泄濁益腎方對高尿酸血癥腎損害大鼠白介素-1β的影響

王陳芳 徐英英 瞿中潔 留菁菁

泄濁益腎方對高尿酸血癥腎損害大鼠白介素-1β的影響

王陳芳 徐英英 瞿中潔 留菁菁

目的 觀察泄濁益腎方對高尿酸血癥腎損害大鼠IL-1β的影響，探討其對腎臟的保護機制。方法 通過腺嘌呤加乙胺丁醇復制高尿酸血癥腎損害大鼠模型，實驗分為正常對照組、模型對照組、中藥高、中、低劑量三組及西藥（別嘌呤醇）對照組（n=10），實驗28 d后處死，腹主動脈采血，檢測血清IL-1β。結果 治療后西藥組、中藥各劑量組與模型組相比，IL-1β明顯降低（P＜0．01）。結論 泄濁益腎方能夠通過降低白介素-1β，抑制炎癥反應，從而保護腎臟。

泄濁益腎方；高尿酸血癥；腎損害；大鼠；血清IL-1β

尿酸鹽在血中的濃度呈過飽和狀態時即可沉積于腎臟而引起高尿酸血癥腎損害，成為高尿酸性腎病（Hyperuricemic Nephropathy）[1]。尿酸大部分經腎臟排泄，故高尿酸血癥不僅可以通過尿酸結晶在腎臟的沉積，導致腎間質纖維化；無結晶形成的高尿酸血癥還影響腎臟血管及系膜細胞功能[2]。前期研究已經證實新組方泄濁益腎方對高尿酸血癥腎損害大鼠腎臟有保護作用[3]。本研究通過觀察泄濁益腎方對血清白介素-1β（IL-1β）影響，探究其作用機理。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

選用Wistar雄性大鼠，60只，體質量（200.0±10.0）g（浙江中醫藥大學實驗動物中心提供）。購自中國科學院上海實驗動物中心，由浙江中醫藥大學SPF動物房飼養。

1.2 藥品

泄濁益腎方：萆薢20 g、土茯苓30 g、川牛膝15 g、澤瀉15 g、生米仁15 g（浙江省中醫院），制成高、中、低（2.0 g/ml、1.0 g/ml、0.5 g/ml）三種濃度藥液，其每公斤體重藥量分別相當于人的每公斤用藥量的20倍、10倍、5倍。高溫消毒后封瓶，冷藏備用。腺嘌呤：由Beijing topbio science & Technology Co.Ltd提供；鹽酸乙胺丁醇片：由杭州民生藥業集團有限公司生產；別嘌醇片：由重慶科瑞制藥有限責任公司生產。研末，用生理鹽水配成7.5 mg/ml混懸液。

1.3 實驗方法

大鼠飼養5 d后，隨機分中藥低、中、高劑量組、西藥對照組、正常對照組、模型對照組共6組，每組10只。除正常對照組外，其余五組予腺嘌呤、乙胺丁醇按100 mg/kg、250 mg/kg比例稱取，用生理鹽水配成35 mg/ml混懸液，每只大鼠2 ml/d灌胃，共21 d。自實驗造模第7 d，出現血尿酸（UA）水平升高，伴腎功能損害（SCr、BUN升高），擬造模成功。開始給藥。上午予造模藥，下午予治療藥：中藥組：3 ml/d。西藥對照組（別嘌呤醇）：2 ml/d，正常對照組、模型對照組：予等劑量生理鹽水（2 ml/d）灌胃，共21 d，實驗共計28 d。4周后，禁食12 h，于次日晨，腹主動脈取血，血標本用于IL-1β測定。

1.4 血清IL-1測定

采用酶聯免疫法。按說明書操作，采用雙抗體夾心ABCELISA法。

1.5 統計學處理

實驗結果以SPSS 17.0軟件進行分析，計量資料用（均數±標準差）表示，采用One-way ANOVA方差分析，P＜0.05，差異有統計學意義。

2 結果

各組IL-1β水平比較，模型組、西藥組IL-1β水平明顯高于正常組，P＜0.01，差異有統計學意義，中藥各劑量組、西藥組IL-1β水平較模型組降低，P＜0.01，差異有統計學意義，說明中藥各劑量組、西藥組能降低該大鼠模型IL-1β水平，但中藥各劑量組IL-1β較接近正常水平（表1）。

表1 各組IL-1β水平

表1 各組IL-1β水平

注：與正常組比較，*P＜0．05，與正常組比較，**P＜0．01；與模型組比較，#P＜0．05，與模型組比較，##P＜0．01；與西藥組比較，△P＜0．05，與西藥組比較，△△P＜0．01

動物數（n）IL-1β組別中高組967．823±24．122##△△中中組971．362±24．296##△△中低組980．560±28．144##△△西藥組9120．463±27．735**#模型組9147．971±23．253**正常組960．635±19．155

3 討論

高尿酸血癥（HUA）與慢性腎臟病（CKD）的關系已成為近年來的研究熱點，研究顯示，高尿酸血癥是慢性腎功能衰竭的獨立危險因素[2]。高尿酸血癥和其他代謝性疾病一樣，可獨立導致腎臟損傷，其機制包括物理損傷、炎癥反應及氧化應激甚至免疫因素的參與[4]。高尿酸血癥本身不會產生明顯的臨床癥狀，但可通過誘導高血壓、蛋白尿、內皮功能不良、活化腎素-血管緊張素（RAS）系統等機制，促進腎臟疾病的發生發展[2]。

IL-1是一種前炎癥細胞因子，分為IL-1α和IL-1β兩種類型，兩種類型無種屬特異性，主要由活化的單核或巨噬細胞產生。在免疫及炎癥的刺激下，系膜細胞通過自分泌和旁分泌生成大量的IL-1β，后者進一步刺激系膜細胞分泌多種炎性細胞因子，誘導炎性細胞向腎內浸潤[5]。高尿酸血癥時，尿酸鹽沉積腎小管、腎間質，引起炎癥反應，導致腎臟損害[6]。本實驗治療后各組IL-1β水平比較，模型組、西藥組IL-1β水平高于正常組（P＜0.01），中藥各劑量組、西藥組IL-1β水平較模型組明顯降低（P＜0.01），說明中藥各劑量組、西藥組能降低該大鼠模型IL-1β水平，該中藥方可降低IL-1β水平，抑制炎癥反應。

高尿酸血癥乃濕濁之毒也，窮必及腎，而損腎。在治療痛風性腎病文獻統計中發現，諸類中藥為清熱利濕泄濁、健脾益腎、活血化瘀通絡之品[7]。以藥測證，本病的病機可能多為脾腎虧虛，濁瘀內停[7]。可見脾腎不足，為病發之本，痰瘀濕濁是基本病理因素，為病發之標[8]，同時痰瘀濕濁諸邪既可影響脾腎之功能，又可進一步變生他病，是病理變化之關鍵。泄濁益腎方中萆薢、土茯苓、澤瀉清熱利濕祛濁，川牛膝、生米仁健脾益腎兼以活血化瘀，標本兼治，降低血尿酸， 減輕腎臟炎性改變，從而保護腎臟。

綜上所述，泄濁益腎方能夠降低血尿酸、血肌酐、尿素氮[3]，同時能抑制腎臟的炎癥反應，從而減輕腎損傷，保護腎臟。

[1] 陳灝珠，林果為． 實用內科學[M]． 13版． 北京：人民衛生出版社，2009：2320-2325，2766-2773．

[2] 王亞華，王亞平． 高尿酸血癥腎損害的研究進展[J]． 中國循證心血管醫學雜志，2013，5（1）：91-92．

[3] 王陳芳，黃平． 泄濁益腎方對高尿酸血癥腎損害大鼠腎臟的保護作用[J]． 中華中醫藥學刊，2012，30（6）：1266-1268．

[4] 王洪云． 慢性高尿酸血癥腎損害發病機制的研究進展[J]．國際泌尿系統雜志，2011，31（1）：109-111．

[5] Dinarello CA1 Biologic basis of interleukin-1 in disease[J]． Blood，1996，87（6）：2095-2147．

[6] 溫雯，李月紅，穆榮． 高尿酸血癥腎損害研究進展[J]． 臨床內科雜志，2016，33（5）：309-311．

[7] 王陳芳，黃平． 痛風性腎病的中醫藥研究[J]． 吉林中醫藥，2010，30（11）：939-940．

[8] 張雪楠，董志剛．從脾腎論治痛風性腎病[J]． 實用中醫內科雜志，2015，29（4）：53-54．

The Influence of Xiezhuoyishen Fang on Serum IL-1β of the Hyperuricemic Nephropathy

WANG Chenfang XU Yingying QU Zhongjie LIU Jingjing Endocrine Ward Rheumatic Nephropathy, The Third Hospital Affiliated to Zhejiang University of Chinese Medicine, Hangzhou Zhejiang 310005, China

ObjectiveTo observe the effect of xiezhuoyishen fang on Hyperuricemic Nephropathy rats in Serum interleukin-1 (IL-1),discuss it’s protection of renal function.MethodsAnimal mode was made by Adenine and ethambutol, the animals divided into nomal contast group, model group, Chinese medicine high dose group, chinese medicine middle dose group, Chinese medicine low dose group and medicine group (Allopurinol)(n = 10), The rats were killed at 28 days after the test, then blood specimen was collected from the main abdominal aorta to examine blood IL-1β.ResultsContrast to model group, the level of IL-1β of the treatment groups clearly drop (P ＜ 0.01).ConclusionXiezhuoyishenfang can reduce the leve of IL-1β, restrain the inflammatory response. improve the renal function.

xiezhuoyishenfang; hyperuricemia; kidney damage; rats; Serum IL-1 beta

R965

A

1674-9316（2017）06-0104-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．06．062

2014年度院級醫藥衛生科技項目（ZS14CA01）

浙江中醫藥大學附屬第三醫院內分泌風濕腎病科，浙江杭州 310005