復方甲硝唑克林霉素乳膏的制備及質量控制

范義鳳+王欽++金智華

[摘要] 目的 制備復方甲硝唑克林霉素乳膏并建立其質量控制方法。方法 采用乳化法制備乳膏，建立酸堿度、微生物限度、高速離心試驗、耐熱耐寒試驗和室溫留樣觀察試驗；采用HPLC、梯度洗脫法，測定乳膏中4種主要成分的含量，色譜柱為Diamonsil C18，流動相：甲硝唑和維生素B6的為乙腈-磷酸氫二鉀溶液（0.68%）（20∶80），鹽酸克林霉素和螺內酯的為乙腈-磷酸氫二鉀溶液（0.68%）（60∶40）流速為1.0 mL/min，檢測波長為 210 nm，柱溫為25℃，進樣量為20 μL。結果 該乳膏pH為6.0～7.0，微生物限度、高速離心試驗、耐熱耐寒試驗檢查等均符合規定。甲硝唑、克林霉素、螺內酯、維生素B6在各自的濃度范圍內與峰面積呈良好的線性關系。平均回收率：甲硝唑為100.2%，RSD為0.95%；克林霉素為100.4%，RSD為1.03%；螺內酯為99.60%，RSD為0.99%；維生素B6為99.79%，RSD為0.87%。 結論 本品制備工藝簡單，所得制劑質量可控，性質穩定，無刺激性，可滿足臨床需要。含量測定方法簡便、快速、結果準確，可用于復方甲硝唑克林霉素乳膏中四種主要成分的含量測定。

[關鍵詞] 甲硝唑；克林霉素；螺內酯；維生素B6；高效液相色譜法

[中圖分類號] R943 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）04（c）-0146-05

[Abstract] Objective To prepare Compound Metronidazole Clindamycin Cream and estabilish a method for its quality control. Methods Compound Metronidazole Clindamycin Cream was prepared by using emulsion process. and then pH， microbial limit， high speed centrifuge test， heat and cold resistant test and room temperature retention test were established. HPLC method for determination of Compound Metronidazole Clindamycin Cream was developed， and gradient elution method was adopted. The chromatography column was Diamonsil C18； Mobile phase of metronidazole and vitamin B6 was the mixture of acetonitrile and dipotassium hydrogen phosphate （0.68%） （20∶80）， and mobile phase of clindamycin hydrochloride and spironolactone was the mixture of acetonitrile and dipotassium hydrogen phosphate （0.68%） （60∶40）； the flow rate was 1.0 mL/min； the detection wavelength was 210 nm； the column temperature was 25 ℃， and the sample volume was 20 μL. Results The pH value of the cream was 6.0-7.0， and the quality of cream was eligible in microbial limit， high speed centrifugal test， heat/cold test. Metronidazole， clindamycin， spironolactone and vitamin B6， their respective concentration and peak area showed good linear relationship. The average recovery rates： metronidazole was 100.2%， RSD was 0.95%； clindamycin was 100.4%， RSD was 1.03%； spironolactone was 99.60%， RSD was 0.99%； vitamin B6 was 99.79%， RSD was 0.87%. Conclusion The preparation process is simple， the quality of the preparation is controllable， the property is stable， and the utility model can meet the clinical needs. The method of content determination is also simple， rapid and accurate， can be used for the determination of four main components in Compound Metronidazole Clindamycin Cream.

[Key words] Metronidazole； Clindamycin； Spironolactone； Vitamin B6； HPLC

尋常型痤瘡是皮膚科的常見病，其病因目前尚未明確，可能是雄性激素水平過高，皮脂腺功能亢進，痤瘡丙酸桿菌感染等[1]。痤瘡桿菌對甲硝唑和鹽酸克林霉素敏感，兩者均可有效抑制痤瘡桿菌的生長[2-5]。目前臨床上主要用甲硝唑乳膏及其復方制劑[6-7]、中西醫聯合治療[8]、紅藍光治療[9]等用于尋常型痤瘡治療。螺內酯還具有干擾皮膚雄激素受體、溫和的抗雄激素作用，且無明顯雌激素樣副作用，可使皮脂腺分泌明顯減少，因此可用于尋常型痤瘡的治療[10-12]。臨床研究顯示，維生素B6在治療尋常型痤瘡方面具有一定的效果[13-14]，可用于尋常型痤瘡的輔助治療用藥。南通大學附屬醫院藥學部制劑室根據臨床需要，針對發病機制，自行研制了新制劑復方甲硝唑克林霉素乳膏，其主要成分為甲硝唑、鹽酸克林霉素、螺內酯，維生素B6。采用HPLC法測定復方甲硝唑克林霉素乳膏中甲硝唑、克林霉素、維生素B6、螺內酯4種主要成分的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1儀器

Agilent型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）（包括四元泵，紫外檢測器，手動進樣器，色譜工作站，真空脫氣機）、Cary-300型紫外分光光度計（美國瓦里安公司）、BP211D型分析天平（德國賽多利斯）。

1.2 試藥

甲硝唑對照品（批號：0191-9804，純度99.6%）、螺內酯對照品（批號：100193-14189純度99.8%），維生素B6對照品（批號：100116-13470，純度99.8%），鹽酸克林霉素對照品（批號：130422-200702，純度99.9%），對照品均為中國食品藥品檢定研究院。乙腈為色譜純，磷酸氫二鉀、乙醇為分析純。

2 方法與結果

2.1 處方

甲硝唑50 g，克林霉素10 g，螺內酯4 g， 維生素B6 10 g，硬脂酸65 g，十八醇65 g，單硬脂酸甘油酯12 g， 十二烷基硫酸鈉5 g，甘油50 g，月桂氮卓酮10 g， 丙二醇120 g，羥苯乙酯3 g，純化水596 mL，共制成1000 g。

2.2 復方甲硝唑克林霉素乳膏的制備

取硬脂酸、十八醇、單硬脂酸甘油酯、羥苯乙酯混合加熱使其熔化，過濾，并保持70～80℃（油相）；另取甲硝唑、克林霉素、維生素B6溶于適量溫度為60℃純化水中，取十二烷基硫酸鈉、甘油、適量純化水混合加熱溶解，保持70～80℃（水相）；將水相緩慢加入油相中，按照同一方向隨加隨攪拌30 min，攪拌速率600 r/min，使乳化完全；取螺內酯溶于溫度為60℃丙二醇中，得螺內酯液；待上述乳膏基質冷卻至40℃時，再加入螺內酯液和月桂氮酮，最后以600 r/min速率攪拌直至冷凝，即得。

2.3 質量控制

2.3.1 外觀

本品為乳白色，外觀均勻細膩、無顆粒感、易于涂布。

2.3.2 鑒別

取本品5 g，加50%乙醇50 mL水浴加熱20 min過濾，取濾液在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應與對照品溶液主峰的保留時間一致。

2.3.3 檢查

2.3.3.1 酸堿度 取本品5 g置燒杯中，加水25 mL攪拌均勻，測得pH為6.0～7.5（《中國藥典》2015年版四部通則0631）[15]77，符合規定。

2.3.3.2 微生物限度 隨機抽取三批樣品，按照（《中國藥典》2015年版四部通則1105）[15]140檢驗、銅綠假單胞菌、金葡菌等均符合規定。

2.3.3.3裝量 取本品，按最低裝量檢查法（《中國藥典》2015年版四部通則0942）[15]125行檢查，符合規定。

2.4 含量測定

2.4.1色譜條件

色譜柱為Diamonsil C18 （4.6 mm×150 mm，5 μm），用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。流動相為乙腈（A）-磷酸氫二鉀溶液（0.68%）（B），梯度洗脫（洗脫程序見表1），流速為1.0 mL/min，檢測波長為 210 nm，柱溫為25℃，進樣量為20 μL。

2.4.2溶液的制備

2.4.2.1 混合對照品溶液 精密稱取甲硝唑對照品100 mg、螺內酯對照品20 mg置100 mL量瓶中，加95%的乙醇水浴加熱使溶解，并加乙醇稀釋至刻度作為貯備液Ⅰ。另精密稱取鹽酸克林霉素對照品、維生素B6對照品各50 mg分別置100 mL量瓶中，加純化水溶解并稀釋至刻度作為貯備液Ⅱ。再精密量取貯備液Ⅰ、Ⅱ各5 mL置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成含一定濃度的混合對照品溶液。

2.4.2.2 供試品溶液 按處方比例配制復方甲硝唑克林霉素乳膏，精密稱取5 g乳膏置燒杯中，加50%的乙醇80℃水浴加熱20 min分三次提取，每次30 mL，提取液轉移至100 mL量瓶，并用50%的乙醇稀釋至刻度，搖勻濾過，再精密量取濾液5 mL置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度搖勻。

2.4.2.3 陰性對照溶液 按處方比例配制不含主要成分的乳膏基質，精密稱取5 g乳膏基質再按上述供試品溶液項下進行制備。

2.4.3 系統適應性試驗

精密量取“2.4.2”項下的對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各適量，按“2.4.1”進樣20 μL測定，記錄色譜圖，見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各成分均能達到基線分離，分離度>1.5，理論塔板數以維生素B6峰、甲硝唑峰、螺內酯峰、鹽酸克林霉素峰計均>3360 ，保留時間分別為1.6、3.5、11.7、13.5 min左右。結果表明，其他成分對測定無干擾。

2.4.4 線性關系考察

精密量取“2.4.2”項下的四種對照品溶液的貯備液 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 mL 分別置 25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得系列對照品溶液。按“2.4.1”色譜條件項下的方法各進樣20 μL測定峰面積，以濃度為橫坐標（C）、峰面積為縱坐標（A峰） 進行線性回歸，結果見表2。

2.4.5 精密度試驗

精密量取“2.4.2”項下的混合對照品溶液適量，按“2.4.1”項下的方法進行測定，各進樣20 μL記錄峰面積，并計算RSD。結果甲硝唑、鹽酸克林霉素、螺內酯、維生素B6峰面積的RSD分別為0.71%、0.59%、0.42%、0.87%（n=6），說明儀器精密度良好。

2.4.6 穩定性試驗

精密量取“2.4.2”項下的供試品溶液適量（批號160412），按“2.4.1”項下的方法，于室溫（25℃）在0、2、4、8、12 h分別進樣20 μL記錄峰面積，并計算RSD，結果甲硝唑、鹽酸克林霉素、螺內酯、維生素B6峰面積的RSD分別為0.91%、1.23%、0.87%、1.56%（n=6），說明供試品溶液在12 h內穩定。