精子DNA碎片率與體外受精實驗室結局的關系

【摘要】 目的 探討精子DNA碎片率與體外受精（IVF）實驗室結局的關系。方法 對IVF治療的男性患者開展常規(guī)精液檢查、精子DNA碎片率檢查以及精子核蛋白不成熟度檢查。分析精子DNA碎片率與IVF優(yōu)胚率的關系。結果 精子DNA碎片率與男性年齡呈正相關（r=0.184， P=0.019<0.05）， 與前向運動精子百分率呈負相關（r=-0.219， P=0.008<0.05）， 與優(yōu)胚率呈負相關（r=-0.220， P=0.008<0.05）， 與精子濃度、正常精子百分率、IVF受精率無明顯相關性（P>0.05）。精子核蛋白不成熟度與精子濃度呈負相關（r=-0.327， P=0.001<0.05）， 與正常精子百分率呈負相關（r=-0.226， P=0.008<0.05）， 與男性年齡、前向運動精子百分率、優(yōu)胚率、IVF受精率無明顯相關性（P>0.05）。結論 開展精子DNA碎片率檢測， 可對IVF優(yōu)胚率起到一定的預測作用。

【關鍵詞】 體外受精；精子DNA碎片率；優(yōu)胚率

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.12.040

精子DNA碎片率可對機體遺傳物質DNA所受的損傷進行有效反映， 對精子DNA碎片率開展檢測， 可對精子的功能狀況進行有效預測[1-5]。本次研究就通過對開展IVF治療的男性患者開展常規(guī)精液檢查、精子DNA碎片率檢查以及精子核蛋白不成熟度檢查， 探討精子DNA碎片率與體外受精實驗室結局的關系。報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2016年1～3月本院收治的患有不育癥， 開展體外受精-胚胎移植（IVF-ET）治療的患者， 共112對。男112例， 年齡23～41歲， 平均年齡（31.5±5.1）歲；女112例， 年齡20～40歲， 平均年齡（29.6±3.8）歲。對少弱精子癥較為嚴重的患者， 或獲卵數<5個進行排除。

1. 2 研究方法 首先對男性患者的精液進行采集以及處理。按照WHO實驗室手冊上的相關內容進行操作。采集精液前禁欲2～7 d， 采集方法為手淫法， 采集后置于恒溫板， 溫度控制37℃， 于1 h內開展檢測。采用計算機對精子濃度， 以及前向運動百分率進行分析， 采用Diff-Quik然后對精子的形態(tài)學開展分析。采用染色質擴散法對精子DNA碎片開展檢測， 于預制載玻片上涂抹含精瓊脂糖精液， 通過變性、去核蛋白、脫水、染色后， 借助顯微鏡對精子進行觀察。如精子存在大、中暈環(huán)， 則為正常精子， 其余為碎片異常精子。以碎片精子數與計數總數（500個）之比為精子DNA碎片率[6]。精子核蛋白不成熟度采用苯胺藍染色法進行檢測， 檢測試劑購自山東德惠生物技術有限責任公司， 檢測方法參照試劑盒說明書進行。按照常規(guī)方法， 為患者開展降調節(jié)， 同時開展促排卵， 于卵口取IVF常規(guī)法授精， 授精完成16～18 h， 對受精情況進行觀察。第3天對胚胎發(fā)育情況進行觀察。如胚胎的評分為6Ⅰ、6Ⅱ、7Ⅰ、7Ⅱ、8Ⅰ、8Ⅱ， 則為優(yōu)質胚胎。

1. 3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析。相關性采用Spearman相關分析， 雙測檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2. 1 影響精子DNA碎片率的相關因素 精子DNA碎片率與男性年齡呈正相關（r=0.184， P=0.019<0.05）， 與前向運動精子百分率呈負相關（r=-0.219， P=0.008<0.05）， 與優(yōu)胚率呈負相關（r=-0.220， P=0.008<0.05）， 與精子濃度、正常精子百分率、IVF受精率無明顯相關性（P>0.05）。見表1。

2. 2 影響精子核蛋白不成熟度的相關因素 精子核蛋白不成熟度與精子濃度呈負相關（r=-0.327， P=0.001<0.05）， 與正常精子百分率呈負相關（r=-0.226， P=0.008<0.05）， 與男性年齡、前向運動精子百分率、優(yōu)胚率、IVF受精率無明顯相關性（P>0.05）。見表2。

3 討論

目前臨床上對精子DNA損傷的檢測手段主要包括兩種， 一種是直接法， 另一種是間接法。直接法是通過將探針直接結合入精子DNA發(fā)生損傷的部位， 對DNA的斷裂進行直接檢測[7]。間接法是通過對碎片化DNA易于變性的特點進行利用， 對碎片化DNA的變性易感性進行檢測[8]。精子染色質結構分析（SCSA）法的檢測基礎為流式細胞技術， 可測定樣本量大， 測定結果穩(wěn)定性強， 更為可靠。但該檢測方法成本高， 花費昂貴， 普及度不高。因此本次研究采用的是精子染色質擴散試驗（SCD）法， 該方法檢測結果同SCSA相關性良好， 且花費低， 耗時短[9-11]。

本次研究結果顯示， 精子DNA碎片率與男性年齡呈正相關（r=0.184， P=0.019<0.05）， 與前向運動精子百分率呈負相關（r=-0.219， P=0.008<0.05）， 與優(yōu)胚率呈負相關（r=-0.220， P=0.008<0.05）， 與精子濃度、正常精子百分率、IVF受精率無明顯相關性（P>0.05）。與相關的研究結果相符[2]。有學者通過設置生育對照組， 并未發(fā)現精子DNA碎片率與年齡呈相關性， 提示年齡對于精子DNA碎片率所起的并非主要作用[3]。同時本次研究結果顯示， 精子核蛋白不成熟度與精子濃度呈負相關（r=-0.327， P=0.001<0.05）， 與正常精子百分率呈負相關（r=-0.226， P=0.008<0.05）， 與男性年齡、前向運動精子百分率、優(yōu)胚率、IVF受精率無明顯相關性（P>0.05）。和前人的研究結果相符[12-14]。

綜上所述， 開展精子DNA碎片率檢測， 可對IVF優(yōu)胚率起到一定的預測作用。

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[收稿日期：2017-02-09]