成都漢族人群血脂異常與候選基因多態性關聯研究

張雪萍，郝 芳，譚英彩，林 嬰，

(1.西南醫科大學，四川 瀘州 646000；2.四川省醫學科學院·四川省人民醫院檢驗科，四川 成都 610072)

成都漢族人群血脂異常與候選基因多態性關聯研究

張雪萍1，郝 芳2，譚英彩1，林 嬰1，2

(1.西南醫科大學，四川 瀘州 646000；2.四川省醫學科學院·四川省人民醫院檢驗科，四川 成都 610072)

目的 探討與血脂相關候選基因(APOC1，CELSR2，BUD13)多態性與漢族成都地區人群血脂亞組分異常的相關性。方法 將成都地區1900例受試者按TC、TG、LDL-C和HDL-C分為正常組和異常組；采用單堿基延伸測序法分別對rs17035630(CELSR2 基因)，rs4420638(APOC1基因)，rs11556024(BUD13基因)進行基因分型。結果 rs17035630(A/G)等位基因分布在LDL-C兩組間差異有統計學意義(χ2=6.568，P= 0.010)；多因素Logistic回歸分析顯示，rs17035630 A等位基因攜帶者對增高LDL-C的風險是G等位基因的1.396倍(OR=1.396，95%CI：1.145～1.697，P= 0.001)。結論 CELSR2 基因多態性與血脂亞組份LDL-C異常有關。

血脂異常；單核苷酸多態性；心血管疾?。贿z傳學

中國人群心血管疾病發病率增長迅速，是導致死亡的首要原因，血脂異常是心血管疾病的重要獨立危險因素[1]。除了年齡、高血壓、吸煙、飲食習慣等[2，3]流行病學影響因素外，一些雙生子和家系研究顯示空腹血脂的遺傳效力為0.42～0.81[4～6]，表明血脂水平具有遺傳易感性。近期的一些全基因組關聯研究(genome-wide association studies，GWAS)和人類遺傳學研究發現，CELSR2、APOC1、BUD13等基因與血脂顯著關聯[7～9]。不同種族人群的重復性驗證提示這些基因/位點與血脂水平的關聯程度不一致，仍需要在中國人群得到驗證。我們篩選rs17035630(CELSR2基因)、rs4420638(APOC1基因)以及rs11556024(BUD13基因)3個單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位點，探討成都地區漢族人群空腹血脂水平與這些多態位點之間的相關性。

1 對象與方法

1.1 研究對象 2014年在成都地區隨機選擇1900例漢族人群作為受試者，其中男746例，女1154例。收集受試者身高、體重、血糖、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)數據。指標異常標準：TC>5.18 mmol/L為異常，TG>1.70 mmol/L為異常，LDL-C>3.37 mmol/L為異常，HDL-C<1.04 mmol/L為異常[10]。本研究經四川省醫學科學院·四川省人民醫院倫理委員會批準，所有調查取樣均經受試者同意并簽署知情同意書。

1.2 標本采集和基因組DNA的提取 禁食12小時后于清晨采集外周血，2小時內分離血漿，血糖、TC、TG、LDL-C、HDL-C均使用Hitachi 717(Hitachi Instruments Inc.，Tokyo，Japan)測定。抽取受試者外周血5 ml，使用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K)抗凝，常規酚氯仿抽提法提取基因組DNA，紫外分光光度計和0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA濃度和純度后于-20 ℃保存備用。

1.3 聚合酶鏈反應(PCR)和基因型的確定 從基因組數據庫網站(http//www.ncbi.com)檢索SNP序列，由上海生工生物工程有限公司合成引物，引物序列見表1。擴增反應采用VeritiTMDx 96 Well Thermal Cycler 擴增儀(美國Applied Biosystems公司)。利用單堿基引物延伸法、ABI 3130遺傳分析儀、GeneMapper軟件測定基因型。隨機抽取10%的樣本進行PCR產物測序，結果與單堿基延伸法一致率達100%。

表1 引物序列

1.4 統計學方法 采用SPSS 13.0統計軟件包進行數據處理。計量資料符合正態分布的以均數±標準差表示，組間比較采用t檢驗，偏態分布的連續變量以中位數(四分位間距數)表示，采用秩和檢驗；計數資料以率表示，組間比較采用卡方檢驗；脂質代謝紊亂及血脂相關組分的影響因素采用多元Logistic回歸分析。檢驗水準α=0.05。群體基因型頻率經Hardy-Weinberg平衡檢驗，檢驗水準α=0.01，P> 0.01為符合Hardy-Weinberg遺傳平衡。

2 結果

2.1 臨床資料 1900位受試者中TC、TG、LDL-C、HDL-C正常組與異常組的年齡、體重指數(BMI)、血糖以及性別比較，差異均有統計學意義(P< 0.05)，見表2。

表2 研究對象臨床特征

*與異常組比較，P< 0.05

2.2 SNP位點等位基因的頻率分布 rs17035630、rs4420638和rs11556024位點檢測符合Hardy-Weinberg平衡定律(P> 0.01)；僅rs17035630位點LDL-C差異有統計學意義(P< 0.05)，見表3。

表3 各SNP位點血脂亞組份組間差異統計結果

PHWE：Hardy-Weinberg遺傳平衡的P值；MAF：最小等位基因頻率

2.3 Lgistic回歸分析結果 以LDL-C正常與否為因變量，以SNPs位點、性別、年齡、BMI和血糖對數為協變量，對rs17035630位點進行Logistic回歸分析發現，rs17035630 A等位基因是G等位基因攜帶者使LDL-C增高風險的1.396倍(OR=1.396，95%CI：1.145～1.697，P= 0.001)。

3 討論

近年來心血管疾病發病率和死亡率已居首位，血脂異常被認為是導致心血管疾病發病的最重要的危險因素之一，其形成的原因包括環境和遺傳兩方面的因素。近期的一些GWAS和人類遺傳學研究發現，位于CELSR2、APOC1、BUD13基因多態性位點與血脂有顯著的關聯。但不同種族人群的重復性研究發現關聯程度不一致。

CELSR2基因位于1p13.3，與PSRC1和SORT1基因構成一個基因簇，與血脂水平關系密切[11]。其中SORT1基因直接參與血脂代謝的調節[12]，CELSR2基因則通過編碼一種鈣黏素促進新陳代謝和動脈粥樣硬化的調節[13]。rs646776和rs17035630位于該基因簇且位置緊鄰，具有連鎖不平衡。研究顯示，rs646776作為保護因子與血脂特別是LDL-C濃度有相關性，Walia等[14]研究3342例印度人群發現rs646776的C等位基因能降低循環血液中的TC(P= 0.0003)及LDL-C(P= 0.0003)水平，Arvind等[11]對2058例居住在非洲印度人的研究中發現rs646776的C等位基因也能降低循環血液中的TC(P= 0.007)及LDL-C(P= 0.006)水平。根據rs646776和rs17035630的連鎖不平衡本研究擬將rs17035630作為候選位點。結果發現，rs17035630 A等位基因和G等位基因在LDL-C濃度增高組和正常對照組中差異有統計學意義，采用Logistic回歸分析進行風險評估發現rs17035630 A等位基因是G等位基因攜帶者LDL-C增高風險的1.396倍。

rs4420638位于19q13.2的APOE-APOC1-APO-C2基因簇。APOC1基因編碼的ApoC1蛋白缺陷導致卵磷脂膽固醇脂酰轉移酶(LCAT)的活性改變[15]，APOC2編碼的apoC2蛋白則作為脂蛋白脂肪酶(LPL)的催化劑[16]，APOE基因發生缺陷使血液清除乳糜微粒、VLDL-C和LDL-C的功能發生障礙，從而導致血清膽固醇、甘油三酯增高[17]。由此可見APOE-APOC1-APOC2基因簇與血脂關系非常密切。Huang等[8]研究1508例中國人群，發現rs4420638位點的多態性與LDL-C水平密切相關，增加了中國人患心血管疾病風險。本研究發現rs4420638 A等位基因和G等位基因與各血脂成分異常差異無統計學意義。本研究的對象為1900例成都地區漢族人群，研究人群地域和樣本數量的差異可能是導致本研究與Huang等[8]研究結果不一致的原因。

GWAS研究發現位于染色體11q23.3上的基因簇與TC關系密切，其中BUD13基因多態性與TC的關聯性已經被證實[9]。曾煥玉等[18]研究發現rs11556024基因型在漢族人群的血脂中有差異。但本研究并未發現rs11556024等位基因與成都地區漢族人群血脂亞組份異常有差異。

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林 嬰

R446.11+2

A

1672-6170(2017)01-0089-04

2016-01-09；

2016-06-24)