswitch control of aminoglycoside antibiotic resistance［J］. Cell, 2013, 152（1-2）：68-81.

［35］Russell SJ, Peng KW, Bell JC. Oncolytic virotherapy［J］. Nat Biotechnol, 2012, 30（7）：658-670.

［36］Ketzer P, Kaufmann JK, Engelhardt S, et al. Artificial riboswitches for gene expression and replication control of DNA and RNAviruses［J］. PNAS, 2014, 111（5）：E554-E562.

［37］Dietrich JA, McKee AE, Keasling JD. High-throughput metabolic engineering：advances in small-molecule screening and selection［J］. Annu Rev Biochem, 2010, 79（1）：563-590.

［38］Jang S, Yang J, Sang WS, et al. Chapter seventeen-riboselector：riboswitch-based synthetic selection device to expedite evolution of metabolite-producing microorganisms［J］. Methods in Enzymology, 2015, 550：341-362.

［39］Yang J, Seo SW, Jang S, et al. Synthetic RNA devices to expedite the evolution of metabolite-producing microbes［J］. Nat Commun, 2013, 4（1413）：1- 7.

［40］Muranaka N, Sharma V, Nomura Y, et al. An efficient platform for genetic selection and screening of gene switches in Escherichia coli［J］. Nucleic Acids Research, 2009, 37（5）：e39.

［41］Park M, Tsai SL, Chen W. Microbial biosensors：engineered microorganisms as the sensing machinery［J］. Sensors, 2013, 13（5）：5777-5795.

［42］Avciadali M, Wilhelm N, Perle N, et al. Absolute quantification of cell-bound DNA aptamers during SELEX［J］. Nucleic Acid Ther, 2013, 23（2）：125-130.

［43］Win MN, Smolke CD. A modular and extensible RNA-based generegulatory platform for engineering cellular function［J］. PNAS, 2007, 104（36）：14283-14288.

［44］Hull CM, Anmangandla A, Bevilacqua PC. Bacterial riboswitches and ribozymes potently activate the human innate immune sensor PKR［J］. ACS Chem Biol, 2016, 11（4）：1118-1127.

（責任編輯 狄艷紅）

Applications of Riboswitch-based Novel Regulation System of Gene Expression

XIONG Ying-zhe CAO Yuan-qin XIAO Ling-hui LI Zhao-fa
（1. Institution of Molecular Medicine，Huaqiao University，Quanzhou 362021；2. School of Biomedical Science，Huaqiao University，Quanzhou 362021）

Riboswitches are cis-acting elements that can respond to the environmental changes of the cell by altering its conformation to achieve the regulation of gene expression. Due to its characteristics of simple regulation system without proteins involved，response fast，short sequences with simple structure，and easy to design and modify，applying it in biomedical area should be in superiority. The review addresses the advance of the structure and regulation mechanism of riboswitches，as well as the applications of this novel regulation system of gene expression in gene therapy，the development of novel target for antibiotic，the safety switch for virus vaccine，and the new riboselectors and biosensors，aiming at inspiring the application of riboswitches in China.

riboswitch；regulation system of gene expression；mechanism

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017.02.006

2016-04-29

福建省引導性項目（2016Y0063），福建省自然科學基金資助項目（2013J01381），中央高校基本科研業務費資助項目（JB-ZR1142）

熊瑩喆，女，碩士，研究方向：病毒檢測；E-mail：xiongyingzhe@hqu.edu.cn

李招發，男，博士，副教授，研究方向：基因工程，生物藥物；E-mail：lizhaofa@hqu.edu.cn