菰均一化全長cDNA 文庫的構建

臧 劍，顏育民，張志剛，鄒世湘，彭 瓊

（1.廣東菰稻農業有限公司，廣東 廣州 511400；2.湖南雜交水稻研究中心，湖南 長沙410125；3.湖南旺湘隆農業有限公司，湖南 長沙 410125；4.湖南省農業生物技術研究中心，湖南 長沙 410125）

菰均一化全長cDNA 文庫的構建

臧 劍1，顏育民2，張志剛2，鄒世湘3，彭 瓊4

（1.廣東菰稻農業有限公司，廣東 廣州 511400；2.湖南雜交水稻研究中心，湖南 長沙410125；3.湖南旺湘隆農業有限公司，湖南 長沙 410125；4.湖南省農業生物技術研究中心，湖南 長沙 410125）

為了獲得國家二級保護植物品種菰的功能基因信息，并克隆功能基因片段，研究以SMART（switching mechanism at 5 end of RNA transcript）方式合成菰全長cDNA，結合DSN（duplex-specific nuclease）均一化技術，構建菰葉片組織的均一化全長cDNA文庫。該cDNA文庫庫容量大，達到了3.6×106PFU/mL，插入片段平均長度為1 000 bp，重組率為97.9%。均一化全長cDNA文庫能有效富集低豐度表達基因，降低冗余率，適用于目的基因的篩選，以及后續的基因、蛋白互作分析。

菰；均一化；cDNA文庫；功能基因

菰（Zizania latifolia （Griseb.） Stapf）即茭白，為多年水生禾本科植物，國家二級保護植物品種，也是水稻的近緣屬。菰米是菰的穎果，又稱茭米、黑米、雕胡米、雕菰、茭白子[1]。由于生物量大、抗病蟲害能力強、耐寒性好等優良性狀，近年來被專家學者用作水稻遺傳育種優良基因資源庫的重要來源之一[2]。然而，針對菰的分子生物學研究仍然處于起步階段，菰的遺傳信息尚未完全獲知，這嚴重阻礙了其作為水稻育種優良基因資源庫的應用。

構建cDNA文庫是功能基因組學研究的基本手段之一，在研究某類特定細胞基因組表達狀態及基因的功能鑒定方面具有特殊的優勢，在動植物的個體發育及細胞周期調控（細胞分化、細胞衰老和凋亡）等生命進程的研究中具有更為廣泛的應用價值[3]。……