過敏性紫癜血清中某些細胞因子和IgA1含量變化的臨床意義

邢靜++李文斌++劉振奎+++石蔚

[摘要] 目的 觀察普通過敏性紫癜（GHSP）及紫殿性腎炎（HSPN）患兒血清白細胞介素21（IL-21）、轉化生長因子β（TGF-β）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）和免疫球蛋白A1（IgA1）含量，進一步探討過敏性紫癜（HSP）及HSPN的發病機制，為臨床診斷和治療HSP提供新思路。 方法 抽取2014年1月～2016年1月在河北北方學院附屬第一醫院兒科住院治療的65例HSP（38例GHSP，27例HSPN）患兒和30例健康兒童（對照組）外周血，離心后分離血清，采用雙抗夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測血清IL-21、TGF-β、TNF-α、IgA1含量，對結果進行統計學分析。 結果 HSP患兒IL-21、TGF-β、TNF-α、IgA1水平均高于對照組（P < 0.05），且HSPN患兒TGF-β、TNF-α、IgA1水平均明顯高于GHSP患兒（P < 0.05），而IL-21水平在兩組患兒之間差異無統計學意義（P > 0.05）。HSPN患兒血清TGF-β與IgA1呈正相關（r=0.346，P < 0.05），TNF-α與IgA1呈正相關（r=0.582，P < 0.05）。 結論 IL-21、TGF-β、TNF-α和IgA1參與GHSP及HSPN的發病及病情進展，血清IgA1含量可作為判斷HSPN患兒預后的重要指標之一。

[關鍵詞] 過敏性紫癜；普通過敏性紫癜；紫癲性腎炎；炎癥介質；免疫球蛋白

[中圖分類號] R692.34 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）04（b）-0111-04

[Abstract] Objective To observe the contents of IL-21， TGF-β， TNF-α and IgA1 in patients with general Henoch-Schnlein purpura （GHSP） and Henoch-Schnlein purpura nephritis （HSPN）， and further explore the pathogenesis of HSP and HSPN， in order to provide new ideas for diagnosis and treatment of HSP in clinic. Methods 65 children with HSP （38 children with GHSP， 27 children with HSPN） hospitalized in Department of Pediatric Internal， the First Affiliated Hospital of Hebei North University from January 2014 to January 2016 were selected. At the same time 30 healthy children who did health examination in the same hospital were selected randomly as control group. Their serum were collected for test after centrifugation， the contents of serum IL-21， TGF-β， TNF-α and IgA1 were detected by double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay method （ELISA）. The results were analyzed statistically. Results The contents of serum IL-21， TGF-β， TNF-α and IgA1 in children with HSP were significantly higer than those of the control group （P < 0.05）； and the contents of serum TGF-β， TNF-α， IgA1 in children with HSPN were higher than those of the children with GHSP （P < 0.05）， but the content of serum IL-21 had no significant difference between the two groups （P > 0.05）. The contents of serum TGF-β and IgA1 in children with HSPN was positively correlated （r=0.346， P < 0.05）， while the contents of serum TNF-α and IgA1 in children with HSPN was also positively correlated （r=0.582， P < 0.05）. Conclusion IL-21， TGF-β， TNF-α and IgA1 are all involved in the occurrence and development process of GHSP and HSPN， and serum IgA1 is help to judge the prognosis of patients with HSPN.

[Key words] Henoch-Schnlein purpura； Genral Henoch-Schnlein purpura； Henoch-Schnlein purpura nephritis； Inflammatory mediators； Immunoglobulins

過敏性紫癜又稱亨舒綜合征（Henoch-Schnlein purpura，HSP），好發于秋冬季節，發病年齡平均為（7.27±2.72）歲，是學齡期兒童常見疾病[1]，臨床表現除有皮膚紫癜、關節腫痛、腹痛、便血外，若累及腎臟還可以表現為血尿和/或蛋白尿，腎功能減退。HSP雖然大多預后良好，但少數患兒可發生終末期腎病[2]，其中，未累及腎臟者稱為普通過敏性紫癜（Genral Henoch-Schnlein purpura，GHSP），累及腎臟者稱紫癜性腎炎（Henoch-Schnlein purpura nephritis，HSPN）。HSPN是兒童期繼發性腎炎的重要原因之一。HSP的發病尚不明確，目前研究結果表明，患兒體內免疫細胞多克隆活化以致免疫球蛋白A1（Immunoglobulins，IgA1）為主的免疫球蛋白合成異常和循環免疫復合物的產生增多，導致機體發生系統性血管炎[3]。細胞因子白介素-21（interleukin-21，IL-21）、轉化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和IgA1在人體免疫反應中具有重要作用，近年來被證實與HSP的發生及疾病進展有密切聯系[4]。本研究通過觀察HSP患兒急性期外周血IL-21、TGF-β、TNF-α、IgA1水平及其變化情況，進一步探討兒童GHSP及HSPN的免疫學發病機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究通過河北北方學院附屬第一醫院（以下簡稱“我院”）倫理委員會批準，所有測試者已簽署知情同意書。選擇2014年1月～2016年1月在我院兒科住院治療的65例HSP患兒作為HSP組，其中，男41例，女24例；平均年齡（8.05±3.07）歲。納入研究的患兒根據腎臟是否受累分為GHSP組（38例）和HSPN組（27例）。隨機選擇在我院體檢中心進行體檢的30例健康兒童作為對照組，其中男18例，女12例；平均年齡（8.15±3.16）歲。兩組在性別構成比、年齡方面比較，差異無統計學意義（P > 0.05），具有可比性。

納入標準為：①符合2005年歐洲風濕病防治委員會和美國風濕病協會共同制定的HSP診斷標準，臨床表現為皮膚紫癜、急性關節炎或關節痛、彌散性腹痛以及腎臟受累，組織學檢查示以IgA為主免疫復合物沉積。②處于HSP的急性期，具有典型皮疹，伴或不伴關節腫痛、腹痛及尿液改變。

排除標準：①2個月之內使用過糖皮質激素或其他免疫抑制劑。②既往患有系統性紅斑狼瘡、腎病綜合征等免疫系統疾病或過敏性鼻炎、蕁麻疹、支氣管哮喘等過敏性疾病。

HSPN診斷標準為在HSP病程6個月內出現血尿和（或）蛋白尿。

1.2 方法

采用回顧性研究方法，所有受試兒童均于清晨空腹抽取靜脈血2 mL，即刻置EDTA抗凝試管中混勻，4℃下2000 r/min離心15 min，收集血清置于-80℃冰箱待檢；采用夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清IL-21、TGF-β、TNF-α、IgA1含量，操作步驟按試劑盒說明書進行。

1.3 統計學方法

采用SPSS 18.0統計學軟件進行數據分析，計量資料數據用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析；計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗；應用Pearson分析法對血清IL-21、TGF-β、TNF-α、IgA1含量進行相關性分析；以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清IL-21、TGF-β、TNF-α、IgA1變化情況

HSP患兒IL-21、TGF-β、TNF-α、IgA1水平均高于對照組（P < 0.05）；且HSPN患兒TGF-β、TNF-α、IgA1水平均明顯高于GHSP患兒（P < 0.05），而IL-21水平在兩組患兒之間差異無統計學意義（P > 0.05）。見表1。

2.2 HSPN患兒血清IL-21、TGF-β、TNF-α、IgA1相關性

HSPN患兒血清TGF-β與IgA1呈正相關（r=0.346，P < 0.05），TNF-α與IgA1也呈正相關（r=0.582，P < 0.05）。見表2。

3 討論

IL-21通常產生于活化的CD4+T細胞、濾泡輔助型T細胞以及NKT細胞，作用于表達有IL-21受體的B淋巴細胞，通過JAK/STAT通路激活e-Myc蛋白表達，促進B淋巴細胞的增殖和漿細胞分化，調節機體免疫力[5]。另外，IL-21和TGF-β協同作用還可使初始B細胞誘導Ig轉換[6]。既往研究就認為，IL-21可能在系統性紅斑狼瘡、類風濕關節炎及過敏性紫癜等自身免疫性疾病中發揮重要作用[7]。刑靜等[8]認為，體內合成IL-21可以調整HSP患者體內免疫功能紊亂的狀態，但大量IL-21又往往增強免疫細胞的增殖與殺傷作用，加劇了自身免疫反應。本研究中，GHSP組及HSPN組患兒血清IL-21含量明顯高于健康兒童（P < 0.05），但GHSP患兒及HSPN患兒之間差異無統計學意義（P > 0.05），表明IL-21在HSP發病機制中發揮重要作用，但IL-21對于HSP患兒是否會累及腎臟無提示意義。但王士杰等[9]認為HSP患兒急性期因T細胞分泌IL-21受到抑制，血漿IL-21含量會明顯低于正常兒童，具體機制有待進一步探討。

TGF-β可抑制B細胞分泌IgM而促進其分泌IgA和IgE，同時也可以抑制TH1和TH2細胞的功能，發揮保護性作用[10]。但TGF-β過度表達會促進腎臟系膜細胞增生，導致腎小球硬化，造成腎臟損傷[11]。本研究中，GHSP及HSPN患兒血清TGF-β水平均明顯高于對照組，這是因為HSP 患兒急性期TH1/TH2細胞免疫應答失衡，TGF-β升高，體內出現保護性TH3細胞功能增強，以糾正TH1/TH2失衡[12]。本研究結果顯示，HSPN組患兒血清TGF-β含量明顯高于GHSP組，差異有統計學差異（P < 0.05）。結合上述討論認為TGF-β可作為HSP患兒腎臟損傷的重要指標。

TNF-α主要由單核-巨噬細胞產生，可促進血管內皮細胞產生白細胞黏附分子，增強中性粒細胞的吞噬和黏附功能，并分泌大量炎性介質沉積于小血管內壁，增加血管通透性，因此不難看出TNF-α在HSP發病中起到重要作用[13]。Ha[14]認為，HSP發病過程中TNF-α水平甚至與腎損害程度及預后有關，在嚴重HSPN中可作為監測疾病活動的指標。Del Vecchio等[15]研究顯示，TNF-α水平與HSP的腎損害程度相關，TNF-α水平越高，其尿紅細胞計數越高，腎損害程度也越高。在本研究中，GHSP患兒和HSPN患兒血清TNF-α含量均明顯高于對照組，且HSPN組明顯更高，差異均有統計學意義（P < 0.05）。分析原因可能是TNF-α誘導產生的炎性介質和免疫復合物沉積于腎臟血管導致其通透性增加，出現血尿、蛋白尿等癥狀。另有研究闡明，TNF-α水平升高可促進內皮細胞特異性抗原產生，與IgA共同作用引起血管性炎癥[16]。故研究TNF-α的同時，對IgA的研究不容忽視。

IgA1是免疫復合物形成的重要物質，當機體受感染、遺傳、免疫等因素的影響時，IgA1易發生糖基化，糖基化的IgA1無法在肝臟中代謝[17]，導致血清中IgA1增高并與IgG結合形成免疫復合物IgA1-IgG-IC，該免疫復合物最終沉積于腎臟并造成損傷[18-20]。早有研究證明，大量的免疫復合物使系膜細胞活化、增殖并釋放多種細胞及炎性因子，導致腎小球系膜增生，細胞外基質分泌增多，新月體形成及腎小球纖維化形成等病理改變[21]。Saulsbury[22]研究也證明，異常糖基化的IgA1是HSPN的重要致病因素。本次研究發現，GHSP和HSPN患兒血清IgA1水平均明顯高于對照組，且HSPN患兒明顯更高，差異有統計學意義（P < 0.05）。與既往研究結果相似，說明在由GHSP發展為HSPN的過程中IgA1起著重要的促進作用。

本研究相關性研分析顯示，HSPN患兒血清IgA1含量與TGF-β和TNF-α含量均呈正相關（P < 0.05），即TGF-β、TNF-α含量越高，IgA1含量越高。原因可能是TGF-β和TNF-α通過正反饋效應刺激機體產生IgA1并使其發生異常糖基化，后者形成循環免疫復合物沉積于小血管壁，造成皮膚及腎臟病變。目前臨床上HSP遠期預后主要取決于患兒腎臟病變。肖李艷等[23]研究認為，HSP腎損害的相關危險因素包括年齡、尿微量蛋白、白細胞數、血小板以及血總IgE。本研究結果提示，可通過檢測TGF-β、TNF-α和IgA1含量來評估和預測HSP患兒預后。TGF-β和TNF-α之間未發現明顯的相關性，有待擴大樣本量進一步研究。

綜上所述，HSP患兒血清IL-21、TGF-β、TNF-α和IgA1含量均高于對照組，且TGF-β、TNF-α和IgA1含量在HSPN患兒中進一步增高，另外，IgA1含量與TGF-β和TNF-α含量均呈正相關，血清IgA1含量可作為判斷HSP患兒預后的重要指標之一。

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（收稿日期：2016-12-10 本文編輯：程 銘）