激素治療對重癥肌無力患者B細(xì)胞激活的抑制作用研究

張海軍

河南安陽市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 安陽 455000

激素治療對重癥肌無力患者B細(xì)胞激活的抑制作用研究

張海軍

河南安陽市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 安陽 455000

目的 探討激素治療重癥肌無力患者的臨床效果并分析其對B細(xì)胞激活的抑制作用。方法 抽選2014-01—2015-02在我院接受救治的重癥肌無力患者40例為觀察組，以同期前來體檢的健康對象40例為對照組，2組均于入院時給予B細(xì)胞檢測，其中AchR、CD21兩項(xiàng)雙陽性B細(xì)胞使用流式細(xì)胞儀檢測，CD21mRAN檢測則使用熒光定量PCR法檢測，對比患者檢測結(jié)果差異。觀察組給予激素治療，對比治療前后B細(xì)胞檢測結(jié)果差異。結(jié)果 觀察組治療前雙陽性B細(xì)胞、CD21mRNA檢測結(jié)果均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組有效36例，無效4例。治療有效者雙陽性B細(xì)胞表達(dá)水平為(2.81±0.66)%、CD21mRNA檢測結(jié)果為(0.182±0.072)，治療無效者分別為(5.11±1.02)%、(0.281±0.102)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組治療后所有患者的雙陽性B細(xì)胞、CD21mRNA檢測結(jié)果均低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 AchR及CD21兩項(xiàng)雙陽性B細(xì)胞、CD21mRNA的表達(dá)隨重癥肌無力患者病情發(fā)展而不斷升高，也隨患者的治療進(jìn)行而不斷下降，可見其在重癥肌無力患者的病情發(fā)展、治療、預(yù)后中均有重要的指導(dǎo)作用。

激素治療；重癥肌無力；健康對象；B細(xì)胞檢測

重癥肌無力是當(dāng)前臨床較為常見的一種免疫性疾病類型，患者表現(xiàn)出明顯的神經(jīng)與肌肉接頭處的傳遞功能障礙，臨床癥狀則表現(xiàn)為局部或全身性的骨骼肌無力、疲勞癥狀，對患者身體健康及生活質(zhì)量均造成嚴(yán)重影響[1]。臨床免疫學(xué)研究結(jié)果顯示[2]，重癥肌無力患者的發(fā)病原因及病情發(fā)展均與其自身多項(xiàng)免疫系統(tǒng)及亞群的相互作用密切相關(guān)，而B淋巴細(xì)胞則與人體免疫機(jī)制存在重要聯(lián)系。本研究探討激素治療重癥肌無力的臨床效果及其對重癥肌無力患者B細(xì)胞激活的抑制作用，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 抽選2014-01—2015-02在我院接受救治的重癥肌無力患者40例為觀察組，均給予疲勞試驗(yàn)、電生理檢查并結(jié)合患者臨床癥狀表現(xiàn)確診[3]。以同期前來體檢的健康對象40例為對照組。觀察組男20例，女20例；年齡20～60(40.5±7.4)歲，病程2～6(3.8±1.1)a。對照組男21例，女19例；年齡20～60(38.8±7.7)歲。2組臨床資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本次研究經(jīng)過我院倫理委員會批準(zhǔn)，患者簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)[4]：(1)有嚴(yán)重心臟、肝臟、腎臟等嚴(yán)重臟器功能障礙；(2)有慢性感染、惡性腫瘤及自身免疫系統(tǒng)障礙疾病；(3)入組前3個月前有激素使用史或免疫抑制劑使用史。

1．2 研究方法 觀察組均給予激素治療，甲基潑尼松龍1 000 mg/d靜滴，持續(xù)3 d后調(diào)整劑量為500 mg/d，再次持續(xù)3 d后調(diào)整劑量至80 mg/d并持續(xù)3 d。而后給予潑尼松口服治療60 mg/d，持續(xù)30 d，期間根據(jù)患者實(shí)際癥狀變化每周遞減用藥劑量直至停藥。針對觀察組治療前的AchR與CD21兩種雙陽性B細(xì)胞的水平，對比雙陽性B細(xì)胞水平與CD21mRNA水平治療前后差異。檢測方法：使用美國RD公司生產(chǎn)的二抗流式抗體試劑盒(負(fù)責(zé)患者FITC、PE、APC等指標(biāo))、美國santa cruz公司生產(chǎn)的抗體試劑盒(負(fù)責(zé)患者AchR、CD19、CD21等指標(biāo))、聯(lián)科生物科技有限公司生產(chǎn)的淋巴細(xì)胞分離液、美國Promega公司生產(chǎn)的M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶及緩沖系統(tǒng)、美國B-D公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀等完成檢測。AchR、CD21檢測使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行，患者治療結(jié)束后于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血4～6 mL，使用密度梯度離心分離法完成血液樣本淋巴細(xì)胞的分離，同時將事先準(zhǔn)備好的Ficoll分層液1 500 g置入血液樣本中，持續(xù)20 min后吸除單個核細(xì)胞層，同時將細(xì)胞濃度調(diào)整至1×104/mL。依照試劑說明書分別加入AchR、CD19、CD21抗體后將其避光保存，染色持續(xù)30 min后再分別加入FITC、PE、APC標(biāo)記的二抗并再次避光保存，染色持續(xù)30 min。最終使用FL1、FL3雙通道完成對患者血液樣本中AchR、CD21雙陽性B細(xì)胞表達(dá)的檢測；CD21 mRNA檢測使用熒光定量PCR法，取單個核細(xì)胞1 mL，持續(xù)離心10 min后置入1 mL的Trizol試劑，依照試劑盒說明書提取總RNA，經(jīng)M-mLV逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)露出cDNA的第一條鏈，使用熒光定量PCR法測定CD21 mRNA。對照組僅給予抽血檢測，檢測指標(biāo)、方法同觀察組。

1．3 觀察指標(biāo) 使用美國重癥肌無力協(xié)會制定的癥狀評定標(biāo)準(zhǔn)測定患者癥狀變化并判定治療效果[5]：有效：治療后癥狀積分相較治療前改善程度≥2.6分；無效：未達(dá)到上述標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2．1 2組治療前后檢測結(jié)果對比 觀察組治療前雙陽性B細(xì)胞表達(dá)水平、CD21mRNA檢測結(jié)果均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，治療后低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2．2 觀察組治療效果 有效36例，無效4例。治療有效者雙陽性B細(xì)胞表達(dá)水平為(2.81±0.66)%、CD21mRNA檢測結(jié)果為(0.182±0.072)；治療無效者平均雙陽性B細(xì)胞表達(dá)水平為(5.11±1.02)%，CD21mRNA檢測結(jié)果為(0.281±0.102)，治療有效與治療無效者兩項(xiàng)指標(biāo)比較均差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表1 2組治療前后檢測結(jié)果對比 (±s)

3 討論

重癥肌無力是一種由患者體內(nèi)乙酰膽堿受體抗體介導(dǎo)、細(xì)胞免疫依賴、補(bǔ)體參與且病情主要集中在患者神經(jīng)與肌肉接頭處突觸后膜乙酰膽堿受體的獲得性、自身性免疫性疾病類型[7]。研究顯示[8]，我國范圍內(nèi)重癥肌無力患者的病發(fā)率約為7.4/10萬人。同時有關(guān)研究顯示[9]，重癥肌無力患者的病發(fā)原因與其自身輔助性Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞之間的平衡失衡有密切關(guān)系，其中Th1細(xì)胞在人體中的主要作用為參與到細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)中，具有分泌包括干擾素y、白細(xì)胞介素-2、腫瘤壞死因子-α等促炎性因子的作用；而Th2細(xì)胞在人體中的主要作用為參與到IL-4、IL-6、IL-10等人體分泌抗炎因子的過程中，能有效促進(jìn)人體免疫反應(yīng)進(jìn)程，起到誘導(dǎo)人體免疫耐受、免疫細(xì)胞失衡的作用。上述兩種細(xì)胞在重癥肌無力患者的病發(fā)過程中占非常重要的作用。重癥肌無力作為一種自身免疫性疾病，也是一種由于人體自體免疫細(xì)胞、免疫分子等攻擊神經(jīng)系統(tǒng)為主要病理機(jī)制的免疫性疾病類型，主要發(fā)生在神經(jīng)-肌肉接頭處并最終導(dǎo)致神經(jīng)-肌肉接頭處出現(xiàn)病理癥狀的改變。此類免疫性疾病病情復(fù)雜，了解患者體內(nèi)免疫機(jī)制的變化對預(yù)防、治療均有重要意義。

激素治療是目前臨床重癥肌無力的主要治療方法之一，但同時隨著用藥劑量的不斷增加，患者耐藥性增高的同時也伴隨有多項(xiàng)不良反應(yīng)出現(xiàn)，對患者預(yù)后、生活質(zhì)量等均造成不良影響[10]。B細(xì)胞也被稱為B淋巴細(xì)胞，能夠在抗原的刺激下分化為漿細(xì)胞并轉(zhuǎn)變成為免疫球蛋白等抗體類型，在人體體液免疫過程中占主導(dǎo)地位。B細(xì)胞作為人體中抗體的主要產(chǎn)生細(xì)胞之一，對B細(xì)胞的特異性激活是重癥肌無力發(fā)病機(jī)制的關(guān)鍵。CD21是產(chǎn)生于B細(xì)胞膜上的一種因子，可與C3d、C3dg、iC3b等補(bǔ)體進(jìn)行充分結(jié)合而促使B細(xì)胞激活并產(chǎn)生特異性抗體，對反映人體B細(xì)胞的激活程度有重要作用。本研究結(jié)果顯示，觀察組治療前AchR及CD21雙陽性B細(xì)胞、CD21mRNA檢測結(jié)果均高于對照組(P<0.05)，說明重癥肌無力患者體內(nèi)B細(xì)胞存在過度激活現(xiàn)象。推測可能是由于重癥肌無力患者體內(nèi)的CD21mRNA在基因調(diào)控的作用下不斷升高，最終導(dǎo)致CD21受體含量增加并抑制患者體內(nèi)B細(xì)胞正常凋亡進(jìn)程，反而促使患者體內(nèi)B細(xì)胞不斷激活并含量增加，最終導(dǎo)致重癥肌無力病發(fā)。本文觀察組治療有效36例，無效4例，治療有效者的AchR及CD21雙陽性B細(xì)胞、CD21mRNA檢測結(jié)果與治療無效者對比存在顯著性差異，也再次證明了B細(xì)胞在重癥肌無力發(fā)病中的重要作用，以及激素治療能有效抑制重癥肌無力患者B細(xì)胞過度激活的功能。

綜上所述，AchR及CD21兩項(xiàng)雙陽性B細(xì)胞、CD21mRNA的表達(dá)隨重癥肌無力患者的病情發(fā)展而不斷升高，也根據(jù)患者的治療進(jìn)行而不斷下降，可見其在重癥肌無力患者的病情發(fā)展、治療、預(yù)后中均有重要的指導(dǎo)作用。

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(收稿2016-09-20 修回2017-02-24)

R746.1

A

1673-5110(2017)08-0057-03