香菇多糖對結腸癌化療患者免疫功能及外周血中炎癥因子水平的影響

萬盟++朱余兵+++邱潤澤+++田星+++朱慶貴

[摘要] 目的 探究香菇多糖聯(lián)用化療藥物對中晚期結腸癌患者免疫功能及外周血中炎癥因子水平的影響。 方法 選取2014年1月～2016年8月南京醫(yī)科大學附屬南京醫(yī)院收治的68例中晚期結腸癌患者作為研究對象，將其隨機分為對照組（34例）和治療組（34例）。對照組單用FOLFIRI化療方案，治療組給予FOLFIRI化療方案聯(lián)用香菇多糖。治療后收集患者外周血漿，采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測轉化生長因子-β（TGF-β）、白細胞介素-17（IL-17）、白細胞介素-6（IL-6）與腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的水平，同時采用流式細胞技術檢測外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平，并評價兩組不良反應。 結果 化療后，治療組TNF-α、TGF-β、IL-17和IL-6水平均較化療前顯著下降（P < 0.05），且治療組化療后TNF-α、TGF-β、IL-17和IL-6水平均顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。化療后，治療組CD3+、CD4+水平較化療前顯著上升（P < 0.05），且治療組化療后外周血中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。治療組總的不良反應發(fā)生率低于對照組，且在白細胞降低、血紅蛋白降低、惡心嘔吐、腹瀉、便秘等方面的不良反應發(fā)生例數(shù)均少于對照組，但差異均無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。 結論 香菇多糖與化療藥物聯(lián)用有降低中晚期結腸癌患者外周血中細胞因子IL-17、TGF-β、IL-6與TNF-α水平的作用，能夠在一定程度上抑制腫瘤浸潤，阻止腫瘤惡化和轉移，減少化療不良反應的發(fā)生率，同時提高結腸癌患者機體的免疫功能，對中晚期結腸癌患者的化療輔助治療有積極的臨床意義。

[關鍵詞] 香菇多糖；結腸癌；FOLFIRI；免疫功能

[中圖分類號] R735.35 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）04（c）-0159-04

[Abstract] Objective To investigate the influence of lentinan combined with chemotherapeutics on the immune function and the levels of inflammatory factors in peripheral blood of patients with middle and advanced stage of colon cancer. Methods Sixty-eight cases of patients with middle and advanced stage of colon cancer admitted to Nanjing Hospital Affiliated to Nanjing Medical University from January 2014 to August 2016 were selected as research objects， and they were randomly divided into control group （34 cases） and treatment group （34 cases）. The control group was only given FOLFIRI chemotherapy regimens， the treatment group was given lentinan combined with FOLFIRI chemotherapy regimens. After treatment， the peripheral plasma of patients was collected. The enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was used to detect the levels of transforming growth factor-β （TGF-β）， interleukin-17 （IL-17）， interleukin-6 （IL-6） and tumor necrosis factor-α （TNF-α）， and the flow cytometry was used to detect the levels of CD3+， CD4+， CD8+， CD4+/CD8+ in peripheral blood， the adverse reactions of the two groups were evaluated. Results After chemotherapy， the levels of TNF-α， TGF-β， IL-17 and IL-6 in the treatment group were significantly lower than those before chemotherapy （P < 0.05）， and the levels of TNF-α， TGF-β， IL-17 and IL-6 in the treatment group after chemotherapy were all lower than those of control group， the differences were all statistically significant （P < 0.05）. After chemotherapy， the levels of CD3+， CD4+ in the treatment group were all significantly higher than those before chemotherapy （P < 0.05）， and the levels of CD3+， CD4+， CD4+/CD8+ in peripheral blood in the treatment group after chemotherapy were all higher than those of control group， the differences were all statistically significant （P < 0.05）. The total incidence of adverse reactions in the treatment group was lower than that of control group， and the cases of adverse reactions in the aspects of decrease of leukocyte， decrease of hemoglobin， nausea and vomiting， diarrhea， constipation were all lower than those of control group， but there were no statistically significant differences （P > 0.05）. Conclusion Combined application of lentinan with chemotherapeutics has the function of decreasing the levels of IL-17， TGF-β， IL-6 and TNF-α in peripheral blood of patients with middle and advanced stage of colon cancer， which can inhibit tumor infiltration to a certain degree， stop the deterioration and transfer of tumour， reduce the incidence of adverse reactions of chemotherapy， and improve the immune function of patients with colon cancer at the time， it has positive clinical significance for the adjuvant chemotherapy of patients with middle and advanced stage of colon cancer.

[Key words] Lentinan； Colon cancer； FOLFIRI； Immune function

結腸癌的發(fā)病率日益上升，是全球癌癥中導致死亡的最主要因素之一，其病死率非常高，侵襲和轉移是其生物學特征。目前對于中晚期患者多采用化療方案治療，但單用化療藥物對患者的免疫系統(tǒng)造成極大負擔，且復發(fā)率高，為治療帶來了很大困難。香菇多糖（lentinan，LNT）是從人工培養(yǎng)的傘形科真菌香菇子實體中提取的葡聚糖，為一種臨床常用的惡性腫瘤輔助用藥[1]。越來越多的研究表明，LNT作為宿主免疫增強劑（host defense potentiator，HDP）能夠刺激機體多種免疫細胞、因子生長，對于改善癌癥預后、延緩患者生存時間有著重大意義[2]。本研究采用FOLFIRI化療方案聯(lián)合LNT治療結腸癌患者，觀察聯(lián)用后對患者外周血中轉化生長因子-β（TGF-β）、白細胞介素-17（IL-17）、白細胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平、機體免疫功能以及化療不良反應的影響，闡明LNT對采用FOLFIRI化療方案治療結腸癌的積極意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集南京醫(yī)科大學附屬南京醫(yī)院2014年1月～2016年8月腫瘤內科中晚期結腸癌住院患者共68例（符合《中國常見惡性腫瘤診治規(guī)范》病理診斷為Ⅲ、Ⅳ期結腸癌患者）。入組標準：①入組患者均有影像學（CT或MRI）可評估客觀療效的腫瘤病灶，CT檢查病灶≥1 cm；②1個月內未經放療或化療治療的患者；③功能狀況評分（KPS）均≥70分；④預計生存期≥3個月。排除標準：①妊娠或哺乳期女性，過敏體質；②治療期間患者依從性差，臨床資料不完全者；③嚴重慢性胃腸道疾病者，腸梗阻或不完全性腸梗阻者；④藥物或其他物品濫用者；⑤急性心、腦血管疾病者或合并嚴重感染者。入組的患者隨機分為對照組和治療組，各34例。兩組性別、年齡、病情等方面差異均無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），具有可比性，見表1。所有患者均已簽署知情同意。

1.2 藥物及試劑

注射用香菇多糖（南京綠葉思科藥業(yè)有限公司，批號16060308）；鹽酸伊替立康（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號16072615）；亞葉酸鈣注射液（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號16082235）；氟尿嘧啶針（天津金耀氨基酸有限公司，批號1606271）。人IL-17酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）檢測試劑盒（由上海朗頓生物技術有限公司提供，規(guī)格：96T，貨號：BPE10082）；人TGF-β ELISA檢測試劑盒（由上海朗頓生物技術有限公司提供，規(guī)格：96T，貨號：BPE10113）；人IL-6 ELISA檢測試劑盒（由南京森貝伽生物科技有限公司提供，規(guī)格：96T，貨號：SBJ-H0465）；人TNF-α ELISA檢測試劑盒（由南京森貝伽生物科技有限公司提供，規(guī)格：96T，貨號：SBJ-R0040）。

1.3 主要儀器

流式細胞儀（Epics-XL，美國Beckman Couler公司）；酶標儀（SpectraMaxRL，由上海美谷分子儀器有限公司提供）；離心機（H1850R臺式高速冷凍離心機，由湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司提供）；移液槍（由北京大龍興創(chuàng)實驗儀器有限公司提供）；恒溫孵育箱（由上海五相儀器儀表有限公司提供）；立式超低溫保存箱（由青島海爾特種電器有限公司提供）；枸櫞酸鈉抗凝管（由上海運勢佳醫(yī)療器械有限公司提供，規(guī)格：1.5～2.0 mL）。

1.4 方法

兩組患者均采用FOLFIRI化療方案：對照組第1天給予伊立替康180 mg/m2，持續(xù)靜脈滴注2 h；第1、2天給予四氫葉酸鈣400 mg/m2，靜脈滴注2 h；第1天靜脈推注氟尿嘧啶400 mg/m2；第2天給予氟尿嘧啶2400 mg/m2，經化療泵持續(xù)滴注46 h。治療組患者于化療開始前先行靜脈滴注香菇多糖注射液，1次/d，連用5 d。每2周重復，2周為1個療程，3個療程后考查兩組的臨床療效，收集患者外周血樣，抗凝離心吸取血漿后用于檢測。化療期間發(fā)生不良反應填寫不良反應登記表。

1.4.1 患者血漿中TGF-β、IL-17、IL-6、TNF-α水平的檢測 血漿采用ELISA法測定TGF-β、IL-17、IL-6、TNF-α的水平，記錄吸光度值，并計算結果。

1.4.2 免疫功能的檢測 采集空腹靜脈血，枸櫞酸鈉抗凝，送流式細胞儀檢測CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 15.0統(tǒng)計學分析軟件分析檢測結果，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，行t檢驗，計數(shù)資料采用頻率描述，行χ2檢驗，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 香菇多糖對結腸癌患者外周血中TNF-α、TGF-β、IL-17、IL-6水平的影響

化療后，治療組TNF-α、TGF-β、IL-17和IL-6水平均較化療前顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），對照組各因子也同樣出現(xiàn)下降，但僅有TGF-β水平化療前后差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。與對照組化療后比較，治療組TNF-α、TGF-β、IL-17和IL-6水平均顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。見表2。

2.2 香菇多糖對結腸癌患者外周血中T細胞亞群水平的影響

化療后，治療組CD3+、CD4+水平較化療前顯著上升，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），對照組出現(xiàn)一定程度下降，但差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。化療后，治療組外周血中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。見表3。

2.3 香菇多糖對晚期結腸癌患者化療不良反應的影響

治療組在白細胞降低、血紅蛋白降低、惡心嘔吐、腹瀉、便秘等方面的不良反應發(fā)生例數(shù)均少于對照組，治療組總的不良反應發(fā)生率也低于對照組，但是差異均無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。見表4。

3 討論

惡性腫瘤是臨床常見病、多發(fā)病。對于中晚期結腸癌患者的治療，目前仍以化療為主進行治療。對于結腸癌患者而言，絕大部分患者都需要接受化療來控制體內的微小病灶[3]，是治療中晚期結直腸癌的重要手段之一[4]。FOLFIRI方案是中晚期結腸癌常用的一線治療方案。有研究報道[5]，F(xiàn)OLFIRI方案對中晚期結腸癌的治療有效率高達40%以上。但是有效果的同時，F(xiàn)OLFIRI方案也會引起一系列的不良反應，諸如惡心嘔吐、骨髓抑制、遲發(fā)性腹瀉等，部分患者常因不能順利完成療程而影響療效。同時化療的不良反應降低了患者的生存質量，甚至嚴重地影響患者正常的免疫功能[6]。近年來，有研究表明，在腫瘤的治療過程中，殺傷腫瘤細胞和保護機體的免疫狀態(tài)具有同等重要的意義[7]。

LNT是一種能提高免疫功能的生物調節(jié)劑，在我國已被廣泛用于治療胃腸道腫瘤[8]。LNT是一種宿主防衛(wèi)增強劑，它能恢復或加強宿主對淋巴細胞、激素及其他生物活性因子的反應，通過刺激免疫活性細胞的成熟、分化和繁殖，使機體的淋巴細胞大量增加，從而提高機體的免疫功能。LNT還可激活補體系統(tǒng)的經典途徑或變更途徑，增加中性白細胞對腫瘤細胞的浸潤，促使宿主盡快恢復因癌癥及感染而引起的體內平衡失調狀態(tài)[9]。臨床資料表明香菇多糖與化療并用可起到增效作用，可在一定程度上提高癌癥患者臨床療效[10]。以往研究發(fā)現(xiàn)[11]，結腸癌時機體的CD3+、CD4+普遍下降和CD8+上升導致免疫功能下降。本研究發(fā)現(xiàn)LNT作為一種胸腺依賴型T細胞導向免疫佐劑。它通過識別巨噬細胞，釋放T細胞輔助因子，增強巨噬細胞對腫瘤細胞的吞噬率。本研究顯示結腸癌患者在使用LNT后，CD8+百分率下降，CD4+/CD8+比值上升，從而增強患者機體免疫功能，調整化療藥物作用后異常的免疫系統(tǒng)狀態(tài)，對提高化療方案的效率具有積極的臨床意義。

炎癥因子的水平與腫瘤的發(fā)展也密切相關，炎癥因子有多種可以致癌的機制，這包括誘導基因突變、促進血管生成、改變基因狀態(tài)和促進細胞增殖等方面[12]。IL-17通過與受體特異性結合，發(fā)揮促進炎癥發(fā)展、免疫應答等作用，是一種促炎細胞因子[13]，其在機體免疫防御方面起著重要作用。它能誘導IL-6、IL-1β、TNF-α等炎癥因子產生[14]，并激活免疫防御、補體系統(tǒng)。有研究發(fā)現(xiàn)[15]，腸、肺等黏膜表面富集了能產生IL-17的細胞，因此IL-17對黏膜的免疫防御作用尤為明顯。IL-17能將淋巴細胞、DC及其他趨化蛋白靶向至黏膜表面，也能招募單核細胞來殺傷入侵病原體。而在腫瘤環(huán)境下，IL-17雖可通過增強免疫殺傷細胞產生抗腫瘤作用，但它對IL-6的誘導作用會活化Stat3途徑，促進腫瘤血管生長，加重腫瘤病情的進展[16-17]。由于TGF-β在環(huán)境刺激下對IL-17有著強大的促分泌作用，它在免疫防御與腫瘤生長方面也有著顯著的臨床意義。TGF-β對腫瘤的影響有雙向性[18]，一方面在腫瘤早期，它通過信號通路核心組件的缺失或突變對腫瘤組織有抑制作用；另一方面，腫瘤細胞對TGF-β誘導的抑制信號失活會刺激腫瘤血管的生成。TNF-α在體外是誘導腫瘤細胞凋亡的重要因子，但在體內的主要作用并不是殺傷腫瘤，而是作為炎性因子促進腫瘤的發(fā)展[19]。結腸癌患者體內TNF-α水平的高表達，其原因可能是癌癥刺激機體免疫系統(tǒng)，引起患者淋巴細胞產生TNF-α水平升高，這些說明了TNF-α與結腸癌具有高度相關性[20]。IL-6可在早期促進癌變細胞的增殖以及腫瘤細胞的生長，刺激結腸癌細胞的增殖，同時與TNF-α、IL-17共同作用，活化Stat3與核轉錄因子NF-κB的途徑[21]，促進結腸癌細胞的存活，抵抗外界誘導的凋亡。

王夢潔等[22]對30例正常人、59例接受手術治療且無轉移的結直腸癌患者和44例術后轉移患者研究。外周血測定結果顯示：術后轉移患者組IL-17與TGF-β水平顯著高于無轉移和對照組患者，手術無轉移組的患者IL-17水平顯著高于正常人，而TGF-β水平無顯著差異。房慧等[23]將110例接受手術治療的結直腸癌患者按是否發(fā)生轉移分為兩組，另選了健康對照組50例，測定3組外周血中IL-17與TGF-β水平，其中未轉移組術前術后也各測1次。結果與王夢潔等[23]的實驗一致。以上證據表明，在結直腸癌患者外周血中，IL-17表達水平的測定可以作為腫瘤的浸潤及惡性程度指標，而TGF-β可能與轉移趨勢相關。臨床研究顯示，結腸癌患者外周血IL-6的水平顯著高于正常人，并且腫瘤惡性程度與細胞因子水平呈現(xiàn)相關性[24]。本研究中采用FOLFIRI化療方案合用LNT后，可以觀察到LNT降低外周血中IL-17與TGF-β的水平，進而降低結腸癌患者腫瘤細胞的惡性程度以及轉移程度。同時，在LNT的干預下，與腫瘤增殖相關的TNF-α與IL-6水平，在外周血中表達也明顯降低，改善結腸癌患者體內異常的細胞因子水平。在化療同時，由于LNT的干預，白細胞降低、血紅蛋白降低、惡心嘔吐、腹瀉、便秘等不良反應的發(fā)生也在減少。

綜上所述，對中晚期結腸癌患者，尤其是免疫功能低下的人群，應用FOLFIRI化療方案同時給予香菇多糖，可以調節(jié)機體炎癥因子水平，改善免疫功能，減少化療不良反應，提高患者的化療耐受性和生活質量，值得臨床推廣應用，但其改善腫瘤患者的遠期生存的效果尚待進一步研究。

[參考文獻]

[1] 王小紅，余新民，沈祝蘋.香菇多糖聯(lián)合化療對晚期結腸癌患者的臨床療效[J].中國醫(yī)藥導報，2014，11（17）：65-69.

[2] 趙林.香菇多糖聯(lián)合化療對肺癌患者免疫功能影響的研究[J].中國實用醫(yī)藥，2014，9（11）：151-152.

[3] Carrillo JA，Munoz CA. Alternative chemotherapeutic agents：nitrosoureas，cisplatin，irinotecan [J]. Neurosurg Clin N Am，2012，23（2）：297-306.

[4] Xiao J，Tan Y，Li W，et al. Tumor volume reduction rate is superior to RECIST for predicting the pathological response of rectal cancer treated with neoadjuvant chemoradiation：Results from a prospective study [J]. Oncol Lett，2015，9（6）：2680-2686.

[5] Kim DY，Paek TY，Oh SY，et al. Pretreatment selection of regimen according to genetic analysis improves the efficacy of chemotherapy in the first line treatment of metastatic colorectal cancer [J]. J Surg Oncol，2014，109（3）：250-254.

[6] 張明，謝可，安寧.艾迪注射液聯(lián)合FOLFIRI方案治療晚期結直腸癌患者的療效研究[J].四川醫(yī)學，2016，37（9）：957-959.

[7] Ghiringhelli F，Apetoh L. The interplay between the immune system and chemotherapy：emerging methods for optimizing therapy [J]. Expert Rev Clin Immunol，2014，10（1）：19-30.

[8] 翟艷.晚期結腸癌患者應用香菇多糖與化療治療的臨床效果觀察[J].中國實用醫(yī)藥，2015，10（8）：26-27.

[9] 李六文，趙剛.藥用真菌多糖抗腫瘤免疫生物活性研究進展[J].中華腫瘤防治雜志，2015，22（14）：1156-1160.

[10] 龍進，涂文升.香菇多糖注射液在腫瘤治療中的配伍應用[J].中國現(xiàn)代藥物應用，2016，10（8）：270-271.

[11] 黎瑩.高齡結腸癌患者化療后細胞免疫功能的變化[J].中國腫瘤臨床與康復，2012，19（6）：487-489.

[12] 黃寧.炎癥因子與腫瘤[J].中國民族民間醫(yī)藥，2010，19（9）：87-89.

[13] 戴小波，孫萬邦.IL-17免疫調節(jié)作用的研究進展[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2011，86（3）：32-35.

[14] 施沛青，朱書，錢友存.IL-17的信號傳導及功能研究[J].中國細胞生物學學報，2011，33（4）：345-357.

[15] Acosta-Rodriguez EV，Rivino L，Geginat J，et al. Surface phenotype and antigenic specificity of human interleukin 17-producing T helper memory cells [J]. Nat Immunol，2007，8（6）：639-646.

[16] 張曉鵬，王小忠，彭啟全，等.血清IL-17在結直腸癌中的表達及臨床意義[J].中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志，2014，16（4）：36-39.

[17] 王建升，呂元鵬，孟軍濤，等.IL-23和IL-17在結直腸癌患者中的表達及意義[J].中國腫瘤臨床，2014，41（9）：580-584.

[18] 劉賢偉，曹俊達，熊功友，等.TGF-β1、Smad7與樹突狀細胞在結直腸癌肝轉移中作用的初步研究[J].中國普通外科雜志，2015，24（1）：63-69.

[19] 王東輝，李冬梅，馬洪喜.不同類型音樂對結腸癌術后患者血清IL-6、IL-8、TNF-α及T淋巴細胞亞群的影響[J].中國老年學雜志2014，34（9）：2329-2331.

[20] Venetsanou K，Kaldis V，Kouzanidis N，et al. Measurement of tumour necrosis factor receptors for immune response in colon cancer patients [J]. Clin Exp Med，2012，12（4）：225-231.

[21] De Simone V，F(xiàn)ranzè E，Ronchetti G，et al. Th17-type cytokines，IL-6 and TNF-α synergistically activate STAT3 and NF-κB to promote colorectal cancer cell growth [J]. Oncogene，2015，34（27）：3493-503.

[22] 王夢潔，孫蘇平，錢科卿，等.結直腸癌患者血清IL-17和TGF-β濃度及其相關性的初步研究[J].中國腫瘤臨床，2013，40（13）：767-778.

[23] 房慧，郭曉川，白莉，等.IL-17和TGF-β1在結直腸癌中的表達及臨床意義[J].中國臨床研究，2015，28（6）：734-736.

[24] 廖德貴，王珊，周春輝，等.IL-6和TNF-α在結腸癌患者血清中的測定及其意義[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2015，12（32）：12-15.

（收稿日期：2016-11-09 本文編輯：張瑜杰）