牛病毒性腹瀉病的研究概況

孟小林+劉建華+劉曉娜

摘要：介紹了牛病毒性腹瀉病的病原、臨床癥狀、診斷方法及預(yù)防措施，以期為養(yǎng)殖戶提供參考。

關(guān)鍵詞：牛病毒性腹瀉；持續(xù)性感染；研究進展

中圖分類號：S823 文獻標(biāo)識碼：B 文章編號：1007-273X（2016）11-0010-02

牛病毒性腹瀉（Bovine viral diarrhea，BVD）是由牛病毒性腹瀉病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）引起的一種持續(xù)性接觸動物傳染病。該病主要危害牛、綿羊、山羊、豬、鹿、駱駝等動物的胃腸黏膜組織，因此又被稱為牛病毒性腹瀉、黏膜病。到目前為止，牛病毒性腹瀉廣泛爆發(fā)于土耳其、英國、韓國等全球多個國家和地區(qū)，并且，已給當(dāng)?shù)氐男竽翗I(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失，因此，該病已經(jīng)成為全球養(yǎng)牛業(yè)最為重視的一種牛病毒性傳染病，國際獸醫(yī)局也將其定為B類傳染病[1]。

1 BVDV的介紹

牛病毒性腹瀉病毒是黃病毒科瘟病毒屬成員，與同屬的豬瘟病毒、羊邊界病病毒在抗原性和基因序列方面極其相似。在電鏡下，BVDV粒子呈球形或橢球形，直徑大小約在40～80 nm，表面有囊膜。BVDV對胰酶和氯仿等化學(xué)試劑敏感，難以適應(yīng)酸性環(huán)境，但是對于堿性環(huán)境耐受能力較強，56 ℃條件下病毒會完全失活[2]。根據(jù)BVDV 5′-UTR基因序列的高度保守性特點的不同，可將BVDV分為BVDV-1和BVDV-2兩種基因型。

BVDV可以在牛腎細(xì)胞和牛睪丸細(xì)胞等多種牛組織細(xì)胞中存活。根據(jù)感染BVDV后對細(xì)胞造成的不同影響，可將BVDV分為非致細(xì)胞病變型（Non-cytopathogenic，NCP）BVDV和致細(xì)胞病變型（Cytopathogenic，CP）BVDV兩種生物型，CP型感染細(xì)胞后會誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡現(xiàn)象[3]。

2 BVD的臨床癥狀

BVD的臨床癥狀主要表現(xiàn)為病畜出現(xiàn)發(fā)熱、腹瀉、流產(chǎn)、持續(xù)性感染（Persistently infected，PI）和免疫抑制等現(xiàn)象。BVDV會嚴(yán)重影響動物的生育能力，降低動物的懷孕率，增加受孕母牛出現(xiàn)流產(chǎn)、畸形胎、死胎和木乃伊胎的幾率。持續(xù)性感染牛是傳播BVDV的主要傳染源。妊娠母牛在懷孕的前三個月感染BVDV后就會生產(chǎn)出BVDV持續(xù)性感染牛犢。持續(xù)性感染犢牛每天都會向外界釋放約1千萬個BVDV病毒顆粒，從而傳染給其他動物，造成患病動物出現(xiàn)免疫抑制，降低機體抵抗力，引起二次疾病的發(fā)生。攜帶BVDV的犢牛因為其抗病能力差而極易感染黏膜病，并且在2歲之內(nèi)死亡，僅僅只有少部分犢?？梢源婊?年的時間，而幸存下來的犢牛會對BVDV產(chǎn)生“免疫耐受”，繼而轉(zhuǎn)化為持續(xù)性感染牛。因此，持續(xù)性感染牛不但不會為牛場主帶來任何的經(jīng)濟效益，而且還會終生向外界環(huán)境散毒，造成新的感染，這會給牛場帶來更大的安全隱患。

3 BVD的流行病學(xué)

BVDV可以通過直接或者間接的方式水平和垂直傳播病毒。本病的主要傳染源是BVDV患畜和BVDV攜帶動物。感染BVDV的妊娠母畜產(chǎn)下胎兒則成為持續(xù)性感染動物（PI），其可終生排毒。同時，一些BVDV污染的商用生物制劑如血清、精液等也可造成BVDV的傳播。

BVDV已經(jīng)在世界范圍內(nèi)成為畜牧業(yè)的一個危害性極大的病毒性病原體。自1946年首次發(fā)現(xiàn)該病毒以來，BVD已經(jīng)在全球多個國家均有報道。據(jù)部分國家地區(qū)統(tǒng)計結(jié)果表明，美國BVDV血清陽性率為50%，法國為76%，英國為54%～74%，瑞士為78%～80%，加拿大部分地區(qū)為82%～84%，澳大利亞為89%，印度為17.31%，南美六國（智利、巴西、烏拉圭、阿根廷、秘魯及哥倫比亞）血清平均陽性率高達84.9%。在中國，1980年首次報道了BVDV疫情。近30年間，該病已在中國新疆、四川、黑龍江、重慶等20多個省市呈現(xiàn)大規(guī)模暴發(fā)態(tài)勢[4]。

4 BVDV的診斷方法

4.1 BVDV的分離與鑒定

本方法采取發(fā)病動物的全血、腎臟、脾臟、口鼻分泌物以及淋巴結(jié)，經(jīng)過研磨除菌處理后接種于牛腎細(xì)胞或者牛睪丸細(xì)胞進行病毒的分離與鑒定。研究人員從BVDV陽性仔豬病料中成功分離出一株豬源BVDV，但是，該方法存在一定的局限性，它不僅不能檢測出NCP型BVDV，并且也不能區(qū)分短暫性感染和持續(xù)性感染的牛， 除非3周后對陽性牛進行再次檢測確診，因此，該方法不能廣泛地應(yīng)用于對BVDV的診斷[5]。

4.2 血清學(xué)診斷

血清中和試驗是開展BVD流行病學(xué)調(diào)查的常用方法。該方法通過檢測每個月前后采集血樣的抗體滴度來判斷樣品的患病情況。但是，此方法耗時長，并且不能篩選出免疫耐受牛的感染情況，因此，并不能準(zhǔn)確的判斷BVD的疫情。

瓊脂擴散試驗是目前基層獸醫(yī)站常用的BVD檢測方法。選取可疑動物發(fā)炎或糜爛的組織，不經(jīng)過任何處理，直接與標(biāo)準(zhǔn)陽性血清反應(yīng)，檢測病料中是否存在BVDV抗原。瓊脂擴散試驗雖然省時、省力、操作簡便，但是準(zhǔn)確性較差，敏感性也不如血清中和試驗，因此，不能作為BVDV精確診斷的依據(jù)。

酶聯(lián)免疫吸附試驗是比較常規(guī)的檢測BVDV抗體水平的技術(shù)。雖然，ELISA能較為準(zhǔn)確地檢測出待檢動物BVDV的抗體水平，但它仍有局限性，一方面難以在病畜早期做出診斷，另一方面由于BVD存在于許多免疫耐受的動物體內(nèi)，因此，ELISA無法查出所有的患病動物。目前，國內(nèi)還沒有根據(jù)純化的病毒抗原而建立的ELISA方法，因此，該方法檢測得到的陽性結(jié)果也值得懷疑[6]。

4.3 分子生物學(xué)診斷

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，核酸擴增技術(shù)常用來在實驗室檢測動物病毒性傳染病。核酸擴增技術(shù)包括實時熒光定量PCR技術(shù)、環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)、嵌套式PT-PCR技術(shù)和多聯(lián)PCR技術(shù)等。這些技術(shù)可以利用BVDV特異性引物快速、準(zhǔn)確地檢測出樣品中是否含有BVDV抗原，并且可以將同屬的豬瘟病毒和羊邊界病病毒區(qū)分開來，同時，這些方法還可以明確樣品中BVDV的生物型，這為BVDV的防控工作提供了技術(shù)支撐。

5 BVDV的預(yù)防及控制

目前，為了防止BVDV在牛群中大規(guī)模傳播，凈化已經(jīng)存在的BVDV疫情，各國采取的有效措施主要有疫苗的免疫接種、BVDV病原的鑒定、撲殺持續(xù)性感染動物和提高日常飼養(yǎng)管理水平等。

5.1 BVDV疫苗的研究進展

預(yù)防接種疫苗是防控病毒性傳染病的主要措施。1960年，首次報道分離出一株致細(xì)胞病變型BVDV毒株，即C24V，該毒株廣泛用于BVDV活疫苗的研制。隨后，有超過160種的BVDV滅活疫苗和弱毒活疫苗應(yīng)用于BVD的免疫接種工作，并且取得了一定的預(yù)防效果。研究顯示，BVDV疫苗主要通過以下兩個方面發(fā)揮其預(yù)防作用。一方面，BVDV疫苗可以控制BVDV在畜群內(nèi)進行傳播；另一方面，該疫苗能夠減輕感染動物的患病程度。

5.2 “BVDV控制及根除”計劃

為了加強BVDV的防控工作以及徹底根除BVD，西方各養(yǎng)牛大國在早年間就建立并實施了“BVDV防控根除” 計劃，并且取得了良好的成果。簡而言之，該計劃主要包含三個部分，第一部分是BVDV檢測階段，即在牧群中篩選出可疑動物并進行最終的確定；第二部分是清除階段，即將已感染BVDV的動物及BVDV持續(xù)性感染動物進行合理地焚燒及掩埋；第三階段是生物安全監(jiān)控階段，該階段各地會啟動生物安全防治體系，防止BVDV再次感染健康動物。瑞士已用該計劃在兩年內(nèi)將本地BVDV動物感染數(shù)從原來的1.8%降低為0.2%[7]。歐洲西北部成功地實施了系統(tǒng)性的根除計劃，因此，大部分地區(qū)被視為沒有BVD疫情的區(qū)域。

5.3 日常飼養(yǎng)管理

雖然預(yù)防接種疫苗能預(yù)防BVDV的感染，但是作為獨立的控制措施，免疫接種并不能徹底消除BVDV感染疫情，也不能大幅度地降低BVDV帶來的經(jīng)濟損失，原因不在于現(xiàn)有疫苗的缺陷，而在于BVDV野毒株的差異性以及BVDV特有的持續(xù)性感染癥狀。因此，嚴(yán)格的牛場日常管理以及BVDV持續(xù)性感染牛的淘汰對于BVDV疫情的凈化也至關(guān)重要。

養(yǎng)殖場平時應(yīng)該加強檢疫，防止引進BVDV病牛。BVD尚無特效治療方法。一旦發(fā)現(xiàn)病牛，立即對病牛進行隔離治療或無害化處理，防止BVDV的擴散或蔓延。因此，養(yǎng)殖場應(yīng)該定期通過血清學(xué)檢測方法監(jiān)測牛群BVDV的感染情況，淘汰持續(xù)感染的牛，逐步凈化牛群。

參考文獻：

[1] 鐘發(fā)剛.牛病毒性腹瀉病毒抗原檢測，流行病學(xué)研究及分離株E2基因的克隆表達[J].成都：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

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[3] 邱呂慶，高雙娣，周繼章，等.我國規(guī)模化肉牛場牛病毒性腹瀉/粘膜病流行狀況監(jiān)測[J].中國獸醫(yī)科技，1998，30（5）：15-16.

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