HPLC測定參芪固本糖漿中薄層鑒別及苦參堿的含量測定

陳 剛，李小偉

（太和縣中醫(yī)院，安徽 阜陽 236600）

HPLC測定參芪固本糖漿中薄層鑒別及苦參堿的含量測定

陳 剛，李小偉

（太和縣中醫(yī)院，安徽 阜陽 236600）

目的 建立參芪固本糖漿的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用TLC和HPLC。結(jié)果 TLC鑒別當(dāng)歸；HPLC測定山豆根中苦參堿的的含量，苦參堿0.03306～0.13224mg濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（r=0.9999），平均回收率為96.2%，RSD=0.6%。結(jié)論 本方法簡便可行，薄層鑒別和含量測定專屬性和重現(xiàn)性均良好，結(jié)果可靠，可用于參芪固本糖漿的質(zhì)量控制。

苦參堿；參芪固本糖漿；HPLC

參芪固本糖漿為我院自制中藥制劑；主治益氣補(bǔ)血、扶正固本、軟堅散結(jié)、清熱解毒、疏肝理氣。已在臨床使用多年，對于食管癌、噴門癌引起的噎嗝、痛、吐及食管癌放療中有確切的療效。為了更好的控制制劑參芪固本糖漿的質(zhì)量，提高已批準(zhǔn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對處方中藥味進(jìn)行含量測定實驗研究。經(jīng)反復(fù)實驗，采用采用HPLC對藥材山豆根中苦參堿進(jìn)行含量測定，同時分別按處方、制法制備每一種藥味的陰性對照，結(jié)果陰性無干擾。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

試劑與儀器：黃芪甲苷對照品（批號：110781-201314）；苦參堿對照品（批號：110805-200508）；色譜乙腈（美國天地）；當(dāng)歸對照藥材（批號：120927-201014）LC-1220高效液相色譜儀（型號：LC-1220）；H.H型數(shù)顯恒溫水溫鍋（型號：H.H）；梅特勒電子天平（型號：AHW120D）；

1.2 薄層鑒別方法與結(jié)果

1.2.1 當(dāng)歸的鑒別

取本品20 mL，加乙醚20 mL振搖提取2次，合并乙醚液，揮干，殘渣加乙醇1 mL，使溶解，作為供試品溶液。再取當(dāng)歸對照藥材1 g，加乙醚10 mL，振搖5分鐘，分取乙醚液，蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。再按處方量配制缺當(dāng)歸的陰性對照樣品，再按供試品溶液制備方法制備，得陰性樣品供試品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2015版四部通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各5 uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（9:1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。結(jié)果，供試液色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光主斑點，陰性樣品處無干擾，專屬性較強(qiáng)。見圖1。

圖1注：1.當(dāng)歸對照藥材；2.陰性樣品；3.樣品

1.3 含量測定研究

1.3.1 測定波長的選擇[1]

通過對苦參堿對照品甲醇溶液，以甲醇溶液作為空白液，在200～400 nm波長下進(jìn)行掃描，在209 nm處有最大吸收，吸光度為0.628，再參照《中國藥典》2015版一部山豆根藥材中苦參堿的測定方法中波長的選擇，本標(biāo)準(zhǔn)研究取210 nm作為苦參堿的測定波長。見圖2。

圖2 山豆根波長掃描圖譜

1.3.2 方法學(xué)研究

1.3.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鉀0.1%磷酸水溶液（10:90）為流動相；檢測波長為210 nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計算應(yīng)不低于3000。

1.3.2.2 溶液的制備

對照品溶液的制備：取苦參堿對照品適量，精密稱定，置于適量的容量瓶中，用流動相稀釋、定容至刻度，制成濃度為0.03 mg/mL溶液。

供試品溶液的制備：精密量取本品10 mL，加氨水1 mL，用氯仿萃取5次（20 mL，20 mL，20 mL，20 mL， 20 mL），揮干氯仿，殘渣用甲醇轉(zhuǎn)移至50 mL的容量瓶中，用流動相稀釋定容至刻度，用0.45 um的濾膜過濾，即得。

陰性供試品溶液的制備：按照處方比例及制備工藝配制不含山豆根的陰性對照樣品，按照供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

1.3.2.3 專屬性試驗

取對照品溶液、供試液、陰性對照溶液，按照上述色譜條件測定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示陰性對照液對苦參堿的測定無干擾，故該法用于測定參芪固本糖漿中的苦參堿專屬性良好。結(jié)果見圖3。

圖3 參芪固本糖漿HPLC色譜圖注：A.苦參堿對照品，B.樣品，C.陰性樣品（缺山豆根）

1.3.2.4 線性關(guān)系考察

取已制備的濃度為33.06μg/mL的對照品溶液，分別進(jìn)樣0.1 μL、0.2 μL、0.5 μL、2 μL、4 μL、。以苦參堿濃度（μg/ mL）為縱坐標(biāo)（Y），峰面積為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行回歸分析，得回歸方程：Y=35.351X－0.2445 ；R2=0.9999，結(jié)果表明，苦參堿在濃度為0.03306～0.13224 mg/mL的范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

1.3.2.5 精密度考察

取濃度為33.06 μg/mL的對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，苦參堿的平均峰面積是0.9514，RSD為0.19%（n=5），表明儀器的精密度良好。

1.3.2.6 重復(fù)性實驗

取參芪固本糖漿（批號：20160107）6份，按照“2.2.3”項下方法制備供試液，分別進(jìn)樣測定。結(jié)果6次的峰面積平均值為0.989，RSD為0.35%。

1.3.2.7 穩(wěn)定性實驗

取參芪固本糖漿（批號：20160317），配制供試品溶液，在配制后0，2，4，8，10，12，24 h分別進(jìn)樣測定，結(jié)果苦參堿峰面積平均值為0.988，RSD為0.43%（n=6），表明供試液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.3.2.8 加樣回收率實驗[2-3]

精密量取參芪固本糖漿（批號：20160317）6份各10 mL，分別加入50 mL的錐形瓶中，分別置于上述容量瓶中，按“2.2.3”項下方法制備供試液，再分別精密吸取供試品溶液和濃度為33.06 μg/mL的苦參堿對照品溶液各1 mL，按1:1混合。分別進(jìn)樣測定，計算回收率，平均回收率為96.2%（RSD=0.60%，n=6），可見此方法測定苦參堿回收率較高，準(zhǔn)確度較高。見表1

表1 回收率測定結(jié)果

1.3.2.9 樣品測定

取本品3批參芪固本糖漿（批號分別為20160317、20160318、20160319）樣品，按“供試品溶液的制備”項下平行制備供試品溶液各3份，測定含量，結(jié)果3批樣品中苦參堿含量分別為 0.1729 mg/mL，0.1708 mg/mL，0.1720 mg/mL，平均值為0.1719 mg/粒。

2 討 論

本文對當(dāng)歸、黃芪進(jìn)行薄層鑒別研究，斑點清晰，專屬性強(qiáng)，方法重現(xiàn)性好。

本文針對不同流動相的選擇[4-6]，通過反復(fù)的實驗，以乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鉀0.1%磷酸水溶液（10:90）為流動相最佳。

=通過以上實驗，我們確定了參芪固本糖漿中苦參堿含量的測定方法，其專屬性強(qiáng)，分離度較好，經(jīng)過陰性及陽性對照試驗，空白圖譜無干擾。

本實驗研究證明，該方法簡單、準(zhǔn)確，靈敏度高，重現(xiàn)性、穩(wěn)定性好，回收率較高，可用于參芪固本糖漿中苦參堿的定量控制。

[1] 中國藥典[M].2015版一部.

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本文編輯：吳玲麗

Identifcations and Quantitative Determination of Shenqi Guben Tangjiang

CHEN Gang，LI Xiao-wei
(Hospital of Tradmonal Chinese Medicine of Taihe County, Anhui Fuyang 236600, China)

Objective To establish of Shenqi Guben Tangjiang.Methods The TLC and HPLC were used. Results There was a good linearity within the range of 0.03306～0.13224mg(r=0.9999),the average recovery was 96.2% with RSD of 0.6%.Conclusion This method was proved to be simple,accurate and can be used for quality control of Shenqi Guben Tangjiang.

Matrine; Shenqi Guben Tangjiang; TLC; HPLC

R284.1

B

ISSN.2095-8242.2017.02.998.04