馬大雜種相思組培快繁技術(shù)研究

徐軍杰，盧爵廣，袁徐瀾

（湛江市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，廣東湛江524094）

馬大雜種相思組培快繁技術(shù)研究

徐軍杰，盧爵廣，袁徐瀾

（湛江市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，廣東湛江524094）

本試驗選擇馬大雜種相思20年生抗風(fēng)直干型單株，借助扦插繁殖技術(shù)獲得足夠數(shù)量的試驗材料，再以當(dāng)年新生枝條的帶腋芽莖段作為外植體開展試驗，旨在提高馬大雜種相思的繁殖效率。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，最適宜的消毒方法為15 min消毒以及30 s乙醇處理，污染率為6.58%，存活率為78.08%。質(zhì)量濃度1.0～1.5 mg/L，增殖倍數(shù)達(dá)到3倍，芽長勢較好；當(dāng)NAA濃度為0.1 mg/L時，增殖倍數(shù)最大，芽的長勢優(yōu)異。當(dāng)在IBA 6 000 mg/L培養(yǎng)4～8 h，再放入MS進(jìn)行培養(yǎng)，能夠?qū)崿F(xiàn)生根率100%，同時幼苗生長旺盛，為最佳處理方法。試驗結(jié)果表明，外植體的消毒效果既與消毒劑處理有密切關(guān)系，同時還受到外植體采集時間以及采集部位等因素影響，增殖效果與6-BA、NAA濃度有關(guān)。隨著6-BA倍數(shù)的增加，增殖倍數(shù)呈上升趨勢；隨著NAA濃度的增加，芽體生長狀況逐漸變好。因此，借助高質(zhì)量濃度激素進(jìn)行浸泡處理，生根效果理想，不僅有著較高的生根率，生根數(shù)也較多。

馬大雜種相思；組織培養(yǎng)；快速繁殖技術(shù)

馬大雜種相思是一種速生樹種，引進(jìn)自澳大利亞，屬含羞草科金合歡屬，與根瘤菌共生有著固氮的作用，能夠在氮元素稀少的土壤中生存，抗瘠薄優(yōu)勢非常顯著，同時可以涵養(yǎng)水源。這種樹的枝干通直，且分支較為細(xì)小，在城市綠化中有著非常好的應(yīng)用，對于生態(tài)混交林的種植有著顯著的促進(jìn)作用，目前在我國南方種植較為廣泛[1]。

現(xiàn)階段在馬大雜種相思組培快繁技術(shù)的研究方面雖然已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展，但是還存在一定的問題。首先在母株的選擇方面，缺乏對優(yōu)良性狀母株選擇的重視；其次在培養(yǎng)方面，目前還無法實現(xiàn)高倍增殖培養(yǎng)，芽苗質(zhì)量無法得到有效的保證，能夠作為生根誘導(dǎo)的增殖芽數(shù)量十分稀少，移栽的存活率較低[2]。

本文選擇馬大雜種相思多年生試驗林中的優(yōu)秀種樹，借助立體快繁技術(shù)進(jìn)行研究，希望能使快繁技術(shù)向著高效、高質(zhì)方向發(fā)展，為馬大雜種相思的選種以及推廣打下良好的基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 植株來源和試驗材料

選擇馬大雜種相思20年生抗風(fēng)直干型單株，借助扦插繁殖技術(shù)獲得足夠數(shù)量的試驗材料，再以當(dāng)年新生枝條的帶腋芽莖段作為外植體開展試驗。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體消毒和初代培養(yǎng)

首先要確定最佳消毒時間，用0.1%升汞溶液在外植體處理9 min、12 min、15 min后，再用乙醇對其分別處理5s、15s、30s，最后使用無菌水進(jìn)行4～6次的沖洗。

在進(jìn)行外植體部位的選擇時，分別選擇枝條1～2節(jié)、3～5節(jié)、6～8節(jié)嫩莖，剪取1～2 cm帶有腋芽的莖段。

將外植體接種于MS培養(yǎng)基，這3種處理方式分別接種50瓶，每瓶接種1株，在第30天對存活率以及出芽率進(jìn)行統(tǒng)計。

1.2.2 叢生芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)

研究6-BA、NAA單因子對增殖的影響：在6-BA的選擇方面，選擇0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L、3 mg/L 4個濃度，研究細(xì)胞分裂素效果；在NAA的選擇方面，選擇0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L3個濃度，研究生長素效果。

研究6-BA、NAA不同組合對增殖的影響：將培養(yǎng)基中添加的6-BA、NAA按照30∶1、15∶1、10∶1、5∶1、3∶1、2∶1等不同比例進(jìn)行組合，研究不同組合配比對增殖效果的影響。

每種方式接種30瓶，每瓶接種3株，研究30 d后植物增殖倍數(shù)。

1.2.3 最佳生根方法的選擇

借助高質(zhì)量濃度激素進(jìn)行浸泡處理，將2～3 cm長的增殖芽分別置于IBA100 mg/L、300 mg/L、600 mg/L、800 mg/L、1 000 mg/L質(zhì)量濃度的培養(yǎng)基培養(yǎng)4 h、8 h，再放入1/2 MS培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。

每種方式接種30瓶，每瓶接種3株，研究15 d后生根率以及生根數(shù)。

1.2.4 移栽和馴化

在生根培養(yǎng)15 d之后，進(jìn)行5～10 d的煉苗，將植株根部的培養(yǎng)基清除干凈，再移栽至營養(yǎng)袋，選擇黃心土作為移栽基質(zhì)。

1.3 培養(yǎng)條件

增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS，生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基為1/2 MS，培養(yǎng)基中添加蔗糖30 g/L、瓊脂7 g/L，將培養(yǎng)基中的pH值控制在弱酸性5.5～6.5范圍內(nèi)，先在120℃高溫高壓下處理15 min，起到滅菌效果，之后的培養(yǎng)溫度保持在室溫，每天進(jìn)行10～12 h的光照，保證光照強(qiáng)度充足。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

用SPSS 23.0統(tǒng)計軟件來完成統(tǒng)計分析工作，用（XX±XX）來表示計量資料，計量資料用t比較，計數(shù)資料用X2比較，以P＜0.05作為統(tǒng)計學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，差異的顯著性用LSD進(jìn)行評價。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體消毒對初代的影響

2.1.1 不同處理時間的影響

組培外植體最理想的材料為帶腋芽莖段，這種材料芽遺傳不會出現(xiàn)太大的變異，可以有效保持親本的優(yōu)良性狀。本次試驗具體的消毒效果見表1。隨著消毒時間的延長，污染率顯著降低，植株存活率有很大的改善，最適宜的消毒方法為15 min消毒以及30 s乙醇處理，污染率為6.58%，存活率為78.08%。

表1 不同處理時間對培養(yǎng)效果的影響

2.1.2 不同部位外植體對培養(yǎng)效果的影響

外植體污染率以及芽誘導(dǎo)率很大程度上受到枝條木質(zhì)化程度影響。木質(zhì)化程度越高，污染越高，頂芽內(nèi)生菌數(shù)量就少，但是材質(zhì)比較脆弱，會受到消毒劑影響。枝條中上部出芽率高，同時不存在較大污染。

本次試驗表明，在3～5節(jié)腋芽的污染率低，出芽率高。選擇3～5個腋芽作為外植體進(jìn)行研究，為無菌材料獲取最佳途徑[3]。

在MS培養(yǎng)基上進(jìn)行10 d的初代培養(yǎng)之后，腋芽開始生長，第30天生長約2～4 cm，能夠?qū)崿F(xiàn)增殖培養(yǎng)的目的。

2.2 叢生芽誘導(dǎo)與增殖培養(yǎng)基的選擇

2.2.1 6-BA、NAA單因子對增殖的影響

隨著6-BA倍數(shù)的增加，增殖倍數(shù)呈上升趨勢。質(zhì)量濃度1.0～1.5 mg/L，增殖倍數(shù)達(dá)到3倍，芽長勢較好；當(dāng)質(zhì)量濃度2.0 mg/L時，芽出現(xiàn)嚴(yán)重的玻璃化現(xiàn)象，有效芽數(shù)量降低。

隨著NAA濃度的增加，芽體生長狀況逐漸變好，當(dāng)NAA濃度為0.1mg/L時，增殖倍數(shù)最大，芽的長勢優(yōu)異[4]。

2.2.2 6-BA、NAA不同組合對增殖的影響

按6-BA、NAA比例為15∶1時，增殖芽不僅長勢健壯，而且增殖倍數(shù)較高，為最佳激素濃度比例。

2.3 生根誘導(dǎo)

借助高質(zhì)量濃度激素進(jìn)行浸泡處理，生根效果理想，不僅有著較高的生根率，同時生根數(shù)也較多。當(dāng)在IBA 6 000 mg/L培養(yǎng)4～8 h，再放入MS進(jìn)行培養(yǎng)，能夠?qū)崿F(xiàn)生根率100%，同時幼苗生長旺盛，為最佳處理方法[5]。

3 討論

（1）外植體的消毒效果既與消毒劑處理有密切關(guān)系，同時還受到外植體采集時間以及采集部位等因素的影響。本次研究發(fā)現(xiàn)，隨著消毒時間的延長，污染率顯著降低，植株存活率有很大的改善，最適宜的消毒方法為15 min消毒以及30 s乙醇處理，污染率為6.58%，存活率為78.08%。

（2）增殖效果與6-BA、NAA濃度有關(guān)。本次研究發(fā)現(xiàn)，隨著6-BA倍數(shù)的增加，增殖倍數(shù)呈上升趨勢。質(zhì)量濃度1.0～1.5 mg/L，增殖倍數(shù)達(dá)到3倍，芽長勢較好；當(dāng)質(zhì)量濃度2.0 mg/L時，芽出現(xiàn)嚴(yán)重的玻璃化現(xiàn)象，有效芽數(shù)量降低。隨著NAA濃度的增加，芽體生長狀況逐漸變好，當(dāng)NAA濃度為0.1 mg/L時，增殖倍數(shù)最大，芽的長勢優(yōu)異。

（3）借助高質(zhì)量濃度激素進(jìn)行浸泡處理，生根效果理想，不僅有著較高的生根率，同時生根數(shù)也較多。當(dāng)在IBA6 000 mg/L培養(yǎng)4～8 h，再放入MS進(jìn)行培養(yǎng)，生根率能夠?qū)崿F(xiàn)100%，幼苗生長旺盛，為最佳處理方法。

[1]易敏,黃烈健,施瓊.馬大雜種相思扦插育苗技術(shù)[J].福建林業(yè)科技,2014（01）：108-112.

[2]施瓊,胡峰,黃烈健，等.馬大雜種相思腋芽高效組培增殖體系[J].林業(yè)科學(xué),2014（06）：55-60.

[3]施瓊,胡峰,黃烈健，等.馬大雜種相思組培快繁技術(shù)[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2015（02）：79-84.

[4]孫恒,段安安,張衛(wèi)華，等.馬大雜種相思無性系表型性狀差異分析[J].廣東林業(yè)科技,2015（01）：7-13.

[5]施瓊,胡峰,黃烈健，等.馬大雜種相思瓶內(nèi)和瓶外生根技術(shù)研究[J].植物研究,2015（06）：891-897.

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