雷公藤紅素的長期毒性研究

王 慧海南省藥物研究所，海南 海口 570314

雷公藤紅素的長期毒性研究

王 慧
海南省藥物研究所，海南 海口 570314

目的：研究雷公藤紅素口服給藥的長期毒性情況，確定其安全劑量。方法：分別通過設立高、中、低劑量組、空白對照組等組別，研究口服給藥3個月后對大鼠的毒性情況，結合給藥后大鼠的一般狀況、體重、攝食量、血液學檢查、尸解結果和組織病理學檢查結果進行綜合判定，判斷動物是否發生毒性反應，確定大鼠無毒性反應劑量、毒性反應劑量或安全劑量范圍。結果：對實驗數據進行分析發現，3個給藥劑量在實驗期及恢復期間均不影響大鼠體重、攝食量、臟器系數、血常規指標、血清生化學指標，對高劑量組進行組織病理學檢查也尚未發現異常的組織病理學病變。結論：給予大鼠灌胃雷公藤紅素3個月，未觀察到與受試物本身相關的毒性反應，在劑量470ug/kg下未見有害作用，此劑量可作為安全劑量。

雷公藤紅素；長期毒性；毒性研究

雷公藤紅素(Celastrol，又名南蛇藤素)主要來源于中藥雷公藤的根皮，具有抗炎、抗氧化等活性。近年來發現雷公藤具有很好的抗腫瘤作用，并且市場需求逐年上升，盡管雷公藤紅素具有顯著的藥理活性[1]，但其毒性也不容忽視[2]，是其臨床應用的最大問題。因此，研究對其毒性情況進行全面而深入的認識，在保持或提高其藥理活性的同時應該盡可能降低其毒性。

1 儀器與材料

1.1 實驗動物 SPF級SD大鼠，體重80～100g，雌雄各半。由長沙市天勤生物技術有限公司(生產許可證號：SCXK(湘)2014-0011)提供。使用屏障級動物房(使用許可證號：SYXK(瓊)2014-0025)飼養。A級大、小鼠維持飼料喂養，由長沙市天勤生物技術有限公司(生產許可證號：SCXK(湘)2014-0011)提供。飲水經消毒后由動物自由飲用，符合SPF級動物飲水要求。

1.2 材料 雷公藤紅素(海南省藥物研究所自提，純度90.1%)；羧甲基纖維素鈉(國藥集團化學試劑有限公司生產批號：20140406)；血液化驗分析系統分析試劑(稀釋液、溶血劑和清洗劑)由EXIGO公司提供；血生化檢測試劑由日本和光，朗道公司提供。

1.3 儀器 DT5-2離心機(時代北利)；AUW220D電子天平(島津)；YP30K電子天平(上海良平)；TP1020脫水機(萊卡)；EG1150H石蠟包埋機(萊卡)；RM2245輪轉式切片機(萊卡)；HI1210攤片機(萊卡)；立式顯微鏡(索尼)；血生化測定儀(Echo plus)；動物血細胞分析儀(Exigo)。

2 方法

2.1 試驗方法[3]將80只SD大鼠隨機分為供試品高、中、低劑量組及空白對照組，每組20只，雌雄各半，給藥組給予雷公藤470μg/kg、94μg/kg、和47μg/kg，空白對照組給予0.5%羧甲基纖維素鈉溶液，各組均按大鼠10 mL/kg體重灌胃給藥，每天1次，連續灌胃給藥12周，停止給藥2周作為恢復期觀察，給藥期(12周)和恢復期(2周)各組大鼠于第1次給藥前及給藥后至恢復期結束每周末稱體重1次，并觀察動物的一般狀況及計算每周動物攝食量。給藥期和恢復期，各組分別取大鼠14、6只處死，雌雄各半，麻醉后采血，測定血常規、和血清生化學指標，大鼠重要臟器稱重后計算臟器系數，病變器官進行主要臟器的組織病理學檢查。結合大鼠的狀況、組織病理學檢查結果及檢測數據進行綜合判定，判斷動物是否發生毒性反應，確定大鼠無毒反應劑量、毒性反應劑量或安全劑量范圍。

2.2 統計方法 采用SPSS19.0軟件單因素方差分析[4]進行統計處理，數據以(x±SD)表示，采用t檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1 一般狀況 給藥期及恢復期間各組大鼠活動靈活，反應敏捷，被毛整潔，目光有神，眼、鼻、口無異常分泌物，進食飲水正常，未見明顯毒性反應，各組動物均無死亡。

3.2 對大鼠體重的影響 給藥期間，雄性大鼠，低、高劑量組動物體重與對照組比較，差異不具有統計學意義(P>0.05)；中劑量組動物體重，在給藥第12周，與對照組比較有所下降(P<0.05)，恢復期，雄性中劑量組恢復期第1周，與對照組比較降低(P<0.05)。其他組別與對照組比較，差異不具有統計學意義(P>0.05)。結果見表1。

雌性大鼠低劑量組動物體重，在給藥第3周，與對照組比較差異具有統計學意義(P<0.05)；高劑量組動物體重，在給藥第7、8、9周，與對照組比較差異具有統計學意義(P<0.05)；中劑量組動物體重與對照組比較，差異不具有統計學意義(P>0.05)。恢復期雌性各組與對照組比較，差異不具有統計學意義(P>0.05)。結果見表2。

表1 給藥期及恢復期的雄性大鼠體重 (g，x±SD)

注： 與對照組比較，*P<0.05。

表2 給藥期及恢復期的雌性大鼠體重 (g，x±SD)

注：與對照組比較，*P<0.05。

3.3 對大鼠攝食量的影響 給藥期間的雄性大鼠攝食量，中劑量組與對照組比較，第12周的動物攝食量明顯減少，差異具有統計學意義(P<0.05)，高、低劑量組雄性大鼠與對照組比較差異不具有統計學意義(P>0.05)。見表3。

給藥期間的雌性大鼠攝食量，高劑量組與對照組比較，第7、8周的動物攝食量明顯減少，差異具有統計學意義(P<0.05)，其它時間差異不具有統計學意義(P>0.05)；低、中劑量組雌性大鼠與對照組比較差異不具有統計學意義(P>0.05)，見表4。恢復期，各組之間飼料消耗量差異不具有統計學意義(P>0.05)。

表3 給藥期及恢復期的雄性大鼠攝食量 (g，x±SD)

注： 與對照組比較，*P<0.05。

表4 給藥期及恢復期的雌性大鼠攝食量 (g，x±SD)

注： 與對照組比較，*P<0.05。

3.4 對大鼠臟器系數的影響 給藥期：與對照組比較，雄性大鼠高劑量組肝臟系數及腎臟系數均明顯增大(P<0.05)，其他各臟器系數及中、低劑量組各臟器系數比較差異不具有統計學意義(P>0.05)；與對照組比較，雌性大鼠低劑量組肝臟系數明顯增大(P<0.05)，中劑量組由于個別大鼠脾臟系數較大，使該項指標均值偏高，標準差較大，但差異不具有統計學意義(P>0.05)，其他各臟器系數及低劑量各項臟器系數差異不具有統計學意義(P>0.05)。結果見表5。

恢復期：高、中、低劑量組的各項臟器系數與對照組比較，差異不具有統計學意義(P>0.05)。結果見表6。

表5 給藥期大鼠的臟器系數 (x±SD,n=7)

注：與對照組比較*P<0.05。

表6 恢復期大鼠的臟器系數 (x±SD,n=3)

3.5 對大鼠血常規的影響 給藥期：與對照組比較，雌性大鼠高劑量血小板指標具有顯著意義(P<0.05)，同組其它指標及其它各組指標均不具有統計學意義(P>0.05)；雄性大鼠各組指標均不具有統計學意義(P>0.05)。結果見表7。

恢復期：與對照組比較，雄性大鼠中劑量紅細胞指標具有顯著意義(P<0.05)，同組其它指標及其它各組指標均不具有統計學意義(P>0.05)；雌性大鼠各組指標均不具有統計學意義(P>0.05)。結果見表8。

表7 給藥期大鼠血常規檢測結果 (x±SD,n=7)

注：與對照組比較*P<0.05。

表8 恢復期大鼠血常規檢測結果 (x±SD,n=3)

3.6 對大鼠血清生化學指標的影響 給藥期：雄性大鼠檢測與對照組比較，中劑量組AST明顯升高，差異具有統計學意義(P<0.05)，其它同組指標及其它各組指標與對照組比較，差異不具有統計學意義(P>0.05)；雌性大鼠檢測結果與對照組比較，中劑量組AST明顯升高，高劑量組ALP明顯降低，差異具有統計學意義(P<0.05)，其它同組指標及其它各組指標與對照組比較，差異不具有統計學意義(P>0.05)。結果見表9。

恢復期：雄性大鼠檢測結果與對照組比較，各劑量組所有指標差異不具有顯著性意義(P>0.05)；雌性大鼠檢測結果與對照組比較，中劑量組及高劑量AST由于個別大鼠測定值較高，標準差較大，但差異不具有統計學意義(P>0.05)，其它同組指標及其它各組指標與對照組比較，差異不具有統計學意義(P>0.05)。結果見表10。

表9 給藥期大鼠血清生化學指標檢測結果 (x±SD,n=7)

注：與對照組比較，*P<0.05。

表10 恢復期大鼠血清生化學指標檢測結果 (x±SD,n=3)

3.7 剖檢觀察結果及病理組織學檢查 實驗期及恢復期發現，供試品本身并不引起大鼠組織器官形狀、體積大小、色澤、位置、硬度、外膜等的異常改變。取部分高劑量組及對照組動物剖檢，未發現與供試品本身相關的病理學檢查，因此不進行中、低劑量組檢查。

4 討論

雷公藤紅素長期毒性劑量組的劑量設置，是根據本實驗室前期研究中得到LD50 4.69mg/kg決定，大鼠3個月長期毒性試驗中高、中、低3個劑量可分別采用1/10、1/50、1/100左右的LD50，符合長期毒性試驗設計原則[5]。

經3個月給藥及恢復期研究發現，雷公藤紅素(470μg/kg、94μg/kg和47μg/kg)未引起大鼠一般狀況異常、組織器官異常及組織病理學病變，雖然大鼠體重、攝食量及個別臟器系數、血常規指標及血清生化指標在給藥期或恢復期出現部分數據的差異性，但從整體研究周期數據來看，均未體現任何規律性，也不存在任何劑量相關性及性別相關性，認為此指標的的差異性不存在實際意義，應并無毒理學意義。

綜上所述，在本實驗室條件下，大鼠經口灌胃給予雷公藤紅素3個月，未觀察到與受試物本身相關的毒性反應，在劑量470μg/kg以下未見有害作用，在此劑量以下使用，可作為安全劑量。

[1]胡凱,葛衛紅.雷公藤紅素藥理活性研究進展[J].亞太傳統醫藥,2012,8(11):179-181.

[2]袁菱,陳彥,周蕾,等. 納米結構脂質載體降低雷公藤紅素毒性的實驗研究[C].//首屆全國方劑組成原理高峰論壇. 2012.

[3]高曉東,李雪萍,徐春茂,等. 扶正逐毒丸制劑大鼠長期毒性實驗研究[J]. 中國臨床藥理學雜志, 2015(7):563-565.

[4]張曉冬,宗英,陸國才，等. 藥物長期毒性試驗血液和生化指標的統計處理[J].中國新藥雜志,2010,19(4):270-272.

[5]國家食品藥品監督管理局.藥物研究技術指導原則(2005)[M].北京:中國醫藥科技出版社,2005:217-226.

海南省自然科學基金(NO：814286)。

王慧(1984-)，漢族,女，本科，助理研究員，研究方向為藥理學研究。E-mail：42321346@qq.com

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2017-01-13 編輯：梁志慶)