超高效液相色譜法測定消積化蟲散中厚樸酚與和厚樸酚含量

潘 偉，謝 揚(yáng)，楊雪峰，揭定華

（重慶市永川食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 402160）

·檢驗(yàn)檢測·

超高效液相色譜法測定消積化蟲散中厚樸酚與和厚樸酚含量

潘 偉，謝 揚(yáng)，楊雪峰，揭定華

（重慶市永川食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 402160）

目的建立測定消積化蟲散中厚樸酚與和厚樸酚含量的超高效液相色譜（UHPLC）法。方法 采用Thermo AccliamTMRSLC PA2色譜柱（100 mm×2.1 mm，2.2 αm），以甲醇-水（70∶30，V／V）為流動(dòng)相，等度洗脫，流速為0.3 mL／min，柱溫為35℃，檢測波長為294 nm，進(jìn)樣量為2 αL。結(jié)果 厚樸酚與和厚樸酚進(jìn)樣量線性范圍分別為0.040 5～0.121 5 αg（r＝0.999 7）和0.010 1～0.060 8 αg（r＝0.999 6），平均加樣回收率分別為100.05%和100.15%，RSD分別為0.47%和1.26%（n＝6）。結(jié)論 該方法簡便、有效，可提高消積化蟲散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

消積化蟲散；超高效液相色譜；厚樸酚；和厚樸酚；含量測定

消積化蟲散收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第九冊)》[1]，由白術(shù)（炒）、茯苓、陳皮、厚樸（姜制）等10味藥材組方，有消積化蟲、開胃增食之功效，臨床主要用于治療小兒厭食納呆、消化不良、食積蟲積、脘腹脹痛等。目前，該制劑執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)只收載了散劑項(xiàng)下的常規(guī)檢查項(xiàng)，并未對其中的特定藥材進(jìn)行專屬成分含量測定。近來，已有報(bào)道對方中主藥成分（白術(shù)和茯苓）進(jìn)行了含量測定[2]，但該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)仍有待進(jìn)一步完善。厚樸作為方中重要成分，在食積氣滯、腹脹便秘、痰飲喘咳等方面有很好的療效，廣泛用于中成藥中[3-4]。為此，本研究中以厚樸中的厚樸酚與和厚樸酚作為指標(biāo)性成分，采用超高效液相色譜（UHPLC）法測定其含量，旨在為該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的擬訂提供參考。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Ultimate 3000RS型超高效液相色譜儀、Thermo AccliamTMRSLC PA2色譜柱（100 mm ×2.1 mm，2.2 μm，賽默飛世爾儀器有限公司）；Mettler Toledo XP 205、AL 204型電子天平（瑞士 Mettler-Toledo公司）；SB-5200DTDN型超聲清洗器（寧波新藝超聲設(shè)備公司）；UP超純水機(jī)（美國密里博公司）。

1.2 試藥

厚樸酚對照品（批號為 110729-201513，純度為98.8%），和厚樸酚對照品（批號為110730-201614，純度為99.3%），均購自中國食品藥品檢定研究院；消積化蟲散(重慶希爾安藥業(yè)有限公司，批號分別為160901，1600902，1600801）；所用甲醇為色譜純（德國Merck公司）；其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：AccliamTMRSLC PA2柱（100 mm×2.1 mm，2.2 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（70∶30，V／V）；流速：0.3mL／min；柱溫：35℃；檢測波長：294 nm；進(jìn)樣量：2 μL。2.2 溶液制備

混合對照品溶液：稱取厚樸酚對照品約10 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液1；稱取和厚樸酚對照品約10 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液2。精密量取貯備液1和2各5 mL，置同一 25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液：取本品10袋，傾出其內(nèi)容物，混勻，稱取2 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加入甲醇約80 mL，超聲提取1 h，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過0.22 μm濾膜，即得。

圖1 超高效液相色譜圖

陰性對照品溶液：按處方工藝制備不含厚樸的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備厚樸陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：按 2.1項(xiàng)下色譜條件，精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各2 μL，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。可見，厚樸酚與和厚樸酚能實(shí)現(xiàn)基線分離，分離度大于1.5，理論板數(shù)均大于5 000，且陰性無干擾。

線性關(guān)系考察：分別精密量取2.2.2項(xiàng)下貯備液1和2各25 mL，置同一50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述混合溶液1，2，3，4，5，6 mL，置不同的10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按2.1項(xiàng)下色譜條件，分別精密量取2 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、對照品進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得厚樸酚與和厚樸酚的線性方程，詳見表1。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對照品溶液2 μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果厚樸酚與和厚樸酚峰面積的 RSD分別為 0.64%和0.60%(n＝6)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一供試品（批號為160901），稱取6份，每份約2 g，精密稱定，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算 RSD。結(jié)果厚樸酚與和厚樸酚峰面積的 RSD分別為0.91%和1.05%(n＝6)，表明該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，室溫下放置，于0，2，4，6，8，12，24 h時(shí)按2.1項(xiàng)下色譜條件分別測定并計(jì)算峰面積的 RSD。結(jié)果厚樸酚與和厚樸酚峰面積的RSD分別為1.71%和1.59%(n＝7)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：稱取6份已知各成分含量的供試品（批號為160901），每份約2 g，精密稱定，分別精密加入2.2項(xiàng)下的貯備液1和2各10 mL，并依法制備供試品溶液，同時(shí)按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定各組分的含量，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果（n＝6）

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.4 樣品含量測定

取 3批不同批號（批號分別為 160901，160902，160801）的樣品，每批3份，每份約2 g，分別制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件對其進(jìn)行測定，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算厚樸酚與和厚樸酚的含量，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果（mg／g，n＝3）

3 討論

3.1 提取方法優(yōu)化

根據(jù)2015年版《中國藥典（一部）》[5]所載方法，采用甲醇浸漬的方法能有效地提取厚樸中的厚樸酚與和厚樸酚，但耗時(shí)長。有研究表明，采用甲醇索氏提取、回流或超聲也能有效地提取這2種成分[6-13]。對比4種方法發(fā)現(xiàn)，提取效率：回流提取≈超聲提取＞索氏提取＞浸漬提取。綜合考慮，最終選用超聲提取法。在提取時(shí)間方面，考察了不同超聲時(shí)間（30，60，90 min）各組分提取量的變化，發(fā)現(xiàn)60 min內(nèi)各成分提取量隨提取時(shí)間的增加而增加，60 min后無明顯變化。故最終確定以甲醇超聲提取，提取時(shí)間為60 min。

3.2 色譜條件優(yōu)化

UHPLC由于其超高速度、超高分離度及超高分辨率，在藥物的分析中應(yīng)用廣泛[14]，為此，本研究中嘗試采用UHPLC分析厚樸酚與和厚樸酚。以甲醇-水為流動(dòng)相，通過調(diào)節(jié)柱溫、流動(dòng)相的比例及流速，得到最佳色譜條件：流動(dòng)相為甲醇-水（70∶30，V／V），流速為0.3 mL／min；柱溫為35℃。在此條件下，厚樸酚與和厚樸酚能很好地分離，相比采用一般的高效液相色譜（HPLC）法分析，此方法更經(jīng)濟(jì)、環(huán)保、高效。

3.3 方法評價(jià)

本研究中采用UHPLC法同時(shí)測定消積化蟲散中厚樸酚與和厚樸酚的含量，方法簡便、高效，對于提高消積化蟲散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具有積極意義。

[1]WS3-B-1815-94，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第九冊)[S].

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Content Determination of M agnolol and Honokiol in Xiaoji Huachong Powder by UHPLC

Pan Wei，Xie Yang，Yang Xuefeng，Jie Dinghua
（Yongchuan Institute for Food and Drug Control，Chongqing，China 402160）

Objective To establish a UHPLC method for the content determinion of magnolol and honokiol in Xiaoji Huachong Powder.M ethods The experiment was performed with Thermo AccliamTMRSLC PA2 column（100 mm×2.1 mm，2.2 μm）.The mobile phase was methanol-water（70∶30，V／V），the flow rate was 0.3 mL／min，the column temperature was 35°C，the detection wavelength was 294 nm，and the injection volume was 2 μL.Results The magnolol and honokiol showed a good linear relationship in range of 0.040 5-0.121 5 μg（r＝0.999 7），0.010 1-0.060 8 μg（r＝0.999 6），respectively.The average recoveries were 100.05%，100.15%，and RSDs were 0.47%，1.26%（n＝6），respectively.Conclusion This method is simple and effective，which can be used to determinate the content of magnolol and honokiol in Xiaoji Huachong Powder.

Xiaoji Huachong Powder；UHPLC；magnolol；honokiol；content determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2017)06-0028-03

2016-12-08)

10.3969／j.issn.1006-4931.2017.06.008

潘偉（1991-），男，江西宜春人，碩士研究生，助理工程師，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量控制，（電子信箱）weipan1103＠163.com。