CD173在急性白血病中的表達及臨床意義

饒若，姚紅霞，符生苗，林麗娥，王谷云，王述文，吳莉芳，黃莉(海南省人民醫院血液病研究室，海南 ?？?570133)

CD173在急性白血病中的表達及臨床意義

饒若，姚紅霞，符生苗，林麗娥，王谷云，王述文，吳莉芳，黃莉(海南省人民醫院血液病研究室，海南 ?？?570133)

目的 探討CD173在急性白血病中表達及其臨床意義。方法應用直接熒光標記法，經流式細胞術對我院血液內科2016年6～11月收治的42例急性白血病和15例對照組(非白血病患者)骨髓細胞進行CD173和CD34的檢測。結果對照組患者的骨髓單個核細胞均未見CD173陽性表達，42例急性白血病患者中陽性率為4.8%，但差異無統計學意義（P>0.05）；CD173在對照組有核紅細胞中的陽性率為53.3%，陽性細胞表達水平為（23.0±16.4）%，而急性白血病組有核紅細胞的陽性率為50.0%，陽性細胞表達水平(21.3±13.0)%，差異均無統計學意義（P>0.05）；對照組患者的骨髓單個核細胞未見CD34陽性表達，急性白血病組患者陽性率為61.9%，差異有顯著統計學意義（P<0.01）；26例CD34+急性白血病患者中2例表達CD173陽性，16例CD34-急性白血病患者中未見CD173陽性表達，差異無統計學意義（P>0.05）。結論CD173在急性白血病和非白血病中的表達無差異。

CD173；急性白血病；流式細胞術

糖鏈是繼核酸、蛋白質后的重要的生命大分子鏈。大多數糖鏈位于細胞核分泌的大分子的外周表面，它們處在調控和介導多種細胞-細胞和細胞-基質相互作用的位置，參與細胞識別、分化、信號轉導、免疫應答等重要活動[1]。已知的腫瘤干細胞標志物大多為蛋白分子，近來研究發現一些糖鏈分子也可作為腫瘤干細胞的特異性標志物[2-3]。細胞表面糖分子CD173(H2，Fucal-2Gal-β1-4GlcNAcβ1-)為末端巖藻化的糖分子。國外有文獻報道CD173在惡性腫瘤中異常表達，還特意表達于CD34+的正常造血干細胞和CD34+的白血病細胞系。國內還未見相關研究報道。本研究旨在探討CD173在急性白血病(AL)中表達及其臨床意義，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 AL患者42例(急性白血病組)，年齡18～83歲，男性18例，女性24例。其中急性髓細胞白血病(AML)29例，急性淋巴細胞白血病(ALL)13例。對照組15例，為血小板減少、骨髓無明顯異常的非白血病患者。均為本院血液內科2016年6～11月住院患者，所有患者的診斷標準均根據張之南主編的《血液病診斷及療效標準》[4]進行。

1.2 試劑和儀器 鼠抗人CD173 AF488單克隆抗體(克隆號BRIC231，IgG1)及其同型對照均購自Novus公司，鼠抗人CD34(克隆號8G12，IgG1)及其同型對照購自BD公司，檢測儀器為BD AriaⅡ流式細胞儀。

1.3 方法 治療前采集患者經EDTA抗凝的骨髓1～2 mL，調整細胞濃度為1×106/mL。骨髓標記抗體后室溫下避光反應15 min，溶血后用流式細胞術(FCM)檢測。上機前均使用質控熒光微球校準儀器，用CD45/SSC設門，根據CD45表達程度和SSC顆粒度大小將細胞分為粒細胞群、單核細胞群、淋巴細胞群、有核紅細胞群及原始幼稚細胞群，通過二維表型圖譜，分析各群細胞CD173和CD34抗原表達情況。根據AL免疫學特征歐洲協作組標準，≥20%細胞表達為陽性，<20%為陰性。

1.4 統計學方法 應用SPSS16.0統計軟件進行數據分析，計數資料組間比較采用χ2檢驗，計量資料以均數±標準差表示，兩組間均數比較采用t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者的CD173表達比較 對照組骨髓單個核細胞均未見CD173陽性表達，AL中有2例陽性表達，陽性率為4.8%，差異無統計學意義(χ2= 0.740，P>0.05)，見圖1。

圖1 AL中CD173陽性表達

2.2 兩組患者骨髓中有核紅細胞CD173的表達比較 CD173在急性白血病有核紅細胞中的表達陽性率為50.0%，陽性細胞表達水平為(21.3±13.0)%，對照組有核紅細胞中的表達陽性率為53.3%，陽性細胞表達水平為(23.0±16.40)%，差異均無統計學意義(χ2= 0.049，t=0.397，P>0.05)。

2.3 兩組患者的CD34表達比較 15例對照組骨髓單個核細胞均未見CD34陽性表達，42例AL中有26例陽性表達，陽性率為61.9%，差異有統計學意義(χ2=17.074，P<0.01)，見圖2。

圖2 AL中CD34陽性表達

2.4 AL患者的CD173與CD34的共表達 26例CD34+AL中2例表達CD173陽性，16例CD34-AL中無CD173陽性表達，但是差異無統計學意義(χ2= 1.292，P>0.05)。

3 討 論

細胞表面糖分子CD173(也稱組織血型H2抗原)，是由FUT1基因編碼的末端巖藻酸化的糖分子，是CD174(LeY，Fucal-2Gal-β1-4[Fucal-3]GlcNAcβ1-)的前體分子，均由相同的前體糖鏈衍生而成。在人類，H抗原活性物質不僅僅表達在紅細胞表面，還表達于血管內皮細胞等細胞和組織。

研究表明，白血病患者體內存在0.1%～1%微量的細胞群，它們無論在體外長期的細胞培養中還是動物模型體內都能引起并維持白血病，被稱為白血病干細胞(LSC)。LSC通常對化療不敏感，是導致白血病復發的根源[5]。因此對LSC特異標志物的研究可以作為白血病治療的關鍵靶點。CD34是目前公認的最主要的造血干/祖細胞表面標志物[6]。Cao等[7]報道CD173特異表達于CD34+的正常造血干細胞和多種CD34+的白血病細胞系，認為CD173可能也是造血干細胞的表面標志分子。Lin等[8]研究還發現CD173表達于乳腺癌細胞，特別是導管原位癌的基底細胞，提示CD173可能也是乳腺癌干細胞標志分子。

本研究檢測了42例急性白血病患者及15例對照組骨髓細胞CD173的表達，結果顯示對照組骨髓單個核細胞均未見CD173陽性表達，AL中白血病細胞陽性率為4.8%，但是差異無統計學意義(P> 0.05)。CD173在急性白血病和對照組有核紅細胞中均有表達，但差異也無統計學意義(P>0.05)。雖然2例CD173陽性患者均同時表達CD34，但是CD173的表達在CD34+AL組和CD34-AL組中的差異也無統計學意義(P>0.05)。因此本組研究結果尚不能表明CD173可以作為干細胞的表面標志分子。

本研究結果與國外研究報道的結果存在差異，原因可能有以下幾點：(1)抗體標記方法不同。在流式檢測的抗體標記方法有直接熒光標記法和間接熒光標記法。直標法操作簡便，結果準確，減少了間標法中較強的非特異熒光的干擾，一般都盡量選擇直標抗體。尤其在流式多熒光測定中，需要多重染色，這時必需使用直接標記法，間接標記法增加了染色之間的干擾[9]。本研究使用的直接標記法優于國外文獻報道使用的間接標記法。(2)抗體克隆號不同。在抗體選擇時克隆號一般不需要特別關注，同一抗體有多個克隆號的情況下，可以選擇熒光標記種類最多的那個克隆。也有報道指出，不同克隆號的抗體測定的結果有差異[10-11]。(3)檢測的樣本不同。

目前對于CD173的研究報道還較少，對于其在急性白血病骨髓細胞中的表達、CD34+白血病細胞中的表達及作用尚不明確，還有待于進一步研究。

[1]林煒明,曹毅.細胞表面糖鏈與腫瘤干細胞[J].中華病理學雜志, 2013,42(9):641-643.

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[3]Shaikh A,Nagvenkar P,Pethe P,et al.Maolecular and phenotypic characterization of CD133 and SSEA4 enriched very small embryonic-like stem cells in human cord blood[J].Leukemia,2015,29(9): 1909-1917.

[4]張之南,沈悌.血液病診斷及療效標準[M].3版.北京:科學出版社,2008:144.

[5]Williams DA.A new mechanism of leukemis drug resistance[J].N Engl JMed,2007,357(1):77-78.

[6]Bonardi F,Fusetti F,Deelen P,et al.A proteomics and transcriptomics approach to identify leukemic stem cell(LSC)markers[J]. Molecular&Cellular Protomics,2013,12(3):626-637.

[7] Cao Y,Merling A,Karsten U,et al.The fucosylated histo-blood group antigens H type 2(blood group O,CDl73)and Lewis Y (CDl74)are expressed on CD34+hematopoietic progenitors but absenton maturelymphoeytes[J].Glycobiology,2001,11(8):677-683.

[8]Lin WM,Karsten U,Goletz S,et al.Co-expression of CDl73(H2) and CDl74(Lewis Y)with CD44 suggests that fucosylated histo-bloodgroup antigens are markers of breast cancer-initiatingcells [J].Virchows Arch,2010,456(4):403-409.

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[10]嚴茹紅,張萍,朱雪明.CD4單抗選擇對于流式細胞術分析Th1/Th2極化的有效性評價[J].現代免疫學,2007,27(5):368-372.

[11]劉延方,李國玲,王錦繡.急性白血病患者骨髓細胞CD44的表達[J].河南醫科大學學報,2001,36(5):593-595.

Expression of CD173 in acute leukemia and its clinical significance.

RAO Ruo,YAO Hong-xia,FU Sheng-miao,LIN Li-e,WANG Gu-yun,WANG Shu-wen,WU Li-fang,HUANG Li.Laboratory of Hematology,Hainan Provincial People's Hospital,Haikou 570133,Hainan,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of CD173 in acute leukemia (AL).MethodsWe used flow cytometry(FCM)and direct immunofluorescence staining to detect CD173 and CD34 of bone marrow cells in 42 AL patients and 15 non-leukemia patients(control group)in Department of Hematology in our hospitalfrom June to November in 2016.ResultsBone marrow mononuclear cells in controlgroup showed no positive expression of CD173,and the positive expression rate of 42 AL patients was 4.8%,with no statistically significantdifference(P>0.05).The CD173 positive rate and positive cell expression levelin nucleated erythrocytosis showed no significant differences between AL patients[50.0%,(21.3±13.0)%]and controlgroup patients[53.3%,(23.0±16.4)%],P>0.05. Bone marrow mononuclear cells in control group showed no positive expression of CD34,and the positive expression rate in AL patients was 61.9%,with statistically significant difference(P<0.01).Two cases showed CD173 positive expression in 26 cases with CD34+AL patients,and CD173 positive expression was not detected in 16 patients with CD34-acute leukemia,with no statistically significant difference(P>0.05).ConclusionCD173 expression in acute leukemia and the non-leukemia group has no significantdifference.

CD173;Acute leukemia(AL);Flow cytometry(FCM)

R733.71

A

1003—6350（2017）09—1387—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.09.004

2016-12-01)

海南省衛生廳課題（編號：14A210201）

姚紅霞。E-mail:yaohongxia768@163.com