高血壓狀態下長期使用葛根素對大鼠血生化等指標的影響

施偉麗，徐 浩，叢偉紅，陳可冀

高血壓狀態下長期使用葛根素對大鼠血生化等指標的影響

施偉麗，徐 浩，叢偉紅，陳可冀

目的 探討長期高血壓狀態下使用葛根素對自發性高血壓大鼠(SHR)紅細胞、肝腎功能的影響。方法 Wistar kyoto(WKY)大鼠為對照組，自發性高血壓大鼠隨機分為模型組、氯沙坦鉀組、葛根素高劑量組80 mg/(kg·d)和葛根素常規劑量組40 mg/(kg·d)，給藥10周，檢測血常規、肝腎功相關指標。結果 與模型組比較，葛根素高劑量組和常規劑量組均能明顯減少紅細胞數量、降低紅細胞壓積，減少血紅蛋白量(P<0.05或P<0.01)，氯沙坦鉀組與模型組比較上述指標無顯著變化(P>0.05)；氯沙坦鉀組天門冬氨酸氨基轉移酶、丙氨酸氨基轉移酶、尿素、尿素氮水平較模型組明顯降低(P<0.05或P<0.01)，高劑量葛根素組上述指標與模型組比較差異無統計學意義(P>0.05)，但有下降趨勢；常規劑量葛根素組天門冬氨酸氨基轉移酶較模型組明顯降低(P<0.05)；各組間膽紅素水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。結論 長期給藥對高血壓損傷的肝腎功能、紅細胞有保護作用，本實驗中未見明顯溶血反應。

高血壓；葛根素；紅細胞；膽紅素；肝功能；腎功能；自發性高血壓；大鼠

葛根素是從中藥葛根中提取的一種單一成分，廣泛用于冠心病、心絞痛、高血壓、缺血性腦血管病等，并取得較好的療效，但臨床也有一些不良反應出現，最常見的不良反應是急性血管內溶血和對肝腎功能的影響。高血壓狀態下機體的生理病理有其自己的特征，為了解葛根素對高壓狀態下血液生化等指標的影響。本實驗以自發性高血壓大鼠(SHR)為模型，觀察長期使用葛根素對SHR血細胞、膽紅素、肝腎功能的影響，以期為葛根素臨床用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 動物 9周齡京東SPF級WKY雄性大鼠10只，SPF級自發性高血壓雄性大鼠SHR 45只，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物合格證號：11400700158084，許可證號：SCXK(京)：2012-0001。飼養于西苑醫院SPF級動物房，適應性飼養1周后隨機分為5組，對照組(WKY)10只，模型組15只，氯沙坦組10只、葛根素高劑量組10只、葛根素常規劑量組10只。

1.2 藥物 氯沙坦鉀片(每片100 mg)由杭州默沙東制藥有限公司提供，生產批號：L016172；注射用葛根素凍干粉劑(每瓶0.2 g)由山東瑞陽制藥有限公司提供，生產批號：16041418。

1.3 耗材及儀器 2 mL EDTA K3采血管，生產批號D160433W；5 mL 血清促凝管(Z)，生產批號A16013WC，由西苑醫院提供；全自動血液分析儀(日本東亞SYSMEX株式會Sysmex XE-5000)、全自動生化分析儀(瑞士羅氏公司Cobas8000)由西苑醫院檢驗科提供。

1.4 給藥方法 對照組、模型組每天予生理鹽水1 mL生理鹽水腹腔注射，氯沙坦鉀片組按31.5 mg/(kg·d)灌胃，高劑量葛根素組按80 mg/(kg·d)腹腔注射，常規劑量組給藥劑量40 mg/(kg·d)，給藥10周。

1.5 觀察指標

1.5.1 大鼠體質量及一般情況觀察 各組大鼠每周稱量體重一次，觀察各組大鼠體重變化，每天給藥時觀察大鼠精神狀態、活動情況及毛色。

1.5.2 大鼠溶血指標檢測 實驗結束后腹主動脈采血，檢測血漿紅細胞數量、紅細胞壓積、平均紅細胞體積、紅細胞分布寬度；血紅蛋白量、平均血紅蛋白含量、平均血紅蛋白濃度；血清直接、間接膽紅素及總膽紅素水平(因檢驗前剔除了凝固的血樣，故血常規相關指標的樣品數量與生化指標不一致)。

1.5.3 大鼠肝腎功能指標檢測 肝功能指標：天門冬氨酸氨基轉移酶 、丙氨酸氨基轉移酶、γ谷氨酰轉肽酶；腎功能指標：肌酐、尿酸、尿素、尿素氮。

2 結 果

2.1 大鼠一般情況及體重觀察 對照組大鼠比較安靜，喜睡，膽小易驚，毛色發黃；模型組大鼠易受外界影響，活躍，毛色發白，給藥組與模型組比較未見明顯不同。對照組體重較模型組顯著升高(P<0.05或P<0.01)，藥物組各組間體重比較差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表1。

g

2.2 葛根素對SHR溶血指標的影響 紅細胞數量、形態變化及膽紅素水平是間接反映溶血狀態的常用指標，與對照組比較，模型組紅細胞數量、紅細胞平均體積顯著升高(P<0.01)；葛根素大劑量組、常規劑量組紅細胞數量、紅細胞壓積與模型組比較明顯降低(P<0.05或P<0.01)；氯沙坦鉀組紅細胞各項指標與模型組比較差異無統計學意義(P>0.05)；模型組血紅蛋白、平均血紅蛋白濃度與對照組比較無統計學意義(P>0.05)，但均有升高趨勢；葛根素大劑量組常規劑量組血紅蛋白較模型組顯著降低(P<0.05)，氯沙坦鉀組血紅蛋白各項指標與模型組比較差異無統計學意義(P>0.05)；各組間膽紅素指標比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。詳見表2、表3、表4。

組別n紅細胞計數(×1012/L)紅細胞壓積(L/L)紅細胞平均體積(fl)紅細胞分布寬度(%)對照組77.90±0.24 0.37±0.0147.21±1.2416.82±1.96模型組148.57±0.261)0.37±0.0143.76±1.861)20.40±4.84氯沙坦鉀組78.48±0.35 0.37±0.0143.91±1.5518.80±2.43葛根素高劑量組78.17±0.402)0.35±0.013)43.65±1.6022.50±6.61葛根素常規劑量組98.21±0.482)0.36±0.022)44.04±1.1122.02±5.83 與對照組比較,1)P<0.01;與模型組比較,2)P<0.05,3)P<0.01。

組別n血紅蛋白(g/L)平均血紅蛋白含量(pg)平均血紅蛋白濃度(g/L)對照組7127.57±4.79 16.12±0.21341.57±8.56模型組14130.28±3.17 15.20±0.331)347.78±9.31氯沙坦鉀組7130.71±3.90 15.41±0.25351.57±7.52葛根素高劑量組7124.28±5.622)3)15.22±0.13348.71±11.94葛根素常規劑量組9124.55±8.172)3)15.15±0.22344.33±7.23 與對照組比較,1)P<0.01;與模型組比較,2)P<0.05;與氯沙坦鉀組比較,3)P<0.05。

組別n間接膽紅素(μmol/L)直接膽紅素(μmol/L)總膽紅素(μmol/L)對照組100.39±0.250.50±0.320.89±0.47模型組150.33±0.260.66±0.361.00±0.51氯沙坦鉀組100.29±0.240.72±0.301.01±0.39葛根素高劑量組100.41±0.260.67±0.301.08±0.48葛根素常規劑量組100.34±0.260.64±0.340.98±0.40

2.3 葛根素對SHR肝功能的影響 模型組天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)與對照組比較均明顯升高(P<0.01)；與模型組比較，氯沙坦鉀組AST、ALT顯著降低(P<0.05或P<0.01)；葛根素常規劑量組AST較模型組明顯降低(P<0.05)；葛根素高劑量AST、ALT與模型組比較差異無顯著性(P>0.05)；各組間谷氨酰轉肽酶(GGT)較模型組差異無統計學意義(P>0.05)，但藥物組與模型組比較有下降趨勢。詳見表5。

組別nAST(U/L)ALT(U/L)GGT(U/L)對照組10121.76±15.98 36.46±4.05 0.70±0.31模型組15227.66±32.491)48.26±3.661)1.00±0.78氯沙坦鉀組10196.30±40.832)42.38±4.323)0.80±0.38葛根素高劑量組10211.91±44.18 47.02±6.244)0.64±0.46葛根素常規劑量組10200.40±32.852)46.10±5.93 0.63±0.59 與對照組比較,1)P<0.01;與模型組比較,2)P<0.05,3)P<0.01;與氯沙坦鉀組比較,4)P<0.05。

2.4 葛根素對SHR腎功能的影響 與對照組比較，模型組尿酸、尿素、尿素氮明顯升高(P<0.01)，血肌酐水平顯著降低(P<0.01)；與模型組比較，葛根素組各項指標差異無統計學意義(P>0.05)，但有下降趨勢；氯沙坦鉀組尿素、尿素氮水平較模型組明顯降低(P<0.05)。詳見表6。

組別n肌酐(μmol/L)尿酸(μmol/L)尿素(mmol/L)尿素氮(mg/dL)對照組1037.40±3.1026.10±2.42 5.94±0.4516.63±1.25模型組1528.47±3.741)70.07±34.451)8.61±0.961)24.12±2.701)氯沙坦鉀組1028.30±2.5858.20±27.497.38±0.832)20.66±2.322)葛根素高劑量組1028.00±5.2359.10±24.307.64±1.6721.39±4.68葛根素常規劑量組1027.40±2.6347.30±19.148.07±1.0222.60±2.84 與對照組比較,1)P<0.01;與模型組比較,2)P<0.05。

3 討 論

葛根素是從中藥葛根中提取的主要成分，有降低心肌耗氧量、減慢心率、抗氧化應激、保護內皮等功能[1]，在冠心病、心肌缺血再灌注損傷、缺血性腦卒中、高血壓病、老年性癡呆等心腦血管疾病的治療中取得較好的療效。同時葛根素的不良反應也不容忽視，其中最重要的是急性血管內溶血及對肝腎功能的損傷。臨床高血壓具有潛伏期長、病因復雜、遷延不愈等特點。

本實驗以自發性高血壓大鼠為模型，給藥10周，觀察了葛根素注射液對大鼠外周血紅細胞、血紅蛋白、血清膽紅素這三個溶血指標的影響，同時檢測了肝腎功能相關的指標。葛根素水溶性、脂溶性均較差，口服生物利用度低，靜脈注射是臨床常用給藥方式，但由于大鼠自身特征，靜脈不宜給藥，參考文獻后予腹腔注射給藥[2- 3]。

本實驗中葛根素大劑量組、常規劑量組與模型組比較，紅細胞數量、紅細胞壓積、血紅蛋白含量減少，猜測有兩種可能，其一可能與葛根素溶血反應相關，葛根素致血管內少量紅細胞溶解，使紅細胞數量、壓積及血紅蛋白減少，但本實驗中葛根素雖然降低了紅細胞數量、紅細胞壓積、血紅蛋白含量，但膽紅素、平均血紅蛋白濃度、平均血紅蛋白含量與模型組比較均無明顯改變，即葛根素組的溶血指標沒有出現趨勢一致的顯著變化。另一種可能是葛根素的藥效作用使紅細胞數量、紅細胞壓積、血紅蛋白含量減少。李偲偲等[4-8]研究證明紅細胞與高血壓密切相關，紅細胞結構和功能的改變促進高血壓的發生發展，如紅細胞變形能力的降低，紅細胞數量、黏度增加，紅細胞增寬，紅細胞膜黏彈性改變可損傷內皮功能，促進外周血管阻力增加，從而升高血壓，同時因有效紅細胞數量減少，血紅蛋白代償性增加。本實驗中模型組紅細胞計數較正常對照組明顯升高，紅細胞分布寬度、血紅蛋白較對照組有升高趨勢，提示紅細胞形態改變參與了高血壓的發生，與馮冰等[5]的研究相符。

葛根素治療其他疾病的藥理研究也提示，葛根素能降低紅細胞黏度、改變紅細胞變形能力、減少在病理狀態下代償性升高的血紅蛋白[9-11]。臨床葛根素注射液致溶血的不良反應確實存在，但目前機制仍不清楚。有學者認為葛根素注射液引起的溶血反應可能是因不溶性微粒引起的，或與葛根素原料中的異黃酮或三甲氧基葛根素有關[12- 13]，也可能與其輔料相關，因葛根素水溶性和脂溶性較差，醫用丙二醇是葛根素最常用溶媒。孫露等[14]認為葛根素和丙二醇可能增加對方所致溶血概率。此外制劑生產廠家、研究對象以及給藥方式等也可能是葛根素導致溶血反應的原因。

另外本實驗中SHR體重明顯低于其對照品系WKY組，而藥物組對大鼠體重沒有影響；同時模型組肝功能、腎功能指標也較對照組升高，提示隨著血壓的升高，模型組肝腎功能出現損傷，而氯沙坦、葛根素組降低肝腎功能相關指標，提示葛根素能保護肝腎功能，這與付榮國等[15-17]研究的葛根素對腎臟的保護作用及楊曉敏等[18-20]研究的葛根素保護肝功能的作用一致。但本實驗中藥物對肝腎功能的保護作用源于藥物本身還是依賴于藥物降壓后的效果尚待深入研究。分析文獻中報道的臨床中使用葛根素后出現肝腎損傷的案例可能與病人體質本身差異、伴隨其他疾病或者聯合使用其他藥物有關，尤其對已經發生肝、腎功損傷的個體應謹慎用藥。

本實驗數據提示，長期高血壓狀態下大鼠的肝腎功會出現損傷，紅細胞相關指標發生異常，葛根素長期腹腔注射能改善高血壓大鼠的肝腎功能，調節紅細胞水平。本實驗中葛根素未發現明顯的不良反應事件，以上數據謹為葛根素在高血壓病的臨床應用提供參考。

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(本文編輯王雅潔)

Effects of Puerarin on Blood Biochemistry of Spontaneously Hypertensive Rats in the Condition of Long-term Hypertension

Shi Weili，Xu Hao，Cong Weihong，Chen Keji

Corresponding Author：Cong Weihong Xiyuan Hospital，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100091，China

Objective To investigate the effects of Puerarin on blood biochemistry of spontaneously hypertensive rats (SHR) in the condition of long-term hypertension.Methods Wistar Kyoto (WKY) rats were given normal saline by intraperitoneal injection as control group and SHR were randomly assigned to four groups including model group， losartan group， high dose puerarin group and normal dose puerarin group.All the rats were treated for ten weeks and relevant indexes of blood routine， liver and kidney function were observed.Results Compared with model group， the number of erythrocytes， hematocrit and hemoglobin significantly reduced in high dose puerarin group and normal dose puerarin group (P<0.05 or P<0.01).The levels of alanine amino-transferase (ALT)， aspartate aminotransferase (AST)， urea and blood urea nitrogen (BUN) in losartan group were lower than that in model group (P<0.05 or P<0.01).The level of AST in normal dose puerarin group was lower than that in model group (P<0.05).Conclusion Long term intraperitoneal injection of puerarin had protective effect on liver function， renal function and erythrocyte damage.There was no obviously hemolytic reaction happened in this study.

hypertension；puerarin；erythrocyte；bilirubin；liver function；renal function；spontaneously hypertensive rats

北京市“十病十藥”研發專項(No.Z141100002214011)氣血并治顆粒的制劑開發研究

中國中醫科學院西苑醫院心血管病研究所(北京 100091)

叢偉紅，E-mail：congcao123@yeah.net

R285.5 R256.2

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.06.011

1672-1349(2017)06-0676-05

2016-12-19)

引用信息：施偉麗，徐浩，叢偉紅，等.高血壓狀態下長期使用葛根素對大鼠血生化等指標的影響[J].中西醫結合心腦血管病雜志，2017，15(6)：676-680.