市售大豆油中維生素K1的含量

徐 超，周 波，王曉紅

(沈陽醫學院營養與食品衛生學教研室，沈陽 110034)

市售大豆油中維生素K1的含量

徐 超，周 波，王曉紅

(沈陽醫學院營養與食品衛生學教研室，沈陽 110034)

目的：測定29種市售大豆油中維生素K1含量，分析比較不同原料、工藝及等級大豆油之間維生素K1含量的異同。方法：采用SPE硅膠柱萃取油脂中維生素K1，用高效液相色譜-紫外檢測法測定每種樣品中維生素K1含量。結果：大豆油中維生素K1含量范圍由未檢出至215μg/100g，其中三級大豆油維生素K1平均含量為145.94±36.05μg/100g、一級大豆油維生素K1平均含量為126.69±24.44μg/100g，三級顯著高于一級(P=0.019)。原料為轉基因大豆與非轉基因大豆、生產工藝為浸出法和壓榨法間大豆油中維生素K1含量差異無統計學意義。結論：深色的三級大豆油中維生素K1含量豐富。

大豆油；維生素K1；HPLC

維生素K為人體必需的脂溶性維生素，具有促進凝血、參與骨骼代謝、維持心血管健康等諸多功能。人體維生素K1主要來源于綠葉蔬菜(如菠菜、甘藍、萵苣等)與大豆及其制品。我國已制定蔬菜和乳制品中維生素K1含量的測定方法[1-2]，由于缺乏良好的提取和分析方法，國內尚無測定大豆油中維生素K1的標準方法。目前，測定食品中維生素K1的方法中高效液相色譜法(HPLC)以高效、高靈敏度、應用范圍廣和分析速度快等特點而受到廣泛應用，而測定大豆油中維生素K1含量的關鍵是如何進行分離提取，去除各種干擾物質并避免維生素K1破壞。近年來，色譜分析前用前處理簡單、萃取時間短、提取效率高、重現性好的固相萃取法對樣品進行前處理被越來越多的國內學者研究和應用[3-6]。

迄今為止，我國食物成分數據庫中尚沒有全面的食物維生素K1含量數據，已有研究報道蔬菜類維生素K1含量[7]，但缺少大豆及大豆制品的有關數據。我國市場上大豆油種類繁多，有研究測定了大豆油中維生素K1含量[8]，但未見大豆油制取原料及工藝等對維生素K1含量影響的相關報道，故本試驗在前人研究的基礎上，優化了大豆油中維生素K1提取方法，對不同種類的市售29種大豆油中維生素K1含量進行了同時測定并分析結果，所取得的結果對分析大豆油營養成分和研究人群維生素K1膳食攝入量具有很好的參考價值。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

UV1201紫外-可見檢測器、AS1201自動進樣器、RO1201溶劑管理器、P1201高壓恒流泵、EC2006色譜數據處理系統，大連依利特公司；SPE硅膠柱(6mL，1g)，美國Agilent；Laborota 4001旋轉蒸發儀，德國Heidolph；SHZ-D(Ⅲ)循環水式真空泵，予華儀器廠；Eppendorf AG5305隔膜真空泵，New Brunswick；SC-2546型低速離心機，安徽中科中佳科學儀器有限公司；G-560E漩渦振蕩器，美國Bohemia。

正己烷(色譜純)、甲醇(色譜純)、維生素K1標準品(純度>99%)，美國Sigma公司；乙醚(分析純)、正己烷(分析純)，國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：安捷倫C18柱(4.6mm×250mm，5μL)；柱溫：30℃；流動相：甲醇：正己烷(98：2，v/v)；檢測波長248nm；進樣量：20μL；流速：1.5mL/min。

1.3 方法

1.3.1 樣品 在市場上選購成品大豆油29種。采用的原料是轉基因大豆和非轉基因大豆；加工工藝有浸出法和壓榨法；等級有一級和三級兩種。所有樣品均在保質期內，購回后置于陰涼避光處存放。

1.3.2 樣品處理 所有操作在避光室內微弱黃光燈下進行。每個樣品同時做3個平行樣，變異系數大于15%時重復測定。取0.1g油樣(精確至0.001g)溶于5mL正己烷，劇烈震蕩5min，離心5min(3 000r/min)，取4.5mL上清液。將SPE硅膠柱(6mL，1g，Agilent)，分別用8mL正己烷-乙醚(97：3，v/v)和8mL正己烷將SPE柱活化后，提取液以1.0mL/min流速過柱，用8mL正己烷以1.0mL/min流速淋洗小柱，最后分5次加入20mL正己烷-乙醚(97：3，v/v)溶液洗脫，收集洗脫液濃縮吹干，用5mL正己烷溶解殘渣，轉移至試管低溫濃縮30min，加1mL正己烷定容離心5min，經0.45μm濾膜過濾后上機分析。

1.3.3 數據處理 采用SPSS 17.0統計軟件進行統計學分析。

2 結果與分析

2.1 方法驗證

按中華人民共和國國家標準《實驗室質量控制規范食品理化檢測》(GB/T 27404-2008)[9]驗證實驗方法，結果顯示，本方法的重復性好，測定結果標準差(STD%)和相對標準差(RSD%)分別為17.87%和2.91%；標準曲線的線性相關系數達到99.9%以上；最低檢出限為0.0625μg/mL；絕對回收率為103.58%，加標回收率為79.00%，由此可見本研究所采用的方法準確可靠。

2.2 大豆油維生素K1含量

29種大豆油樣品中維生素K1含量測定結果見附表，含量范圍由未檢出至215μg/100g不等，平均含量為140.92±33.99μg/100g。大豆油中維生素K1含量在數值上可以看出，轉基因浸出法的三級大豆油含量最高，不同原料間轉基因高于非轉基因；相同原料相同工藝條件下三級高于一級。

附表 不同種類大豆油中維生素K1含量 單位：μg/100g

注：用t檢驗對均值進行兩兩比較，一級與三級大豆油中維生素K1的含量差異有統計學意義(P<0.05)

2.3 不同原料大豆油中維生素K1含量

在相同生產工藝下，一級轉基因大豆油與一級非轉基因大豆油(P=0.742)、三級轉基因與三級非轉基因大豆油中(P=0.851)維生素K1的含量沒有顯著性差異。

2.4 不同生產工藝大豆油中維生素K1含量

本次研究中工藝為壓榨法的樣本均為非轉基因三級大豆油，而上述結果表明不同原料大豆油中維生素K1含量沒有差異，因此，僅比較浸出法與壓榨法制取的非轉基因三級大豆油中維生素K1含量的區別，結果表明，浸出法與壓榨法制取的大豆油中維生素K1含量差異無統計學意義(P=0.176)。

2.5 不同等級大豆油中維生素K1含量

由上述結果可以看出，轉基因與非轉基因間、浸出法與壓榨法間大豆油中維生素K1含量分析比較結果顯示差異均無統計學意義，因此，將轉基因與非轉基因、壓榨法與浸出法的大豆油合并后按級別分類，即比較一級與三級大豆油中維生素K1的含量，結果表明，三級大豆油維生素K1平均含量為145.94±36.05μg/100g，一級大豆油維生素K1平均含量為126.69±24.44μg/100g，三級顯著高于一級(P=0.017)，由此可見，深色的三級大豆油中維生素K1含量豐富。

3 討論

3.1 樣品預處理方法的優化

3.2 大豆油維生素K1含量范圍

本次實驗測定了29種大豆油，其中包括不同原料(轉基因原料和非轉基因原料)、不同工藝(壓榨法和浸出法)、不同等級(一級和三級品)，基本覆蓋了市售大豆油的品種，具有較好的代表性。美國食物成分表中大豆油維生素K1含量為183.9μg/100g[10]，日本《食物成分表》(第七版，2015)中大豆油維生素K1含量為210μg/100g[11]；日本Kamao等測定的大豆油中維生素K1的平均含量為234±48μg/100g[12]，本實驗結果平均含量為140.92±33.99μg/100g，范圍為未檢出至215μg/100g，由于不同國家、地區因地理環境、植物種類等存在差異，因此測定結果不完全相同。

3.3 大豆油維生素K1含量的影響因素

3.3.1 不同生產原料對大豆油中維生素K1含量的影響 本次研究結果顯示，原料為轉基因與非轉基因大豆的樣品間維生素K1的含量沒有顯著性差異，認為原料對大豆油中維生素K1的含量沒有影響。近年來，轉基因和非轉基因大豆的安全性及產業化現狀得到廣泛關注，國內外研究者大多致力于大豆改良育種技術及安全性研究[13-15]，而關于轉基因大豆油的研究較少，未見轉基因與非轉基因大豆油中維生素含量的相關報道。

3.3.2 不同生產工藝對大豆油中維生素K1含量的影響 本次研究結果顯示，不同生產工藝的大豆油中維生素K1含量沒有差異。目前，我國食用油在制作工藝上基本分為“浸出法”和“壓榨法”，壓榨油和浸出油在生產過程中都需通過堿煉、脫色、脫臭等化工過程進行精煉才能成為可食用的成品油，并由此提出衡量食用成品油品質的根據不是制油工藝(是壓榨還是浸出)，而是國家為各類食用油制定的指標體系[16]，由此可見，生產工藝并不是大豆油中維生素K1含量的影響因素。

3.3.3 不同等級對大豆油中維生素K1含量的影響 本次研究結果表明，一級大豆油中維生素K1含量低于三級大豆油。我國最新制定大豆油國家標準(GB 1535-2003)對成品油按質量要求一級油較三級油多了脫色、脫臭、脫脂等精煉工序處理[17]?；瘜W精煉工藝中要經過堿煉環節，脫色對進一步降低脫膠油或堿煉油中的磷脂含量和皂類物質含量是非常重要的工作，目前在植物油精煉過程中所采用的脫色工藝基本上都使用活性白土，即用白土吸附脫色，也就是說白土對皂類物質的吸附先于色素物質[18]，而維生素K1遇堿易分解，所以脫色可能是導致一級大豆油中維生素K1減少的原因。由此可見，顏色較深的三級大豆油維生素K1含量高于脫色處理的一級大豆油。但是本次僅為初步實驗室研究，大豆油中維生素K1含量與精煉工藝之間的關系需要進一步的研究來證實，進而豐富食物中維生素K1含量的數據。

4 結論

市售大豆油中維生素K1含量豐富，其中維生素K1含量三級大豆油高于一級大豆油?！?/p>

[1]GB/T5009.158-2003，蔬菜中維生素K1的測定[S].http：//www.spsp.gov.cn/page/CN/2003/GBT%205009.158-2003.shtml.

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(責任編輯 李婷婷)

Contents of Vitamin K1in Commercially Available Soybean Oils

XU Chao，ZHOU Bo，WANG Xiao-hong

(Department of Nutrition and Food Hygiene，Shenyang Medical College，Shenyang 110034，China)

soybean oil；vitamin K1；HPLC

沈陽市科學技術局項目(項目編號：F13-302-1-00)。

徐超(1987— )，女，碩士研究生，研究方向：營養與慢性病。

周波(1963— )，女，博士，教授，研究方向：營養與慢性病。