ARID1a及性激素受體在子宮內膜增生病變組織中的表達及意義

要秀娥，趙 敏*

（1．山西醫科大學第二臨床醫學院，山西 太原 030001；2．山西省婦幼保健院，山西 太原 030013）

ARID1a及性激素受體在子宮內膜增生病變組織中的表達及意義

要秀娥1，趙 敏2*

（1．山西醫科大學第二臨床醫學院，山西 太原 030001；2．山西省婦幼保健院，山西 太原 030013）

目的 探討ARID1a基因在子宮內膜增生病變組織中的表達及與性激素受體表達的相關性，為子宮內膜增生癥的防治提供新的思路。方法 采用免疫組化SP（streptavidin peroxidase-biotin，SP）法，檢測132例子宮內膜病變組織（單純性增生40例，復雜性增生40例，不典型增生52例）及28例增殖期子宮內膜組織中ARID1a、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、雄激素受體（AR）的陽性表達率。結果 （1）在子宮內膜組織中，普遍存在ER、PR、AR受體的表達。ER、PR陽性表達率各組間比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；AR在不典型增生癥組中表達率最低，與其余各組間比較，差異有統計學意義（P＜0.05），增殖期內膜組、單純性增生組、復雜性增生組各組間比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。（2）ARID1a基因在子宮內膜腺上皮和間質細胞核中普遍表達，在不典型子宮內膜組織中表達丟失率為19.2%，與其余各組間比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；增殖期內膜組、單純性增生組、復雜性增生組間，差異無統計學意義（P＞0.05）。（3）ARID1a基因的表達與ER、PR、AR之間無相關性。結論 雄激素及其受體與子宮內膜病變風險顯著相關，ARID1a基因突變和表達缺失是子宮內膜增生惡變中的一個早期事件；對于雄激素受體陽性患者采用聯合降低雄激素的治療，將有可能成為子宮內膜增生癥患者治療的新思路。

子宮內膜增生；雌激素受體，孕激素受體；雄激素受體；ARID1a基因

子宮內膜不典型增生癥是子宮內膜癌的癌前病變，23%～29%的未經治療的子宮內膜不典型增生患者可發展為子宮內膜癌[1]。有研究表明，在子宮內膜癌細胞及組織中有雄激素受體（AR）的表達[2]。AT豐富結構結構域1a （AT rich interaction domain 1a，ARID1a）ARID1a基因是一個潛在的抑癌基因，在多種腫瘤中都存在不同程度的突變。在婦科癌癥中突變率最高，卵巢透明細胞癌中達到46%～57%[3]，子宮內膜癌中達到30%～41.9%[4]。

本研究采用免疫組化法檢測ARID1a基因、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、雄激素受體（AR）在增殖期內膜、子宮膜增生癥不同病變中的表達，探討子宮內膜增生癥的病因和發病機制，為子宮內膜增生癥的防治提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月～2016年6月山西省婦幼保健院婦科經宮腔鏡檢查和（或）診刮后的子宮內膜石蠟切塊標本160例，分為單純性增生組40例，復雜性增生組40例、不典型增生組52例，增殖期內膜組織28例，全部標本經病理學證實，平均年齡（38.42±9.16）歲，所有患者均無乳腺癌、分泌雌激素的卵巢腫瘤病史，3個月內未用激素治療。各組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05）

1.2 實驗方法

采用免疫組化SP法檢測各組組織中ARID1a、AR、ER 及PR蛋白表達產物，一抗鼠抗人ER、PR、兔抗人AR單克隆抗體（工作濃度分別為1:80，1:200及1:200）和SP免疫組化染色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司，ARID1a單克隆抗體（工作濃度1:1000稀釋）購自abcam公司。用已知乳腺癌、前列腺癌作陽性對照。

1.3 療效判定標準

ER、PR、AR陽性染色為在胞核內出現黃色或棕黃色顆粒，染色結果根據細胞染色程度和陽性細胞百分率進行綜合判定。陽性細胞數：無陽性細胞或＜5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，＞75%為4分；著色程度計分：不著色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分，兩者相乘為最后得分：3～4分為弱陽性（+），6～9分為陽性（++），12分為強陽性（+++），（+）～（+++）均為陽性表達。

ARID1a表達的判定：ARID1a陽性染色出現在胞核，細胞核內見棕黃色顆粒為陽性表達，細胞核內未見棕黃色顆粒為陰性表達[5]。

1.4 統計學方法

運用SPSS 21.0軟件，計量資料以“x ±s”表示，率的比較采用Fisher確切概率法檢驗，相關性分析采用Spearman檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 不同子宮內膜增生病變組織中ER、PR、AR的比較

增殖期內膜組、單純性增生組、復雜性增生組、不典型增生組的ER、PR的陽性表達率，差異無統計學意義（P＞0.05）；不典型增生組，AR表達率最低，與其余各組間比較，差異有統計學意義（P=0.018），增殖期內膜組，單純性增生組、復雜性增生組，AR陽性表達率，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 不同子宮內膜組中ER、PR、AR比較 [n（%）]

2.2 ARID1a基因表達水平的比較

隨著子宮內膜增生病變的發展，ARID1a基因表達的丟失率逐漸增加，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2，圖1、2。

表2 ARID1a在各組中的表達

圖1 ARID1a 陽性表達 SP×200

圖2 ARID1a 陰性表達 SP×200

2.3 不典型增生組中，ARID1a與ER、PR、AR之間的相關性

在不典型增生組中，ARID1a與ER、PR、AR之間無明顯的相關性。見表3。

表3 子宮內膜病變組織中ARID1a與ER、PR、AR的相關性

3 討 論

子宮內膜癌是最常見的一種女性盆腔惡性腫瘤，其發病率有逐年增加的趨勢，在美國，每年有60050子宮內膜癌新發病例和10470死亡病例[6]。子宮內膜不典型增生是子宮內膜癌的癌前病變，無孕激素拮抗的雌激素的長期刺激是子宮內膜增生癥乃至Ⅰ型子宮內膜癌的病因[7-8]，但是，基礎實驗和臨床研究均證實，子宮內膜異常增生的發生發展并不能僅用“無孕激素拮抗”這一理論來解釋，圍絕經期婦女是子宮內膜癌的高發人群，這些女性伴隨雌激素產生紊亂和不足，并不是雌激素水平最高的階段，約14%～16%子宮內膜增生癥患者僅用孕激素治療無反應（孕激素抵抗或不能逆轉病變），約20%在治療獲得緩解后復發甚至加重[9]。因此，探討子宮內膜增生的病因和發病機制，將成為臨床預防及治療子宮內膜癌的關鍵。

3.1 血清雄激素及其受體與子宮內膜增生癥的相關性

歐洲癌癥與營養前瞻性研究委員會，分析了223例子宮內膜癌（EC）及446例正常婦女后認為，游離睪酮水平升高與子宮內膜癌發病風險顯著相關[2]。薈萃分析顯示，多囊卵巢綜合癥（PCOS）患者與無PCOS相比，患子宮內膜癌的風險顯著增加（OR：2.79），高的雄激素水平被認為是患子宮內膜癌的獨立風險因素[2]。國內林金芳等學者采用口服達英-35聯合二甲雙胍治療多囊卵巢綜合癥合并17例子宮內膜不典型增生癥（EAH）及5例EC患者，結果顯示，12例（9例EAH，3例EEC）曾采用高劑量孕激素治療未能逆轉的患者及10例（EAH8例，EEC2例）直接采用達英-35聯合二甲雙胍治療的患者，于治療3～6個月后均獲得完全逆轉（100%）[9-10]。達英-35所含雌激素成分炔雌醇及孕激素成分環丙孕酮，可明顯降低血循環中及卵巢內雄激素水平，從而間接抑制子宮內膜細胞異常增生?；A實驗和臨床研究均證實，雄激素與子宮內膜增生癥乃至子宮內膜癌的發生風險相關，降低雄激素治療對于子宮內膜增生癥病變逆轉有一定的療效，但仍需要臨床大樣本的研究。

有研究表明，AR第一外顯子編碼區存在著多態性及微衛星序列即重復的胞嘧啶-腺嘌呤-鳥嘌呤序列（CAG）n、單核苷酸多態性等基因的改變與子宮內膜癌風險顯著相關。

Mertens等的研究顯示，子宮內膜間質及平滑肌細胞中AR的免疫活性顯著高于腺上皮細胞，增殖期子宮內膜組織中AR的表達顯著高于分泌期[11]。Ito等在44例（100%）子宮內膜樣癌的間質細胞及其中39例（89%）的癌細胞中檢測到AR呈陽性表達，Tanaka等研究報道122例子宮內膜樣癌中，其中92例（82%）檢測到了AR受體的表達[11]。在我們的研究中，AR在增殖期組、單純性增生組、復雜性增生組中呈高表達，而在不典型增生組中表達降低。子宮內膜組織中高表達的AR，可能是雄激素作為雌激素的前體轉化為雌激素從而促進子宮內膜增生癥的發生發展，也有學者認為，可能與雄激素的抗細胞增殖的作用有關，而Apparao等在體外子宮內膜癌細胞株實驗中，也證實雙氫睪酮和雌二醇均可上調AR的表達[6]。雄激素是否直接影響子宮內膜增生癥的發生，目前仍不十分清楚。不典型增生內膜組織中AR表達下降，可能與局部持續增高的雌激素微環境，細胞應激狀態下，AR構型改變，AR轉錄活性下降，最終導致雄激素受體信號的缺陷，但具體的調控機制尚不十分明確，仍有待于進一步研究。

3.2 ARID1a基因突變與表達缺失與子宮內膜增生癥的相關性

染色質重塑，包括DNA的合成、轉錄及DNA損傷后的修復，在細胞核活動中起著非常重要的作用。ARIDla是ATP依賴的染色質重塑復合物的非催化亞基，ARIDla編碼的蛋白為ARIDla蛋白，或者稱為BAF250a蛋白，在腫瘤中頻繁缺失，它的缺失與多種癌癥（包括結腸癌、胃癌、子宮內膜癌等）的發生密切相關[12-13]。Werner Henrica MJ等研究表明：在不伴有非典型增生的子宮內膜病變組織中未發現ARID1a蛋白表達的缺失，16%非典型增生，19%子宮內膜腫瘤，28%轉移病灶中發現了ARID1a表達的缺失[14]。因此，ARID1A的缺失似乎是在子宮內膜癌變過程中的早期事件。Ayhan等使用免疫組化檢測與子宮內膜癌腫瘤抑制和增殖有關的兩個基因PTEN和ARID1A基因，發現在所有PTEN基因損失的區域都觀察到了ARID1a基因表達的缺失，并發ARID1A和PTEN損失的區域較只有PTEN損失的區域觀察到顯著的增殖活性[5]。這些研究結果表明，ARID1a基因是必不可少看門基因，防止PTEN基因的失活導致子宮上皮細胞過度增殖，進而由子宮內膜癌前病變過渡到子宮內膜癌的作用。在我們的研究中，不典型子宮內膜組織中，ARID1a基因表達缺失率為19.3%，這與Werner Henrica MJ等的研究結果一致。同時，我們在10例ARID1a表達缺失的組織中發現有5例AR呈陰性表達，其可能機制為子宮內膜組織局部持續高雌激素環境、炎癥等因素，導致AR發生甲基化、單核苷酸多態性等基因改變，而ARID1a基因表達的缺失，導致AR損傷后的修復能力降低，最終導致在子宮內膜細胞的惡性轉化。

雌激素在子宮內膜增生癥的發生發生中起著至關重要的作用，但雄激素及其受體與子宮內膜增生癥發生風險顯著相關，臨床上對于孕激素治療不敏感的子宮內膜增生癥患者，采用聯合降低雄激素的治療，有可能成為子宮內膜增生癥治療的一個新的思路；ARID1a基因表達的缺失，是子宮內膜惡變發生發展中的一個早期事件；有關子宮內膜增生癥的病因和發病機制仍有待于進一步的研究。

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本文編輯：劉欣悅

Expressions of ARID1a and sex hormone receptor in Endometrial hyperplasia

YAO Xiu-e1,ZHAO Min2*
(1.The second clinical medical college,Shanxi Medical University,Shanxi Taiyuan 030001,China; 2.Maternal and child health care hospital of Shanxi province Taiyuan ,Shanxi Taiyuan 030013,China)

Objective To investigate the expression of ARID1a,in endometrial hyperplasia and its correlation wits sex hormone receptors.Methods Expressions of ARID1a,ER,PR and AR were detected with immunohistochemistry technic(streptavidin peroxidase-biotin,SP)in 160 cases including 28 of proliferative endometrium,40 of Simple endometrial hyperplasia,40 of Complex endometrial hyperplasia,52 of atypical proliferation.Results （1）The expression of ER,PR and AR receptors exist widely in the proliferative phase endometrium,atypical endometrial tissue,atypical endometrial hyperplasia.The positive expression rate of ER between these groups is not statistically significant;the positive expression rate of PR shows a tendency of decrease with the lowest expression rate appearing in atypical endometrial hyperplasia tissues;differences in the positive expression rate of AR in proliferative endometrium and all typical endometrial tissues had no significant statistical significance with the lowest expression rate existing in the group of atypical hyperplasia,the difference is statistically significant(P=0.018).(2)ARID1a gene has expression both in endometrial glandular epithelial and stromal cell nucleus,and the expression loss rate is 19.2% in atypical endometrial tissues.Compared with other groups, the atypical hyperplasia group has a significant statistical difference(P=0.004).(3)There is no correlation between ARID1a gene and ER,PR,AR.Conclusion Androgen and its receptor are significantly associated with the risk of endometrial hyperplasia.ARID1a gene mutation and expression of endometrial hyperplasia canceration in an early event;The treatment of androgen receptor positive patients with combined reduction of androgen will likely become a new idea for the treatment of endometrial hyperplasia.

Endometrial hyperplasia;Estrogen receptor;Progesterone receptor;Androgen receptor;ARID1a

R737.33

B

ISSN.2095-8803.2017.01.078.04

趙 敏，Email：minzhao22@163.com