馬大雜種相思組培快繁技術研究

徐軍杰，盧爵廣，袁徐瀾

（湛江市農業科學研究院，廣東湛江524094）

馬大雜種相思組培快繁技術研究

徐軍杰，盧爵廣，袁徐瀾

（湛江市農業科學研究院，廣東湛江524094）

本試驗選擇馬大雜種相思20年生抗風直干型單株，借助扦插繁殖技術獲得足夠數量的試驗材料，再以當年新生枝條的帶腋芽莖段作為外植體開展試驗，旨在提高馬大雜種相思的繁殖效率。經研究發現，最適宜的消毒方法為15 min消毒以及30 s乙醇處理，污染率為6.58%，存活率為78.08%。質量濃度1.0～1.5 mg/L，增殖倍數達到3倍，芽長勢較好；當NAA濃度為0.1 mg/L時，增殖倍數最大，芽的長勢優異。當在IBA 6 000 mg/L培養4～8 h，再放入MS進行培養，能夠實現生根率100%，同時幼苗生長旺盛，為最佳處理方法。試驗結果表明，外植體的消毒效果既與消毒劑處理有密切關系，同時還受到外植體采集時間以及采集部位等因素影響，增殖效果與6-BA、NAA濃度有關。隨著6-BA倍數的增加，增殖倍數呈上升趨勢；隨著NAA濃度的增加，芽體生長狀況逐漸變好。因此，借助高質量濃度激素進行浸泡處理，生根效果理想，不僅有著較高的生根率，生根數也較多。

馬大雜種相思；組織培養；快速繁殖技術

馬大雜種相思是一種速生樹種，引進自澳大利亞，屬含羞草科金合歡屬，與根瘤菌共生有著固氮的作用，能夠在氮元素稀少的土壤中生存，抗瘠薄優勢非常顯著，同時可以涵養水源。這種樹的枝干通直，且分支較為細小，在城市綠化中有著非常好的應用，對于生態混交林的種植有著顯著的促進作用，目前在我國南方種植較為廣泛[1]。

現階段在馬大雜種相思組培快繁技術的研究方面雖然已經取得了一定的進展，但是還存在一定的問題。首先在母株的選擇方面，缺乏對優良性狀母株選擇的重視；其次在培養方面，目前還無法實現高倍增殖培養，芽苗質量無法得到有效的保證，能夠作為生根誘導的增殖芽數量十分稀少，移栽的存活率較低[2]。

本文選擇馬大雜種相思多年生試驗林中的優秀種樹，借助立體快繁技術進行研究，希望能使快繁技術向著高效、高質方向發展，為馬大雜種相思的選種以及推廣打下良好的基礎。

1 材料與方法

1.1 植株來源和試驗材料

選擇馬大雜種相思20年生抗風直干型單株，借助扦插繁殖技術獲得足夠數量的試驗材料，再以當年新生枝條的帶腋芽莖段作為外植體開展試驗。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體消毒和初代培養

首先要確定最佳消毒時間，用0.1%升汞溶液在外植體處理9 min、12 min、15 min后，再用乙醇對其分別處理5s、15s、30s，最后使用無菌水進行4～6次的沖洗。

在進行外植體部位的選擇時，分別選擇枝條1～2節、3～5節、6～8節嫩莖，剪取1～2 cm帶有腋芽的莖段。

將外植體接種于MS培養基，這3種處理方式分別接種50瓶，每瓶接種1株，在第30天對存活率以及出芽率進行統計。

1.2.2 叢生芽誘導和增殖培養

研究6-BA、NAA單因子對增殖的影響：在6-BA的選擇方面，選擇0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L、3 mg/L 4個濃度，研究細胞分裂素效果；在NAA的選擇方面，選擇0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L3個濃度，研究生長素效果。

研究6-BA、NAA不同組合對增殖的影響：將培養基中添加的6-BA、NAA按照30∶1、15∶1、10∶1、5∶1、3∶1、2∶1等不同比例進行組合，研究不同組合配比對增殖效果的影響。

每種方式接種30瓶，每瓶接種3株，研究30 d后植物增殖倍數。

1.2.3 最佳生根方法的選擇

借助高質量濃度激素進行浸泡處理，將2～3 cm長的增殖芽分別置于IBA100 mg/L、300 mg/L、600 mg/L、800 mg/L、1 000 mg/L質量濃度的培養基培養4 h、8 h，再放入1/2 MS培養基中進行培養。

每種方式接種30瓶，每瓶接種3株，研究15 d后生根率以及生根數。

1.2.4 移栽和馴化

在生根培養15 d之后，進行5～10 d的煉苗，將植株根部的培養基清除干凈，再移栽至營養袋，選擇黃心土作為移栽基質。

1.3 培養條件

增殖培養的培養基為MS，生根培養的培養基為1/2 MS，培養基中添加蔗糖30 g/L、瓊脂7 g/L，將培養基中的pH值控制在弱酸性5.5～6.5范圍內，先在120℃高溫高壓下處理15 min，起到滅菌效果，之后的培養溫度保持在室溫，每天進行10～12 h的光照，保證光照強度充足。

1.4 統計學方法

用SPSS 23.0統計軟件來完成統計分析工作，用（XX±XX）來表示計量資料，計量資料用t比較，計數資料用X2比較，以P＜0.05作為統計學標準，差異的顯著性用LSD進行評價。

2 結果與分析

2.1 外植體消毒對初代的影響

2.1.1 不同處理時間的影響

組培外植體最理想的材料為帶腋芽莖段，這種材料芽遺傳不會出現太大的變異，可以有效保持親本的優良性狀。本次試驗具體的消毒效果見表1。隨著消毒時間的延長，污染率顯著降低，植株存活率有很大的改善，最適宜的消毒方法為15 min消毒以及30 s乙醇處理，污染率為6.58%，存活率為78.08%。

表1 不同處理時間對培養效果的影響

2.1.2 不同部位外植體對培養效果的影響

外植體污染率以及芽誘導率很大程度上受到枝條木質化程度影響。木質化程度越高，污染越高，頂芽內生菌數量就少，但是材質比較脆弱，會受到消毒劑影響。枝條中上部出芽率高，同時不存在較大污染。

本次試驗表明，在3～5節腋芽的污染率低，出芽率高。選擇3～5個腋芽作為外植體進行研究，為無菌材料獲取最佳途徑[3]。

在MS培養基上進行10 d的初代培養之后，腋芽開始生長，第30天生長約2～4 cm，能夠實現增殖培養的目的。

2.2 叢生芽誘導與增殖培養基的選擇

2.2.1 6-BA、NAA單因子對增殖的影響

隨著6-BA倍數的增加，增殖倍數呈上升趨勢。質量濃度1.0～1.5 mg/L，增殖倍數達到3倍，芽長勢較好；當質量濃度2.0 mg/L時，芽出現嚴重的玻璃化現象，有效芽數量降低。

隨著NAA濃度的增加，芽體生長狀況逐漸變好，當NAA濃度為0.1mg/L時，增殖倍數最大，芽的長勢優異[4]。

2.2.2 6-BA、NAA不同組合對增殖的影響

按6-BA、NAA比例為15∶1時，增殖芽不僅長勢健壯，而且增殖倍數較高，為最佳激素濃度比例。

2.3 生根誘導

借助高質量濃度激素進行浸泡處理，生根效果理想，不僅有著較高的生根率，同時生根數也較多。當在IBA 6 000 mg/L培養4～8 h，再放入MS進行培養，能夠實現生根率100%，同時幼苗生長旺盛，為最佳處理方法[5]。

3 討論

（1）外植體的消毒效果既與消毒劑處理有密切關系，同時還受到外植體采集時間以及采集部位等因素的影響。本次研究發現，隨著消毒時間的延長，污染率顯著降低，植株存活率有很大的改善，最適宜的消毒方法為15 min消毒以及30 s乙醇處理，污染率為6.58%，存活率為78.08%。

（2）增殖效果與6-BA、NAA濃度有關。本次研究發現，隨著6-BA倍數的增加，增殖倍數呈上升趨勢。質量濃度1.0～1.5 mg/L，增殖倍數達到3倍，芽長勢較好；當質量濃度2.0 mg/L時，芽出現嚴重的玻璃化現象，有效芽數量降低。隨著NAA濃度的增加，芽體生長狀況逐漸變好，當NAA濃度為0.1 mg/L時，增殖倍數最大，芽的長勢優異。

（3）借助高質量濃度激素進行浸泡處理，生根效果理想，不僅有著較高的生根率，同時生根數也較多。當在IBA6 000 mg/L培養4～8 h，再放入MS進行培養，生根率能夠實現100%，幼苗生長旺盛，為最佳處理方法。

[1]易敏,黃烈健,施瓊.馬大雜種相思扦插育苗技術[J].福建林業科技,2014（01）：108-112.

[2]施瓊,胡峰,黃烈健，等.馬大雜種相思腋芽高效組培增殖體系[J].林業科學,2014（06）：55-60.

[3]施瓊,胡峰,黃烈健，等.馬大雜種相思組培快繁技術[J].華南農業大學學報,2015（02）：79-84.

[4]孫恒,段安安,張衛華，等.馬大雜種相思無性系表型性狀差異分析[J].廣東林業科技,2015（01）：7-13.

[5]施瓊,胡峰,黃烈健，等.馬大雜種相思瓶內和瓶外生根技術研究[J].植物研究,2015（06）：891-897.

掃一掃，看你的觀點

1005-2690（2017）05-0119-02

S792.99

B

2017-04-10）