復發性流產與免疫功能狀態的關系

陳方耿，莫志平

(東莞市東坑醫院婦產科，廣東 東莞 523451)

復發性流產與免疫功能狀態的關系

陳方耿，莫志平

(東莞市東坑醫院婦產科，廣東 東莞 523451)

目的 探討復發性流產與免疫功能狀態的關系。方法 選擇復發性流產產婦152例作為流產組，依據流產類型分為復發組(復發性流產，61例)和原發組(原發性流產，91例)；選取同期正常分娩的產婦50例作為正常組。采用流式細胞儀進行免疫功能(血清CD3、CD4、CD8水平)的檢測，采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血清抗精子抗體(AsAb)，比較各組產婦血清免疫功能，分析血清AsAb與免疫功能狀態的關系。結果 在血清AsAb、CD3、CD4、CD4/CD8水平方面，流產組明顯高于正常組，復發組明顯高于原發組(均P<0.05)；血清AsAb與CD3、CD4、CD4/CD8呈正相關關系(r1=0.572，P<0.05；r2=0.513，P<0.05；r3=0.647，P<0.05)。結論 復發性流產與患者的免疫功能狀態有關，檢測患者免疫因子水平有利于評估患者的病情，提示醫師應重點關注免疫功能狀態紊亂的產婦。

復發性流產； 免疫功能； 抗精子抗體

復發性流產是臨床上常見的產科疾病之一，是指連續發生3次或3次以上的自然流產，流產時可導致停經后陰道出血、腹痛等癥狀，嚴重影響患者的身心健康[1]。目前，復發性流產的病因較為復雜，與母體生殖道異常、內分泌異常、免疫功能異常、生殖道感染等有關，但多數患者于臨床上找不到明確病因，故尋找其病因對指導患者的臨床治療具有重要的臨床意義[2]。有研究[3]表明，復發性流產多與患者免疫功能狀態有關，機體免疫系統調節紊亂者具有更高的流產風險。本研究通過回顧性分析患者及正常產婦的免疫功能狀態，探討復發性流產與免疫功能的關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2012年9月至2015年12月東莞市東坑醫院收治的復發性流產產婦152例作為流產組，年齡23～41歲，平均(30.47±5.94)歲，流產次數1～6次，平均流產次數(3.62±0.71)次，依據流產類型分為復發組(復發性流產，61例)和原發組(原發性流產，91例)。復發組：年齡23～40歲，平均年齡(30.02±5.72)歲，流產次數3～6次，平均流產次數(4.79±0.81)次；原發組：年齡24～41歲，平均年齡(30.481±5.99)歲，流產次數1～3次，平均流產次數(1.24±0.24)次。選取同期正常分娩的產婦50例作為正常組，年齡21～40歲，平均年齡(30.96±6.31)歲。本研究經本院倫理委員會審批且通過，3組患者年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入和排除標準

納入標準：1)復發組經病史證實有連續發生3次或以上自然流產[4]；2)丈夫精液常規無異常、無不育等疾病；3)患者或其家屬簽署知情同意書。排除標準：1)伴有心、肝、腎等重要器官嚴重性疾病；2)有血液系統嚴重性疾病；3)檢測前3個月內有免疫類藥物治療史。

1.3 免疫功能檢測

研究對象于早晨空腹抽取左上臂靜脈血4 mL置入無菌且裝有0.2 mL(109mmol·L-1)枸櫞酸鈉(湖南爾康制藥股份有限公司)的抗凝試管中充分混勻，分別加入20 μL CD3-PC5、CD4-FITC、CD8-PE單抗，以小鼠抗人FITC為對照，混勻后室溫避光孵育30 min，加入2 mL紅細胞裂解液混勻后室溫避光孵育10 min，1200 r·min-1離心5 min，棄上清，加入2 mL磷酸鹽緩沖液(PBS)混勻后再離心洗劑1次，加入500 μL PBS重懸后，通過美國Beckman Coulte公司提供的Coulter Epics-XL型流式細胞儀進行CD3、CD4、CD8水平的檢測，并計算CD4/CD8。以上單抗和紅細胞裂解液均為美國Beckman Coulte公司產品，購自北京友華志科公司，所有操作均嚴格依據說明書相關規定進行。

1.4 血清抗精子抗體(AsAb)檢測

研究對象血液樣本采集同免疫功能檢測，完畢后3000 r·min-1離心10 min，取適量上清液置入無菌試管中，滴入AsAb試劑[試劑盒由南京基蛋生物科技有限公司提供，蘇食藥監械(準)字2013第2400088號，50人份·盒-1]，采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血清AsAb，用酶標儀測定吸光度繪制標準曲線，并通過標準曲線來計算上述因子的表達水平，所有操作均嚴格依據說明書相關規定進行。AsAb的正常值范圍為0～70 mU。

1.5 統計學方法

應用SPSS20.0統計軟件處理數據，計數資料比較采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，血清AsAb與免疫功能狀態的關系采用Pearson分析法分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 流產組與正常組血清AsAb、CD3、CD4、CD4/CD8水平比較

流產組患者血清AsAb、CD3、CD4、CD4/CD8水平明顯高于正常組(均P<0.05)，2組患者血清CD8水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

組別nCD3/%CD4/%CD8/%CD4/CD8AsAb/mU流產組15274.23±8.2438.94±4.7128.49±3.671.47±0.33184.23±54.21正常組5062.43±5.2131.29±4.0429.01±3.751.04±0.2420.57±6.76t9.51110.3020.8648.49821.258P<0.05<0.05>0.05<0.05<0.05

2.2 復發組與原發組血清AsAb、CD3、CD4、CD4/CD8水平比較

復發組患者血清AsAb、CD3、CD4、CD4/CD8水平明顯高于原發組(均P<0.05)，2組患者血清CD8水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

組別nCD3/%CD4/%CD8/%CD4/CD8AsAb/mU復發組6176.46±10.2842.13±6.7228.43±3.591.62±0.54224.59±56.79原發組9167.25±5.8934.27±5.7929.02±3.421.12±0.4646.57±10.76t6.0127.4121.0206.37822.001P<0.05<0.05>0.05<0.05<0.05

2.3 血清AsAb與CD3、CD4、CD4/CD8的相關性分析

血清AsAb與CD3、CD4、CD4/CD8呈正相關關系(r1=0.572，P<0.05；r2=0.513，P<0.05；r3=0.647，P<0.05)，見圖1—3。

3 討論

復發性流產又稱習慣性流產，針對其不同病因，選擇不同治療方法，方可有效緩解患者的臨床癥狀及確保患者的臨床療效[5]。近年來，隨著人們生活、飲食等及環境的改變，復發性流產的發病呈逐年上升的趨勢，其治療也逐漸受到人們的關注，但僅有少數患者可明確其病因并予以針對性的治療，故如何明確其病因對治療該疾病具有重要的臨床價值[6-7]。

有研究[8-9]顯示，復發性流產患者多出現免疫功能異常，由機體功能或組織損傷所致，提示復發性流產的發生與免疫功能狀態紊亂有關。龍馭云等[10-11]研究表明，AsAb是一個復雜的病理產物，可直接干擾生殖過程，在復發性流產患者中呈現出高表達狀態，提示其高表達可能是造成流產的重要原因之一。本研究發現，在血清AsAb、CD3、CD4、CD4/CD8水平方面，流產組>正常組，復發組>原發組，Pearson分析法結果顯示血清AsAb與CD3、CD4、CD4/CD8呈正相關關系，表明復發性流產與患者的免疫功能狀態有關，檢測患者免疫因子水平有利于評估患者的病情。在復發性流產發生過程中可能由于病原體感染(如沙眼衣原體、霉菌、滴蟲等)生殖道，引起機體免疫系統一系列的免疫反應，激活體內多種免疫細胞(如CD3、CD4等)，而此類免疫細胞具有重要的免疫調節作用，可合成和分泌大量的免疫因子(如白介素2、白介素4、白介素5等)，這些免疫因子可促進T淋巴細胞增殖，增強機體的免疫應答反應，同時還可刺激母體免疫系統產生循環或生殖道局部的AsAb；AsAb作為一種抗生殖免疫抗體，其在機體中的高表達狀態則可降低精子活力及精子穿透宮頸黏液和透明帶的能力，影響胚胎的正常發育，引起復發性流產的發生[12-13]。同時妊娠是一個極其復雜的生理過程，胚胎所攜帶的基因有一半來自父方，其表達的抗原對于母體來說是外來抗原，正常情況下由于母體免疫系統對胚胎父系抗原識別所產生的反應是免疫營養和免疫防護，使其于母體中可獲得“免疫逃逸”，但上述免疫系統的改變可能使母體免疫系統對胚胎父系抗原識別產生變化，使其喪失“免疫逃逸”，打破孕期母體內存在的復雜免疫調節狀態(即免疫耐受或抑制增強，而免疫排斥反應減弱)，轉變為免疫攻擊，導致機體免疫功能失衡，進而導致母體免疫系統對胎盤乃至胚胎產生免疫排斥，從而干擾母體的正常生殖過程，最終影響胚胎的正常發育，導致復發性流產的發生，是復發性流產的重要病因之一，醫師應重點關注免疫功能狀態紊亂的產婦，及時作出相應的干預治療，以避免不良妊娠結局的發生[14-15]。

綜上所述，復發性流產與患者的免疫功能狀態有關，檢測患者免疫因子水平有利于評估患者的病情，提示醫師應重點關注免疫功能狀態紊亂的產婦。

[1] 李維宏，牟曉玲.黃體酮保胎治療對不明原因復發性流產患者外周血輔助性T淋巴細胞17/調節性T淋巴細胞免疫失衡的影響研究[J].中國全科醫學，2015，18(36)：4444-4449.

[2] 袁敏敏，杜美蓉，王明雁，等.配偶淋巴細胞體外誘生免疫及地屈孕酮治療不明原因反復自然流產的療效比較及對圍產期母嬰的影響[J].生殖與避孕，2015，35(12)：834-839.

[3] 陳建玲.380例淋巴細胞主動免疫療法治療不明原因的復發性流產療效觀察[J].生殖醫學雜志，2015，24(6)：457-460.

[4] 陳靜，李慕軍，黃千貽，等.不明原因復發性流產患者外周血及蛻膜組織中Th17細胞相關效應細胞因子的表達及意義[J].實用臨床醫藥雜志，2015，19(9)：91-93.

[5] 李貴瑜，王謝桐，邢寶相.早期妊娠和復發性自然流產中自然殺傷細胞和T調節細胞作用進展[J].中國藥業，2015，24(B11)：365-368.

[6] 李園美，張倩，趙慧棟，等.早期自然流產患者高密度脂蛋白功能變化及其與甲狀腺自身免疫關系研究[J].中國實用婦科與產科雜志，2015，31(9)：857-860.

[7] 陳海玲，寧學玲.抗子宮內膜抗體和抗精子抗體對不孕者和習慣性流產者的檢測及臨床探討[J].吉林醫學，2013，34(16)：3090-3092.

[8] 崔海麗，劉世文.原因不明反復流產患者主動免疫治療前后免疫細胞的變化[J].濱州醫學院學報，2015，38(2)：101-102,151.

[9] 陳延斌，呂祺.女性不孕及流產患者5種免疫抗體檢測分析[J].中國婦幼保健，2012，27(10)：1524-1525.

[10] 龍馭云.反復自然流產患者血清ThAb、AsAb、EMAb和AoAb檢測的臨床意義[J].放射免疫學雜志，2012，25(6)：606-608.

[11] 趙芬.抗精子抗體(AsAb)與抗子宮內膜抗體(EMAb)在不孕不育流產中的作用分析[J].中外醫學研究，2013，11(23)：45-46.

[12] 白雪，李冬梅，郝妍，等.反復流產患者血清中性激素水平及相關抗體檢測的臨床意義[J].中國婦幼保健，2014，29(29)：4776-4777.

[13] 王貽英，姜瑞華.復發性流產患者免疫治療前后外周血T淋巴細胞表達率的變化及療效研究[J].國際醫藥衛生導報，2016，22(3)：337-339.

[14] 陶華，應婷，張麗娟.習慣性流產患者血清轉移生長因子-β1、抗子宮內膜抗體、腫瘤壞死因子-α及紅細胞免疫、細胞免疫的變化研究[J].中國婦幼保健，2015，30(19)：3217-3219.

[15] 吳涢婷，吳俞虹，王鷺霞，等.補腎益氣祛瘀中藥對自然流產小鼠Th1/Th2細胞因子平衡影響的研究[J].四川中醫，2016，34(2)：47-49.

(責任編輯：鐘榮梅)

2016-08-14

R714.21

A

1009-8194(2017)01-0045-03

10.13764/j.cnki.lcsy.2017.01.018