酸藤子提取物及其抑菌作用的研究

凌春耀，梁 鳳，李 依，張 志，高雪梅

（吉林農(nóng)業(yè)科技學院制藥工程學院，吉林 132101）

酸藤子提取物及其抑菌作用的研究

凌春耀，梁 鳳，李 依，張 志，高雪梅※

（吉林農(nóng)業(yè)科技學院制藥工程學院，吉林 132101）

探討酸藤子根、莖、葉提取物的抑菌活性。通過乙醇提取法和水提取法分別對酸藤子根、莖、葉進行提取，采用濾紙片擴散法對酸藤子根、莖、葉提取物的抑菌活性進行研究。結果表明，酸藤子根、莖、葉提取物對供試菌種中的細菌有不同程度的抑制作用，莖、葉的水提取物對酵母菌無抑菌作用，兩種方法提取的根部提取物普遍抑菌作用高于其他部位。酸藤子提取物有一定的抗菌作用，可以作為抗菌藥應用。

酸藤子；提取物；抑菌作用

酸藤子［Embelia laeta（L.)Mez］系紫金牛科酸藤子屬植物，分布于我國東南、華南、西南等地區(qū)，資源較豐富，是攀緣灌木或藤本，稀小灌木，長1～3m，幼枝無毛，老枝具皮孔[1]。酸藤子屬植物在廣西地區(qū)一直以來都是民間常用藥，有廣泛的民間使用基礎。酸藤子其根葉可散瘀止痛，收斂止瀉，治跌打腫痛、腸炎腹瀉、咽喉炎、胃酸少、痛經(jīng)、閉經(jīng)等癥[2]；嫩尖及葉可生食，味酸，助消化，有強壯補血之效；根葉可作獸藥，治傷食脹氣，熱通口渴[3]。

目前人們?yōu)榱搜娱L食品的保質期，在食品的生產(chǎn)、加工和儲存時需加入防腐劑。但近來所使用的合成防腐劑都有一定的安全性問題，因此選擇純天然的防腐劑有現(xiàn)實的意義。目前對酸藤子研究還較少，文獻報道中主要是對酸藤子中的化學成分[4]、酸藤子葉的營養(yǎng)成分[5]及其生藥學鑒別[6]進行研究，筆者未見有對其提取和抑菌作用的研究報道。楊翠先[7]等人對酸藤子同屬植物大葉酸藤子（Embelia subcoriacea）乙醇提取物進行抑菌活性實驗，結果表明其醇提物對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌及白色念球菌的生長有抑制作用。本實驗針對酸藤子根、莖、葉不同部位提取物的抑菌作用進行研究，以初步證明其抑菌作用。旨在研究開發(fā)具有保健與防腐于一體的無毒無副作用的天然防腐劑。

1 材料、儀器與方法

1.1 材料

1.1.1 原料 本實驗酸藤子全草于2014年4月采自廣西興業(yè)縣，陰干后，分為根、莖、葉三部分密封保存。

1.1.2 菌種 金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），大腸桿菌（Escherichia coli），由吉林農(nóng)業(yè)科技學院制藥工程院動物遺傳繁育實驗室提供；酵母菌（Saccharomyces cerevisiae)，內蒙赤峰安琪酵母股份有限公司生產(chǎn)的高活性酵母。

1.1.3 儀器 FW135型中草藥粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）；DK-98-IIA電熱恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）；RE-3000B旋轉蒸發(fā)器（上海雅榮生化設備儀器有限公司）；SHBB95A型循環(huán)水式多用真空泵（上海豫康科教儀器設備有限公司）；DHP-9052型電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科技有限公司）；凈化工作臺（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司）；BXM-30R立式壓力蒸汽滅菌器（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠）；DD-Z300恒溫振蕩器（江蘇太倉市實驗設備廠）。

1.2 方法

1.2.1 抑菌活性成分提取 乙醇浸漬法：參照楊翠先[7]等人對大葉酸藤子的提取方法，將干燥至恒重的酸藤子根、莖、葉分別稱取25 g，進行粉碎，過二號篩；將粉末用125mL的80%乙醇浸泡7d；抽濾，用80%乙醇分別洗滌兩遍，再抽濾；用濾液旋轉蒸發(fā)揮去乙醇，收集濃縮液，置于45℃的干燥箱干燥并稱重。水提醇沉法提取[8]：將酸藤子根、莖、葉分別稱取25 g進行粉碎，過二號篩，用蒸餾水浸潤1 h，用水煎煮2次。第1次加水500 mL，提取1 h，濾過；第2次加水500 mL提取30 min，濾過，合并2次濾液，將其濃縮至50 mL左右。冷卻室溫，加入無水乙醇溶液，使其醇含量達到80%，置于4℃冰箱冷藏24 h，抽濾，濃縮，置于45℃的干燥箱干燥并稱重。

1.2.2 濾紙片擴散法[9-11]濾紙片擴散法藥敏試驗是觀測藥物的抑菌效果的一種有效檢測方法，藥液通過濾紙的吸附、擴散，從而在菌板上形成抑菌圈，觀測其直徑大小，判定藥液的抑菌效果強弱。一般情況抑菌圈＜10 mm為低敏，10 mm＜抑菌圈＜15 mm為中敏，15 mm＜抑菌圈＜20 mm為高敏，抑菌圈＞20 mm為極敏，無抑菌圈為不敏感。

1.2.3 培養(yǎng)基制備 PDA培養(yǎng)基（酵母菌用）：馬鈴薯切成小塊，稱取100 g，置于500 mL水中，煮沸30 min，紗布過濾，補足失水，加入10 g葡萄糖。分別取200 mL、300 mL分裝，得到1號、2號培養(yǎng)基，再向2號培養(yǎng)基加入10 g瓊脂，加熱溶解，補足失水，包扎，121℃高壓蒸汽滅菌20 min，分別得到PDA液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。LB培養(yǎng)基（金黃色葡萄球菌、大腸桿菌用）：分別稱取胰蛋白胨2 g，氯化鈉2 g，酵母提取物1 g各兩份，置于200 mL水中，溶解，得到3、4號培養(yǎng)基；再稱取胰蛋白胨5 g，氯化鈉5 g，酵母提取物2.5 g，加500 mL蒸餾水溶解，加入6 g瓊脂，加熱溶解，得到5號培養(yǎng)基。將3、4、5號培養(yǎng)基包扎，121℃高壓蒸汽滅菌20 min。

1.2.4 菌懸液的制備 在凈化工作臺上，將高活性酵母用無菌蒸餾水稀釋，并在斜面培養(yǎng)基中劃線培養(yǎng)，置于培養(yǎng)箱中24 h，得到各個菌的單個菌落。用接種環(huán)挑取單個酵母菌菌落接種于高壓滅菌后的上述的1號液體培養(yǎng)基中；用移液槍吸取大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的菌種液10 μL，接種到3號、4號液體培養(yǎng)基中，作好標記；將金黃色葡萄球菌和大腸桿菌放入37℃恒溫振蕩器培養(yǎng)10 h，酵母菌放入28℃振蕩培養(yǎng)10 h，得到菌懸液。

1.2.5 菌板制備及測定抑菌圈 將提取物分別配制成0.01 g/mL的藥液，將直徑10 mm的無菌濾紙片，浸泡于藥液中12 h，并用乙醇、蒸餾水作好空白對照。將上述2號和5號固體培養(yǎng)基分別加熱溶解，在超凈臺中分別倒入培養(yǎng)皿制成平板培養(yǎng)基，冷去凝固，用移液槍分別吸取200 μL大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、酵母菌的菌懸液注入平皿固體培養(yǎng)基中，用涂菌棒涂勻，即得菌板。將藥敏試紙貼在菌板上，以無菌蒸餾水、乙醇的試紙作空白對照，作好標記。大腸桿菌、金黃色葡萄球菌放入37℃的恒溫箱，酵母菌放入28℃的恒溫箱，培養(yǎng)12 h。測量其抑菌圈的大小，比較抑菌效果。

2 結果與討論

2.1 浸膏得率[12]提取結果

酸藤子根、莖、葉經(jīng)醇提法和水提醇沉法后，得到濃縮液，置于干燥箱低溫干燥，得到提取物浸膏，其結果見表1。

表1 不同方法提取酸藤子不同部位的有效成分含量

通過表1可以看出，用80%乙醇提取法和水提醇沉法得到浸膏的量大小順序分別為：根＞莖＞葉（醇提），根＞葉＞莖（水提）。總體反映出酸藤子的同一部位用不同方法提取，得到產(chǎn)物的量不一樣，且明顯表明80%乙醇提取得到的所需產(chǎn)物多于水提醇沉法得到的所需產(chǎn)物量。

2.2 抑菌效果

酸藤子不同部位經(jīng)80%乙醇浸提法和水提醇沉法提取得到濃縮液，通過濾紙片擴散法得到結果見表2。

表2 不同方法提取酸藤子不同部位的提取物對3種菌的抑菌圈直徑

3 結論

3.1 不同部位抑菌效果分析

由表2可知，對于酸藤子不同部位用上述兩種不同方法的提取物，對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和酵母菌的抑制程度存在差異，兩種方法得到根的提取物對于3種菌的抑菌效果較為明顯，而莖、葉的提取物對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌也有較為明顯的抑菌效果，但對酵母菌無抑菌效果。

3.2 不同提取方法抑菌效果分析

由表2可知，對于金黃色葡萄球菌，莖、葉的水提產(chǎn)物的抑菌能力較強于醇提的；水提的產(chǎn)物對大腸桿菌生長抑制力大于醇提的產(chǎn)物；而對于酵母菌則是醇提的產(chǎn)物抑菌能力較強，莖、葉的水提產(chǎn)物對其無抑菌作用。

3.3 不同菌種抑菌效果分析

由表2中的數(shù)據(jù)可得，菌種不同，酸藤子提取物對其的抑菌效果不相同，水提醇沉法的莖、葉提取物對酵母菌無抑菌效果，但對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌有較為明顯的抑菌作用。醇提中的根提取物對大腸桿菌的抑菌能力不顯著，對金黃色葡萄球菌和酵母菌有較強的抑菌能力。

4 討論

從本研究的抑菌結果表明，酸藤子提取物有一定的抗菌作用，但不同的提取方法得到的產(chǎn)物抑菌效果不一致，抑菌效果在不同部位和不同菌種之間也存在一定的差異，酸藤子根部用不同方法提取，針對不同菌群進行藥敏試驗，得到的抑菌效果有較為明顯的強弱之分。在根、莖、葉提取物抑菌試驗的對比中，普遍是根部的提取物抑菌效果較好，莖、葉處于地表，生長迅速，積累的物質不多，故根部抑菌效果普遍優(yōu)于莖葉。因此，酸藤子根提取物對細菌有較強的抗菌作用，具有作為天然防腐劑應用于食品工業(yè)的潛力。雖然唐天君等人對酸藤子化學成分進行了分析研究，但對其根莖葉的抑菌作用還沒有受到重視。酸藤子抑菌的主要成分尚未清晰，需要對其進一步研究分析，以便應用酸藤子為人類生活服務。

[1]福建植物志編寫組.福建植物志（第4卷)[M].福州：福建科學技術出版社，1990：87-99.

[2]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草（第5冊第13 卷)[M].上海：上海科學技術出版社，1999：51-57.

[3]福建省科學技術委員會，福建植物志編寫組.福建植物志（第4 卷)[M].福州：福建科學技術出版社，1982：110-125.

[4]唐天君，吳鳳鍔.酸藤子（Embelia laeta)化學成分的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2004，16（2)：129-130.

[5]黃曉東，黃曉冰.酸藤子葉營養(yǎng)成分分析與評價[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2006，32（7)：108-110.

[6]梁臣艷，梁 雁，蔡 毅，等.酸藤子的生藥學鑒別[J].華西藥學雜志，2013，28（1)：62-64.

[7]楊翠先，左國營，韓 峻，等.26種滇產(chǎn)植物提取物的體外抗耐藥菌作用研究[J].廣西植物，2002，32（3)：400-405.

[8]崔福德.藥劑學[M].第七版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2014：332. [9]李春美，杜 靖，謝筆鈞.柚皮提取物的抑菌作用[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2004，30（1）：38-41.

[10]任 榮，柴軍紅，金志民，等.狼爪瓦松全草粗提物體外抑菌作用研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2011，39（14）：8 353-8 354，8 356.

[11]洪 英，黃 雁，魏良宇.淺談紙片擴散法藥敏試驗[J].福建畜牧獸醫(yī)，2004，26（5）：56-57.

[12]何 雁，辛洪亮，黃 愷，等.水提醇沉法中醇沉濃度對板藍根泡騰片制備過程的影響[J].中國中藥雜志，2010，35（3)：288-292.

責任編輯：吳艷玲

Study on the Extractive and Its Antimicrobial Activity from Embelia laeta

LING Chunyao,LIANG Feng,LI Yi,ZHANG Zhi,GAO Xuemei
（Jilin Agricultural Science and Technology University School of Pharmaceutical Engineering,Jilin 132101）

This paper is to study on the antimicrobial activity of Extractive from roots,stems and leaves of Embelia laeta.The roots,stems and leaves are extracted by ethanol extraction and water extraction,and by filter paper method,the antimicrobial activity of roots,stems and leaves of Embelia laeta were detected.Results indicate that three extracts from Embelia laeta exhibited different inhibitory effects.Embelia ethanol extract had antibacterial,stems and leaves of the water extract no inhibitory effect on Saccharomyces cerevisiae,two methods of extraction of the three bacteria,the root extracts generally higher than other parts of the antimicrobial effect.Embelia laeta pulp extract also exhibited obvious inhibitory effects on bacteria,so it can be used as a natural preservative.

Embelia laeta；extractive；antimicrobial activity

R284，R285

A

2016-05-03

吉林農(nóng)業(yè)科技學院大學生科技創(chuàng)新項目（吉農(nóng)院合字[2014]第087號）

凌春耀（1992-），男，廣西壯族自治區(qū)玉林市人，吉林農(nóng)業(yè)科技學院2012級制藥工程專業(yè)學生。

※為本文通訊作者