蒙醫(yī)施灸赫依三穴對(duì)PCPA模型大鼠腦組織IL-1β、IL-6含量的影響△

高玉峰 乎寶力格* 蘇日古嘎

(1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028007；2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

蒙醫(yī)理論認(rèn)為失眠癥的病因有外因和內(nèi)因，外因系勞逸失調(diào)、思慮太過(guò)、驚嚇、失血等，內(nèi)因系赫依琪素紊亂累及心臟白脈受累，機(jī)體在4個(gè)發(fā)病條件的作用下，赫依希日紊亂累及心臟、腎臟或赫依琪素紊亂累及白脈從而引起失眠，因此大多屬赫依病范疇。蒙醫(yī)灸療法則是鎮(zhèn)赫依之邪，抑制赫依病擴(kuò)散之功效。前期研究已表明，施灸“赫依三穴”對(duì)睡眠紊亂模型大鼠有鎮(zhèn)靜作用，可降低中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)重要的神經(jīng)遞質(zhì)NO與NOS的活性[1,2]。白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)和白細(xì)胞介素-6(IL-6)是具有多種生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，參與睡眠-覺(jué)醒，有調(diào)控睡眠穩(wěn)態(tài)的作用[3]。筆者在前期研究基礎(chǔ)上觀察施灸赫依三穴對(duì)失眠大鼠腦干內(nèi)IL-1β和IL-6含量的影響，進(jìn)一步探討其干預(yù)失眠的機(jī)制，為臨床治療失眠選穴提出實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇健康雄性SD大鼠60只，體重約200±10g，全部大鼠均由沈陽(yáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：(SXSK(遼)2015-0001)。

1.2 試劑及儀器： AUW120D型島津電子d平購(gòu)自日本島津公司，Biotek Elx800酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司，對(duì)氯苯丙氨酸(PCPA)購(gòu)自北京環(huán)亞太克生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司，艾灸貼購(gòu)自蘇州東方艾絨廠，IL-1β酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒購(gòu)自廣州瑞博奧生物科技有限公司，IL-6酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒購(gòu)自廣州瑞博奧生物科技有限公司。

1.3 造模方法：本實(shí)驗(yàn)采用共認(rèn)得對(duì)氯苯丙氨酸造模法[4]。將PCPA用生理鹽水配置成混懸液(45mg/100g),腹腔注射PCPA混懸液(1mg/100g)，1次/d，連續(xù)注射2d。大鼠出現(xiàn)活動(dòng)明顯頻繁、對(duì)外界的聲、光等刺激異常敏感，興奮性增高，晝伏夜出節(jié)律消失等，表明造模成功。

1.4 分組及處理方法：將60只SD雄性大鼠隨機(jī)分為6組，即正常組、模型組、安定組、頂會(huì)穴組、赫依穴組、黑白際穴組，每組10只。

正常組：大鼠腹腔注射0.9%氯化鈉溶液(1mL/100g)，1次/d，連續(xù)注射2日；與治療組相同的抓取、固定，不做任何治療，連續(xù)7d。

模型組：造模成功后同灸療組一樣抓取，固定。

安定組：造模成功后，將安定(地西泮)注射液，0.92mg/Kg，1次/d，連續(xù)灌胃7d。

頂會(huì)穴組：造模成功后施灸大鼠“頂會(huì)穴”，1次/d，連續(xù)7d。

赫依穴組：造模成功后施灸大鼠“赫依穴”，1次/d，連續(xù)7d。

黑白際穴組：造模成功后施灸大鼠“黑白際穴”，1次/d，連續(xù)7d。

1.5 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法[5,6]：將6組大鼠快速斷頭處死，冰上迅速取大腦干稱重，-80℃冰箱保存待測(cè)。按100mg組織加入500μL裂解液，冰上裂解30min，每5min振蕩1次，在冰上用高速分散切割機(jī)進(jìn)行破碎組織，冷凍離心機(jī)離心13000rpm， 20min，取上清。用ELISA法，按照IL-1β和IL-6試劑盒說(shuō)明書(shū)的步驟，用酶標(biāo)儀在酶標(biāo)儀上的540～595nm波長(zhǎng)范圍處檢測(cè)吸光度，其中562nm波長(zhǎng)為最佳測(cè)量光密度值，計(jì)算出IL-1β及IL-6含量。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：結(jié)果均采用±S表示，數(shù)據(jù)處理用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間數(shù)據(jù)比較采用方差分析，以P<0.05為差異有顯著性意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠腦干中IL-1β含量測(cè)定結(jié)果：如表1所示，與正常組相比，模型組腦干內(nèi)IL-1β含量升高，有顯著性差異(P<0.05)；與模型組比較，安定組腦干內(nèi)IL-1β的含量降低，有顯著性差異(P<0.05)；與模型組相比，赫依穴組、頂會(huì)穴組和黑白際穴組均無(wú)顯著性差異(P>0.05)，但頂會(huì)穴組和黑白際穴組有降低趨勢(shì)。

表1 蒙醫(yī)灸療法對(duì)各組大鼠腦干中IL-1β的影響

注：與正常組比較，◆P<0.05；與模型組比較，●P<0.05，●●P>0.05

2.2 各組大鼠腦干中IL-6含量測(cè)定結(jié)果：如表2所示，與正常組相比，模型組腦干IL-6含量升高，有顯著性差異(P<0.05)；與模型組比較安定組、赫依穴組、頂會(huì)穴組和黑白際穴組腦干IL-6含量降低，有顯著性差異(P<0.05)。

表2 蒙醫(yī)灸療法對(duì)各組大鼠腦干中IL-6的影響

注：與正常組比較，◆P<0.05；與模型組比較，●P<0.05

3 討論

蒙醫(yī)理論認(rèn)為人體體素相搏導(dǎo)致無(wú)法正常入睡稱失眠，屬于赫依病范疇。蒙醫(yī)灸療法具有通絡(luò)、行氣、活血，抑制赫依病之功效。蒙醫(yī)“赫依三穴”[7]是指赫依穴、頂會(huì)穴、黑白際穴。赫依穴：位于第七頸椎棘突與第一胸椎棘突間隙窩中；頂會(huì)穴：兩耳角直上連線中點(diǎn)，頭頂正中心；黑白際穴：位于兩乳正中對(duì)直的心窩處。《甘露四部》中記載[8]“赫依偏盛引起的疾病以頂會(huì)穴、赫依穴、黑白際穴灸之…。”

白細(xì)胞介素-1(IL-1β)和白細(xì)胞介素-6(IL-6)是多功能細(xì)胞因子，研究表明夜間睡眠剝奪后第二d血液中IL-6含量增多[9]，Sint等發(fā)現(xiàn)IL-6產(chǎn)生總量因睡眠減少而增加，因睡眠狀況好轉(zhuǎn)而降低[10]。人睡眠剝奪后腦脊液IL-1β含量增加。說(shuō)明IL-1、IL-6參與睡眠-覺(jué)醒周期，通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)源性的IL-1β和IL-6釋放，調(diào)控睡眠穩(wěn)態(tài)的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，施灸頂會(huì)、赫依、黑白際穴治療7d，與正常組相比，模型組大鼠腦干內(nèi)IL-1β和IL-6含量升高，有顯著性差異(P<0.05)；與模型組比較，安定組大鼠腦干內(nèi)IL-1β和IL-6的含量降低，有顯著性差異(P<0.05)；與模型組相比，赫依穴組、頂會(huì)穴組和黑白際穴組大鼠腦干內(nèi)IL-1β含量均無(wú)顯著性差異(P>0.05)，但頂會(huì)穴組和黑白際穴組有降低趨勢(shì)；赫依穴組、頂會(huì)穴組和黑白際穴組大鼠腦干內(nèi)IL-6含量降低，有顯著性差異(P<0.05)。PCPA造模后，SD大鼠IL-1β、IL-6含量升高，明顯高于正常組大鼠，表明IL-1β、IL-6有促進(jìn)睡眠作用，動(dòng)物睡眠剝奪后，IL-1β、IL-6含量反饋性升高，施灸“赫依三穴”后SD大鼠睡眠得以改善，治療組大鼠IL-6含量接近正常組水平，而IL-1β水平則頂會(huì)穴組、黑白際穴組有降低趨勢(shì)，因此實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，施灸“赫依三穴”治療失眠機(jī)制可能與影響腦內(nèi)細(xì)胞因子IL-1β、IL-6有關(guān)。

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