楊梅快繁再生體系的建立綜述

付維+包嘉順+賀金立+劉清波

摘要 楊梅屬于楊梅科楊梅屬小喬木或灌木植物。本文主要對楊梅組織培養過程中外植體和培養基選擇、植物生長調節劑的影響進行了綜述，并對楊梅組培的發展前景進行了展望，以期為楊梅的育苗繁殖提供參考。

關鍵詞 楊梅；組織培養；外植體；培養基

中圖分類號 S662.4 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）05-0075-02

楊梅（Myrica rubra）為楊梅科楊梅屬植物，是喜濕、耐陰寒的亞熱帶水果樹種。楊梅果實味道鮮美、VC含量豐富，并兼具醫療保健和藥用價值。同時楊梅樹具有較高的生態效益和經濟效益[1]。應用植物組織培養技術比常規育苗繁殖系數高，生長旺盛，成活率高，能在一定程度上解決大規模需求[2]。現將楊梅的組織培養研究現狀總結如下。

1 外植體的選擇

1.1 外植體類型

組織培養的理論依據是植物細胞全能性，但不同器官的組織培養所得的結果差異很大。在楊梅組織培養中，李曉強[3]研究了同一個滅菌處理對龍魁楊梅不同外植體部位滅菌效果的影響，結果顯示不同部位的外植體（莖尖、未木質化莖段和半木質化莖段）污染率和枯死率不同，其中半木質化莖段作為離體培養材料效果最好。

1.2 外植體生長狀況

外植體生長的不同時期對組培結果有很大影響，一般認為植株幼嫩組織及幼齡植株上的組織作為外植體更容易誘導成功[4]。而且不同生長環境下的外植體，誘導的結果也會不相同。4—5月有連續多天的紫外光照射下的外植體作試驗材料，污染率比較低。

外植體的選擇是組培成功的關鍵，取材時需要考慮外植體獲得的難易程度、發育程度以及試驗成本，選擇適合的外植體開展試驗研究。

2 培養基的選擇

2.1 培養基類型

大多數木本植物組織培養主要以MS培養基為主[5]，孔梅[6]在楊梅組織培養過程中的不同時期運用了不同激素配比的MS培養基；倪照君[7]在楊梅地方品種“浪蕩子”的組織培養過程中驗證了使用WPM培養基的可行性。此外，碳源和培養基的pH值對楊梅組織培養也會產生一定的影響。糖類主要以蔗糖為主，但糖類濃度要控制得當；若濃度過低，不利于愈傷組織的誘導和分化[8]。大多數木本植物包括楊梅在內要求 pH 值為5.0～6.0，適當調節培養基的pH值會影響培養物呼吸代謝及其物質合成，進而直接或間接地影響愈傷組織及形態形成[9]。

2.2 培養條件

光照、溫度等培養條件對誘導楊梅器官發生、植株再生起著重要調控作用。對于包括楊梅在內的木本植物再生植株來說，長時間光照不足易引起再生植株的玻璃化苗的出現[10]。增加光照，可促進試管苗成熟，加快幼莖木質化，從而降低玻璃化[11]。低溫可以抑制酚類化合物的合成，降低多酚氧化酶的活性，從而減輕褐變。李曉強[3]研究表明，在培養基中添加1.5 g/L活性炭與2.5 g/L聚乙烯吡咯烷酮（PVP）可緩解褐變現象。

3 植物生長調節劑的影響

植物生長調節劑在培養基中的使用種類及使用量對試驗結果有重大影響[12]。離體植物細胞在組織培養的初期往往缺乏自行合成生長素和細胞分裂素的能力，在楊梅器官發生的過程中，細胞分裂素和生長素對芽的誘導和生根均起著重大作用。因此，外源激素是楊梅組織離體培養所必需的。不同比例、濃度或先后配合的激素運用不但可以誘導楊梅細胞分裂和生長，而且能誘導細胞分化和形態發生[13]。6-BA、NAA、GA3、IBA、2，4-D和TDZ等激素都被廣泛應用于楊梅組培[14]。

3.1 對初代培養的影響

在楊梅組織的初代培養中，一般以莖尖或莖段為外植體、輔以NAA、6BA進行培養。6-BA可以有效地誘導芽的萌發與增殖，NAA在低濃度下可以促進莖的生長[6]。在二者的配比合適時，芽的分化率會大大提高[15]。范國強[16]在研究中指出兩者中任何一者的比例出現偏差，都可能對芽的分化率產生重大影響，甚至導致分化率為0。過高濃度的6-BA亦有可能會導致芽的玻璃化[17-18]。在倪照君[7]進行的楊梅初代培養中，WPM培養基配合0.15 mg/L 6-BA和0.03 mg/L NAA效果最佳。

3.2 對繼代培養的影響

在楊梅的繼代培養中，需要添加GA3來進一步促進莖的生長。張小紅[19]研究表明，GA3對苗和莖的伸長有促進作用，并且適當添加GA3將極大地降低玻璃化苗產生的概率。倪照君[7]在研究中發現，相比初代培養，在繼代培養中NAA與6-BA的添加量都要增加，否則易導致植株偏小，葉片偏黃，故而采用添加了1.2 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA和0.5 mg/L GA3的WPM培養基。

3.3 對生根培養的影響

生長素在楊梅生根的過程中扮演著重要的角色。孔梅[6]與Syed Asghar Tori[20]在試驗中發現，IBA對于楊梅無菌苗生根的促進作用遠遠優于IAA和NAA，而且根的進一步生長也會較為正常[21]。孔梅[6]采用添加2.0 mg/L IBA的MS培養基，生根率可達66.67%。

4 楊梅組培的發展前景

目前，對于楊梅組織培養的研究報道相對較少。楊梅繁殖在目前常用的諸如嫁接等技術手段下，面臨著存活率低、繁殖效率低下等問題。楊梅快繁再生體系的建立與完善使短期內生產大量優質種苗成為可能，在此基礎上利用轉基因等技術可展開楊梅品種改良的相關研究，這將極大地促進楊梅產業的發展，并產生較大的社會效益、經濟效益[22-23]。

5 參考文獻

[1] 楊宗金，何冬梅.大理州野生矮楊梅造林技術應用研究[J].林業建設，2003，23（3）：37-40.

[2] 劉玉佩，黃雪琳，康吉利，等.非洲菊組培快繁研究進展[J].現代農業科技，2008（21）：77-78.

[3] 李曉強.楊梅組織培養技術研究[D].南寧：廣西大學，2010.

[4] 袁宜如，李曉云.鶴望蘭組織培養研究進展[J].安徽農業科學，2010，38（28）：15504-15506.

[5] 張法勇，劉向東，高秀麗.木本植物組織培養器官發生植株再生研究進展[J].河北林果研究，2005，20（3）：234-238.

[6] 孔梅，藍增全.云南野生楊梅快繁體系的建立[J].浙江農業科學，2015， 56（10）：1557-1560.

[7] 倪照君，廖雪竹.楊梅地方品種“浪蕩子”組培快繁體系建立[J].中國南方果樹，2015，44（5）：59-62.

[8] 黃學林，李筱菊.高等植物組織離體培養的形態建成及調控[M].北京：科學出版社，1995.

[9] 李浚明.植物組織培養教程[ M].北京：中國農業大學出版社，2002.

[10] 鄭均寶，田建強，蘇愛敏.741楊和蘋果試管苗玻璃化現象及其轉化研究[J].河北林學院學報，1996，11（1）：6-12.

[11] 刑世巖.木本植物組織培養玻璃化的成因和控制[J].泰安林業科技，2000，17（2）：11-14.

[12] 王蒂.植物組織培養[M].北京：中國農業出版社，2004.

[13] 崔凱榮，劉新民.植物激素對體細胞胚胎發生的誘導與調節[J].遺傳，2000，22（5）：349-354.

[14] 廖雪竹，倪昭君，高志紅.楊梅組織培養研究進展[J].中國南方果樹，2015，44（2）：140-150.

[15] 盧小三，范素潔，張素，等.楊樹誘導芽分化中6-BA和NAA配比優化研究[J].湖北林業科技，2010（3）：17-21.

[16] 范國強，曲巧曉，李松林.泡桐愈傷組織再生植株的誘導與培養[J].植物學通報，2002，19（1）：92-97.

[17] 陳兵先，黃寶靈，呂成群，等.植物組織培養試管苗玻璃化現象研究進展[J].林業科技開發，2011，25（1）：1-5.

[18] 何芳蘭，李毅，趙明，等.影響高山杜鵑試管苗玻璃化的幾個因素研究[J].西北林學院學報，2008，23（1）：104-107.

[19] 張小紅，陳彥生，康冰，等.激素對香椿腋芽增殖生長的的效應[J].西北植物學報，2001，21（4）：756-760.

[20] TORI S A.Studies on somatic embryogenesis and in vitro propa-gation systems in Myrica rubra Sieb & Zucc[D].杭州：浙江大學，2005.

[21] 張明麗，李青.木本觀賞植物組織培養及植株再生的研究進展[J].河北林業科技，2004（2）：23-26.

[22] 李群，杜文平，王米力，等.植物組織培養中控制污染技術研究[J].四川林業技術，1999，20（4）：22-26.

[23] 鞏健.植物組織培養快繁中存在的主要問題及防止措施[J].科技信息，2008（3）：214-215.