伏生紫堇提取工藝研究

孫樹(shù)玲，胡慶敏，謝莉莎，賈 叢

（1.石家莊市智同醫(yī)藥科技有限公司，河北 石家莊 050035；2.河北愛(ài)爾海泰制藥有限公司，河北 石家莊 050035）

伏生紫堇提取工藝研究

孫樹(shù)玲1，胡慶敏2，謝莉莎1，賈 叢2

（1.石家莊市智同醫(yī)藥科技有限公司，河北 石家莊 050035；2.河北愛(ài)爾海泰制藥有限公司，河北 石家莊 050035）

目的選擇合適的提取分離純化方法，對(duì)伏生紫堇的有效部位進(jìn)行提取，并對(duì)提取物中總堿、原阿片堿、比枯枯靈含量進(jìn)行測(cè)定。方法確定伏生紫堇有效部位，對(duì)提取溶劑進(jìn)行選擇，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)確定提取工藝，并對(duì)有效部位的分離和純化工藝進(jìn)行研究。結(jié)果按照最終確定的提取分離純化工藝制備三批中試樣品，檢驗(yàn)結(jié)果表明，樣品中總生物堿含量大于80%，比枯枯靈含量控制在5%以下。結(jié)論中試樣品中伏生紫堇總堿含量符合靜脈注射劑投料要求，比枯枯靈含量在安全范圍內(nèi)，所篩選的提取分離純化工藝穩(wěn)定可行。

伏生紫堇；原阿片堿；比枯枯靈

罌粟科紫堇屬伏生紫堇（夏天無(wú)）的干燥塊莖，廣泛分布于我國(guó)南方各省，以江西產(chǎn)質(zhì)量佳，具有通絡(luò)，活血祛瘀，行氣止痛之功效，用于治療半身不遂、風(fēng)濕弊痛等[1]。

1 有效部位的選擇

夏天無(wú)主要成份為[2]：普魯托品（原阿片堿）、四氫巴馬汀、比枯枯靈等。其中比枯枯靈為有毒成分[3-5]，具有興奮子宮作用，且有異常強(qiáng)烈的致驚厥作用。市售夏天無(wú)注射液盡管療效確切，但其毒性成分含量較高，只能肌注，且刺激性大。腦血管疾病具有發(fā)病快、死亡率高等特點(diǎn)，靜脈注射能更快達(dá)到控制病程的目的。對(duì)夏天無(wú)有效部位進(jìn)行提取，降低比枯枯靈含量，可實(shí)現(xiàn)臨床用藥安全、有效。研究發(fā)現(xiàn)，高濃度乙醇的洗脫液中生物堿富集，原阿片堿含量高，比枯枯靈含量低，確定有效部位在高濃度乙醇洗脫液中。

2 藥材的前處理及依據(jù)

藥材購(gòu)自河北安國(guó)藥材市場(chǎng)（產(chǎn)地江西省），去除夏天無(wú)藥材中的泥沙，灰土，石粒，粉碎，取粒徑在2～3 mm備用。

3 提取工藝的確定

3.1 提取溶劑選擇

報(bào)道[6-12]，采用乙醇和鹽酸兩種溶劑對(duì)夏天無(wú)塊莖進(jìn)行提取，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同提取方法的檢測(cè)結(jié)果

采用磷酸溶液提取有利于生物堿有效成分的溶出，并可降低比枯枯靈含量。夏天無(wú)塊莖中含有淀粉等遇熱易呈糊狀的物質(zhì)，故提取溫度不宜太高，預(yù)試發(fā)現(xiàn)采用室溫（25℃）即可。

3.2 提取工藝的確定

采用磷酸溶液提取夏天無(wú)，試驗(yàn)采用L9（34）正交試驗(yàn)法，對(duì)磷酸溶液的濃度和用量，提取次數(shù)及時(shí)間進(jìn)行考察，正交實(shí)驗(yàn)因素水平表見(jiàn)表2。

表2 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表

根據(jù)正交表L9（34），設(shè)計(jì)9次試驗(yàn)，每次試驗(yàn)稱取500 g藥材粗粉，結(jié)果見(jiàn)表3，方差分析結(jié)果見(jiàn)表4。

表3 夏天無(wú)提取工藝正交實(shí)驗(yàn)表及結(jié)果

表4 方差分析

由上可知，A、B因素對(duì)提取影響較大,最佳提取方案為A2B3C2D3，即采用5倍藥材量的1% H3PO4溶液于室溫浸提夏天無(wú)粗粉2次，每次24小時(shí)。

4 有效部位分離工藝

根據(jù)夏天無(wú)所含生物堿的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，選取6種不同型號(hào)的大孔吸附樹(shù)脂，通過(guò)對(duì)載樣量、非生物堿和毒性成分的去除及有效部位解吸附情況的考察，篩選出適合本工藝的最優(yōu)大孔吸附樹(shù)脂。結(jié)果表明，DM-301和D-101大孔吸附樹(shù)脂從有效成分的富集、雜質(zhì)和毒性成分的去除等方面均較其它樹(shù)脂好，既能最大限度地降低毒性成分，又能最低限度地避免有效成分的損失，但D-101的載樣量小于DM-301樹(shù)脂，故選擇DM-301樹(shù)脂。

通過(guò)研究洗脫流速、提取液上柱濃度和吸附柱徑高比，確定分離工藝為：取夏天無(wú)提取濃縮液，加至已預(yù)處理的DM-301樹(shù)脂進(jìn)行吸附，用1N NaOH溶液洗至深色帶流出柱后，用蒸餾水洗至中性，用2倍上柱藥材量的50%乙醇洗脫，再用0.8倍上柱藥材量的90%乙醇（含0.5%磷酸）洗脫，收集洗脫液。

5 有效部位純化工藝

通過(guò)對(duì)洗脫液的濃縮、堿沉pH值、脫鹽方法、干燥方法等考察，確定純化工藝為：90%乙醇柱洗脫液濃縮至相對(duì)密度為1.15后，滴加1N氫氧化鈉溶液，調(diào)pH值10左右，加入氯化鈉至飽和，靜置過(guò)夜，過(guò)濾，沉淀物用少量飽和食鹽水洗，蒸餾水洗至中性，沉淀物置60℃真空干燥，將烘干的沉淀物加入10倍量的無(wú)水乙醇加熱溶解，回流30 min，過(guò)濾，棄去不溶物，合并濾液，減壓濃縮至有結(jié)晶析出時(shí)，60℃真空干燥即得。

6 中試放大試驗(yàn)

按最終確定的提取分離純化工藝，制備三批中試樣品。見(jiàn)表5。

表5 三批中試樣品結(jié)果

7 結(jié) 論

中試放大結(jié)果表明，樣品中總生物堿含量大于80%，符合靜脈注射劑的投料要求，比枯枯靈含量低于5%，在安全范圍內(nèi)，最終確定的提取分離純化工藝穩(wěn)定可行。

參考文獻(xiàn)

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[2] 陳 榮,等.夏天無(wú)研究進(jìn)展[J].中草藥,2000,31(12):948-949.

[3] 比枯枯靈,植物有效成分匯編,p130.

[4] 原阿片堿,植物有效成分匯編,p860.

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[12] 廖 靜,等.酸性染料比色法測(cè)定不同產(chǎn)地夏天無(wú)中總生物堿的含量[J].中草藥,1993,24(7):354-355.

本文編輯：吳 衛(wèi)

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ISSN.2095-8242.2017.14.2717.02