豬圓環(huán)病診斷技術(shù)研究進(jìn)展

陳紅 方英 徐春志 袁翠霞 景書(shū)灝

DOI：10.3969/j.issn.2096-3637.2017.10.059

摘要：本文就對(duì)豬圓環(huán)病毒病（PCVD）的臨床診斷、實(shí)驗(yàn)室診斷、病理學(xué)診斷等進(jìn)行綜述，為臨床PCVD確診提供參考。

關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病毒；診斷技術(shù)；研究進(jìn)展

中圖分類號(hào)：S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：2096-3637（2017）10-0067-02

PCV2是一種單股DNA、環(huán)狀、共價(jià)閉合、二十面體對(duì)稱、小而無(wú)囊膜病毒，是目前已知最小的動(dòng)物病毒，病毒粒子平均直徑為17nm。豬感染PCV2后，會(huì)引起妊娠母豬的繁殖障礙、豬呼吸道疾病綜合征（PRDC）、皮炎腎衰綜合征（PDNS）、斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、仔豬先天性震顛（CT）等[1]。豬對(duì)PCV2有很強(qiáng)的易感性，病毒可以通過(guò)感染豬的糞便、鼻液等排泄物排出，然后再通過(guò)呼吸、口腔等傳播途徑感染不同年齡的豬。

1 臨床診斷技術(shù)

感染PCV2后會(huì)引起許多疾病，但不同年齡階段的臨床表現(xiàn)均不同，其中PRDC多發(fā)生于病豬肥育階段，病豬表現(xiàn)為生長(zhǎng)減慢、被毛粗糙、皮膚蒼白、腹式呼吸、間斷性咳嗽、豬群整體度變差等。PDNS發(fā)生于肥育階段豬只，在炎熱季節(jié)會(huì)多發(fā)，后軀皮膚、耳部、背部會(huì)出現(xiàn)圓形不規(guī)則的丘疹或不規(guī)則型紅斑或圓形，后期會(huì)發(fā)展為黑色結(jié)痂。PMWS主要發(fā)生于斷奶后5～10周齡的豬仔，臨床表現(xiàn)為氣喘、咳嗽、逐漸消瘦、皮膚蒼白、食欲減退等。CT多發(fā)生于剛出生的小豬，在出生后幾小時(shí)內(nèi)會(huì)出現(xiàn)共濟(jì)失調(diào)、震顫等。

2 病理剖檢診斷

解剖發(fā)現(xiàn)豬感染PCV2后，病變最顯著的就是全身淋巴結(jié)腫大，其中腸系膜淋巴結(jié)和腹股溝淋巴會(huì)腫大2～5倍。肺部有散在隆起的橡皮狀硬塊，嚴(yán)重者會(huì)導(dǎo)致肺泡出血，尖葉和心葉會(huì)有暗紅色斑塊。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

3.1 病毒分離鑒定

該方法是采集病死豬組織研磨成懸液，然后在-20℃的條件下反復(fù)凍融、離心取上清液、濾器除菌，然后接種已長(zhǎng)成單層且無(wú)PCV污染的PK-15細(xì)胞，再經(jīng)過(guò)一系列的步驟進(jìn)行核酸或PCV2的檢測(cè)加以鑒定，該方法很費(fèi)時(shí)和費(fèi)力，不能快速做出診斷。

3.2 免疫學(xué)方法

3.2.1 間接免疫熒

間接免疫熒方法不僅可以檢測(cè)抗體，還可以用已知PCV特異性抗體檢測(cè)抗原，所以間接免疫熒方法主要用于豬源細(xì)胞PCV污染情況的普查和PCV的分離鑒定。

3.2.2 免疫組織化學(xué)

免疫組織化學(xué)方法（IHC）是在抗原抗體特異反應(yīng)存在的前提條件下，利用酶細(xì)胞化學(xué)的手段，檢測(cè)某種物質(zhì)在組織細(xì)胞內(nèi)存在的部位。該方法的優(yōu)點(diǎn)是能對(duì)攜帶抗原的細(xì)胞及組織的大體形態(tài)進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)合形態(tài)病變能快速、特異的進(jìn)行診斷，而且樣本也容易保持。

3.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

該方法主要是利用聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)，但是PCR的高敏感性常會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法（ELISA）具有敏感性高、特異性強(qiáng)、診斷速度快等優(yōu)點(diǎn)，可以進(jìn)行普及，適合大規(guī)模檢測(cè)。

3.2.4免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)

該方法對(duì)PCV2免疫血清具有極高的特異性，而且對(duì)其他病毒免疫血清無(wú)交叉反應(yīng)，免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)和上訴ELISA的檢測(cè)靈敏度相近。

3.3 分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)

3.3.1 PCR診斷技術(shù)

PCR是一種簡(jiǎn)便、特異、快速的診斷方法，能直接對(duì)病毒核酸進(jìn)行檢測(cè)，臨床中的PCR方法包括PCR限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析法（PCR-RFLP）、熒光定量PCR（FQ-PCR）、套式PCR、常規(guī)PCR等。

3.3.1.1常規(guī)PCR

此種方法是按照Genbank發(fā)表的PCV2的基因序列設(shè)計(jì)1對(duì)PCV2特異引物，如果在患豬種擴(kuò)展PCV2特異的基因組片段，就說(shuō)明已經(jīng)感染PCV2，該方法具有較高的敏感性和特異性。

3.3.1.2 套式PCR

此方法解決了細(xì)胞和組織病料中的PCV2含量太少，不能檢測(cè)到PCV2基因組存在的特點(diǎn)，王貴平[3]等人通過(guò)套式PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，套式PCR對(duì)于PCV2的敏感性比常規(guī)PCR更高。

3.3.1.3 熒光定量PCR

FQ-PCR是在PCK反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，最后通過(guò)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法，該方法的靈敏度、特異性、穩(wěn)定性良好，在檢出陽(yáng)性率方面高出傳統(tǒng)方法的14.3%。

3.3.1.4 PCR限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析法

PCR-RFLP是一種多態(tài)性分析的方法，該方法分考慮了引物序列在不同毒株間的酶切位點(diǎn)和保守性的特異性，可以對(duì)不同地區(qū)來(lái)源的毒株進(jìn)行分型檢測(cè)。

3.3.2 原位雜交技術(shù)（ISH）

ISH是由細(xì)胞學(xué)、組織化學(xué)、分子生物學(xué)相結(jié)合組成的技術(shù)，敏感性很高，能精確定位RNA、PRRSV DNA、PCV在細(xì)胞中的部位已經(jīng)特點(diǎn)。

3.3.3 基因芯片檢測(cè)技術(shù)

該技術(shù)是由微電子學(xué)和分子生物學(xué)等多種學(xué)科融合成的高科技技術(shù)，能準(zhǔn)確鑒別PCV基因型，能同時(shí)檢測(cè)出PCV2、CSFV、PRRSV感染，靈敏度是凝膠電泳的5倍，具有可重復(fù)、特異性強(qiáng)、高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)。

4 結(jié)束語(yǔ)

現(xiàn)今PCV-2已經(jīng)在全球范圍內(nèi)大量發(fā)生和流行，給養(yǎng)豬行業(yè)構(gòu)成了嚴(yán)重威脅，也造成了巨大的損失，引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者廣泛關(guān)注。所以，建立一種適合臨床推廣、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用、靈敏、簡(jiǎn)單的快速檢測(cè)方法是目前主要的研究方向。但是目前雖然PCV2的檢測(cè)方法很多，但是均存在很多的局限性，為此需要結(jié)合具備的條件，根據(jù)試驗(yàn)的目的選擇最合適的檢測(cè)方法來(lái)對(duì)PCVD進(jìn)行檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)

[1]郭小參，黨占國(guó)，杜根成，等.豬圓環(huán)病毒病診斷技術(shù)研究進(jìn)展[J].養(yǎng)豬，2015，（06）：24-25.

[2]聶立欣，羅滿林，孔小明，等.豬圓環(huán)病毒感染后部分免疫器官的組織化學(xué)檢測(cè)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2006，27（1）：58-61.

[3]王貴平，蔣智勇，宋長(zhǎng)緒，等.豬圓環(huán)病毒2型套式PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2004，34（10）：26-28