高效液相色譜法測定蒙藥嘎古拉-5散中阿魏酸的含量

韓志廣 王 棟

(1.內蒙古自治區赤峰市藥品檢驗所，內蒙古 赤峰 024000； 2.內蒙古自治區食品藥品檢驗研究院，內蒙古 呼和浩特 010110)

蒙藥制劑嘎古拉-5散劑，主要由草果、當歸、血竭、肉豆蔻、紫檀香5味藥組成，具有清心熱功能，用于心熱引起的心慌心悸，心前區疼痛，冠心病等癥的治療[1]。當歸為方中君藥，具有補氣活血，調經止痛，潤腸通便的功效；當歸是我國常用中藥材，在蒙醫藥里使用也十分普遍，近些年研究證明，當歸中的有效成分阿魏酸、當歸酮、香荊芥酚等具有抑制子宮平滑肌收縮，抗血小板凝集和抗血栓，抗心肌缺血和擴張血管作用，并證明阿魏酸能改善外周循環等藥理活性[2]。因此以阿魏酸作為嘎古拉-5的質量評價指標具有很好的代表性。本文為了更好地控制藥品質量，采用高效液相色譜法測定嘎古拉-5中阿魏酸的含量，具有重要的實際應用價值，為進一步完善嘎古拉-5質量標準奠定基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：島津高效液相色譜儀(LC10-ATVP型泵，SCL-10AVP型控制器，SPD-10AVP型檢測器,SLASS-VP色譜工作站)；HR-200型萬分之一天平；Presia型十萬分之一天平；MAS3.6P-OCE-DM百萬分之一電子天平(德國賽多利斯)。

1.2 試劑與試藥： 阿魏酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110773-200611)；乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑為分析純。嘎古拉-5由內蒙古錫林郭勒盟蒙醫研究所提供(批號：090215；090518；090521)；陰性樣品及模擬樣品由赤峰市藥品檢驗所制備。

2 方法與結果

2.1 色譜條件： Dikma TechnologiesC18色譜柱(250mm ×4.6mm,5μm)；流動相：乙腈-0.085%磷酸溶液(14：86)；柱溫25℃；流速1.0 mL·min-1；進樣量20 μL；檢測波長316nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備： 取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中加70%甲醇制成每1mL含12μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備： 取本品細粉(過三號篩)約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20mL，密塞，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備：按處方配制不含當歸藥材的樣品，按2.2.2項下方法制備陰性對照溶液。

2.3 系統適用性試驗：在2.1項色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各20μL，注入液相色譜儀，理論板數按阿魏酸峰計應大于2000；陰性對照色譜圖中，在與阿魏酸對照品以及供試品色譜相應的保留時間處無色譜峰出現，表明該方法專屬性好，成方制劑中其它組分對阿魏酸的測定無干擾，見圖1。

2.4 線性關系考察：精密稱取阿魏酸對照品9.9mg，置50mL棕色量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取上述對照品溶液0.2mL、0.6mL、1.0mL、1.4mL、1.8 mL、2.0mL，置25mL棕色量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，按2.1項下色譜條件測定，以濃度對峰面積進行回歸分析，結果阿魏酸在1.584μg·mL-1～15.84μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系?；貧w方程為Y=4363310.42X+6770.07，r=0.9999。

2.5 精密度試驗：取批號為090215的樣品制成的供試品溶液，按2.1項下色譜條件連續進樣6次，記錄梔子苷峰面積，計算RSD值。結果顯示阿魏酸峰面積的RSD為1.15%，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩定性試驗：取批號為090215的樣品制成的供試品溶液，按2.1項下色譜條件分別于0h、2h、4h、8h、12h、24h進行測定，記錄阿魏酸峰面積，RSD為0.47%，表明供試品溶液在24h內穩定。

2.7 重復性試驗：取批號為090215的樣品5份，約1g，精密稱定，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，測定供試品中阿魏酸含量，測得阿魏酸含量分別為0.1331 mg/g、0.1334 mg/g、0.1320 mg/g、0.1321 mg/g、0.1328 mg/g，RSD為0.46%，表明方法重復性良好。

2.8 加樣回收試驗：取已知阿魏酸含量的樣品(批號：090215，阿魏酸含量0.1311mg/g)9份，各約0.5g，精密稱定，置9個錐形瓶中，分別按已知阿魏酸含量的80%、100%、120% 3個水平精密加入阿魏酸對照品0.06mg、0.07mg、0.08mg，按2.2.2項下方法制備，測定每份樣品中阿魏酸的含量，計算回收率和RSD，結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果(n=3)

3 樣品的含量測定

取3個批次的嘎古拉-5樣品，按2.2.2項下方法處理并進樣，記錄阿魏酸峰面積，按外標法測定并計算樣品中阿魏酸含量；為了驗證生產工藝對阿魏酸含量有無影響，按處方制備模擬樣品，同法計算阿魏酸含量。測定結果見表2。

表2 樣品、模擬樣中阿魏酸量測定結果(樣品n=2，模擬樣品n=3)

從表中三批樣品測定的數據可見，模擬樣中阿魏酸的含量為0.140mg/g，實驗中用相同的方法對上述模擬樣生產用當歸藥材進行了含量測定，測得阿魏酸含量為0.713mg/g，測定結果見表3。

表3 當歸藥材中阿魏酸含量測定結果(n=3)

4 結果與討論

4.1 供試品提取條件考察： 阿魏酸為有機酸類化合物，是桂皮酸的衍生物之一，易溶于甲醇等有機溶劑，《中國藥典》[3-5]多以甲醇、70%甲醇、50%甲醇為溶劑提取供試品中的阿魏酸，提取方式多為加熱回流提取。本文在提取過程中，考察了以甲醇、70%甲醇、50%甲醇為提取溶劑，并考察了加熱回流提取時間( 10min、20min、30min、 40min)對提取效率的影響。

實驗結果表明：以70%甲醇為溶劑對阿魏酸進行提取，效果最佳，對加熱回流時間的考察表明回流提取30min和回流提取40 min相比阿魏酸含量基本一致，為提高效率，將加熱回流提取時間定為30 min。

4.2 色譜條件的考察： 采用高效液相色譜法測定蒙藥嘎古拉-5中阿魏酸的含量多采用酸性系統，主要有甲醇-水-磷酸系統、甲醇-水-冰乙酸系統等，參照文獻，經反復嘗試，最終選用乙腈-0.085%磷酸溶液( 14∶86) 為流動相，分離效果好；在200nm～400nm波長范圍內進行全波長掃描，結果阿魏酸在316nm處有最大吸收，故選擇檢測波長為316mn；實驗柱溫采用25℃，在此色譜條件下，阿魏酸與其他成分達到分離度良好，并具有較好的保留時間。

4.3 測定結果分析：結果表明，樣品和模擬樣品中阿魏酸含量相差不大，說明生產工藝對嘎古拉-5中阿魏酸含量無影響；對當歸單味藥材中阿魏酸的含量測定結果表明樣品均一性良好，制劑工藝穩定。

本實驗采用高效液相法測定嘎古拉-5中阿魏酸含量，將傳統蒙醫藥理論與現代藥學新理論、新技術有機的結合起來，進一步明確了蒙藥有效成分，加強傳統蒙藥的現代化研究，全面控制藥材質量。本方法操作簡便、快捷、準確、重復性和穩定性好，適用于嘎古拉-5的質量控制，為進一步完善嘎古拉-5的質量標準奠定了基礎，對促進蒙醫藥產業現代化、可持續發展具有重要意義。

[1]國家中醫藥管理局中華本草編委會．中華本草蒙藥卷[M]．上海：上海科學技術出版社，2004: 274-275.

[2]楊英來,胡芳,劉小花,等. 當歸補氣活性部位的譜效關系研究[J]. 中草藥,2013,(23):3346-3351.

[3]呂光華,程世瓊,陳金泉,等. HPLC測定川芎藥材和飲片中游離阿魏酸和總阿魏酸的含量及其質量評價指標[J]. 中國中藥雜志,2010,(02):194-198.

[4]蔡翠芳,唐星,李積軍. 川芎中阿魏酸的提取純化工藝[J]. 沈陽藥科大學學報,2008,(01):70-72+76.

[5]金汝城,李貴文,馬素麗,等. 當歸中阿魏酸提取工藝的優化研究[J]. 中成藥,2008,(04):516-519.