補中益氣湯對脾虛慢傳輸型便秘小鼠結腸組織血管活性腸肽的影響

徐嘉淦石偉葉影石佳高祥福龍惠珍

補中益氣湯對脾虛慢傳輸型便秘小鼠結腸組織血管活性腸肽的影響

徐嘉淦1石偉1葉影1石佳1高祥福2龍惠珍2

目的觀察補中益氣湯對脾虛慢傳輸型便秘（STC）小鼠結腸組織血管活性腸肽（VIP）的影響，探對其治療脾虛慢傳輸便秘的作用機制。方法32只雄性昆明小鼠隨機分為正常組（8只）和造模組（24只），造模組采用番瀉葉+限制飲水+控制飲食的方法復制小鼠脾虛STC模型，模型復制成功后，將造模組小鼠隨機分為模型組、中藥組（補中益氣湯）和西藥組（莫沙必利），各組灌胃對應的藥物，1天1次，共7天，末次給藥后檢測各組小鼠糞便含水率、腸道推進率及結腸組織VIP含量。結果中藥組小鼠糞便含水率（55.55±10.90）%，腸道推進率（69.84±9.67）%，分別高于模型組的（45.50±13.04）%和（50.44±14.45）%（P均<0.05），中藥組小鼠結腸組織VIP水平（156.73±11.41）ng/L，低于模型組的（245.12±12.43）ng/L（P<0.05）。西藥組小鼠糞便含水率、腸道推進率分別為（52.83± 12.43）%，（65.15±13.56）%，與中藥組比較差異無統計學意義（P>0.05），西藥組小鼠結腸組織VIP水平（120.91±17.65）ng/L較中藥組降低，差異有統計學意義（P<0.05）。結論補中益氣湯能提高小鼠糞便含水率及腸道推動率，改善脾虛慢傳輸型便秘癥狀，其作用機制可能與降低結腸組織VIP水平有關。

小鼠；慢傳輸型便秘；補中益氣湯；脾虛；血管活性腸肽

結腸慢傳輸型便秘（slow transit constipation，STC）是指因胃腸道動力減弱，腸內容物傳輸減慢而導致的便秘[1]。臨床主要表現為排便困難，大便次數減少，便意減弱甚至消失。流行病學研究顯示，STC約占功能性便秘的45.5%[2]，隨著生活水平的提高，這一比例正逐年上升。便秘嚴重影響患者的生活質量，甚至會引發心腦血管意外，危及生命。本實驗通過觀察補中益氣湯對STC模型小鼠腸道傳輸功能及血管活性腸肽（VIP）的影響，初步探討補中益氣湯治療STC可能作用機制，為臨床應用提供科學依據。

1 實驗材料

1.1 實驗動物SPF級雄性昆明小鼠32只，體質量（20±2）g，由浙江中醫藥大學動物實驗中心代購并飼養于該中心，實驗動物合格證：SYXK（浙）2008-0115。各組小鼠常規適應性飼養7天。

1.2 藥物與試劑補中益氣湯（黃芪18g，黨參15g，生白術、炙甘草各9g，升麻、柴胡、陳皮各6g，當歸3g，由浙江省中醫院中藥房提供），制備成濃度為0.225g/mL的水煎液備用。枸櫞酸莫沙必利片：江蘇豪森藥業股份有限公司，5mg/片，國藥準字：19990315，配置成濃度為0.095mg/mL的混懸液。番瀉葉煎液：取番瀉葉500g（由浙江省中醫院中藥房提供）加入5L沸水中浸泡10min后，過濾，取濾液，使用旋轉蒸發皿將其濃縮成1g/mL的溶液，裝入瓶內，備用。活性碳灌胃液：取阿拉伯樹膠100g（天津市登科化學試劑有限公司），加入800mL水，煮沸直至溶液透明后，加入粉狀活性炭50g（天津市北辰方正試劑廠）,再煮沸3次，待溶液冷卻后加水定容到1000mL，備用；血管活性腸肽（VIP）試劑盒：上海信裕生物科技有限公司提供，產品貨號xy-E12161。

1.3 儀器電子精密天平：北京賽多利斯天平有限公司；酶標儀：芬蘭（Labsystems Multiskan MS）公司。

2 實驗方法

2.1 分組與模型制備將32只雄性昆明小鼠按照完全隨機設計原則分成正常組、模型組、西藥組、中藥組四組，每組8只，除正常組外余三組根據文獻[3-4]的方法，采用番瀉葉+限制飲水+控制飲食的方法復制小鼠脾虛STC模型。具體方法：造模第1～7天，按20g/（kg·d）灌胃番瀉葉水煎液（1g/mL），同時自由飲水進食，造成脾虛模型，模型成功標志：小鼠活動減少，反應較慢，四肢乏力，消瘦拱背，被毛枯槁。第8天開始停止灌胃番瀉葉水煎液，隔天喂食滅菌生大米4～8g，隔天飲水1次，每次飲水30min，共15天。

2.2 藥物干預造模完成后，除正常組外，余三組仍以隔天喂食滅菌生大米4～8g，隔天飲水1次，每次飲水30min。同時根據小鼠體表面積換算成人等效劑量的方法[5]，中藥組每天灌胃補中益氣湯煎液9g/kg，西藥組每天灌胃莫沙必利混懸液1.9mg/kg，正常組和模型組每天各灌胃生理鹽水0.2mL/10g。各組每天給藥1次，連續灌胃7天。

2.3 指標檢測

2.3.1 糞便含水率末次給藥結束后，收集各組小鼠糞便各12顆，托盤電子分析天平稱重，記為濕重，然后置于80℃電熱恒溫培養箱中24h后再稱重，記為干重。糞便含水率=（濕重-干重）/濕重×100%。

2.3.2 腸道推進率末次給藥前，各組小鼠禁食不禁水14h，給藥后，按0.2mL/20g的劑量灌胃活性炭灌胃液，立刻計時，30min后，用頸椎脫臼法處死小鼠，迅速打開腹腔，仔細分離小鼠腸系膜，剪取上自幽門、下至回盲部的小腸管，置于托盤上，測量小腸總長度以及活性炭推動的距離，計算小腸推動率。小腸推動率=活性炭推動的距離/小腸總長度×100%

2.3.3 結腸VIP水平測量小鼠小腸長度及炭末推進的距離后，迅速切取結腸中段腸管3cm，稱重，用預冷的生理鹽水進行清洗，沖去腸道內容物，然后使用玻璃勻漿器，采用手工勻漿的方式制作組織勻漿，然后用離心機以2000r/min的轉速離心15min后，取上清凍存于-80℃，留以待測。應用酶聯免疫吸附試驗（Elisa）的方法檢測VIP水平。

2.4 統計學方法應用SPSS20.0軟件進行統計分析，使用均數±標準差表示定量資料，使用t檢驗進行兩樣本間均數的比較；采用單因素方差分析（One-Way ANOVA）進行多樣本均數比較，當方差齊時用LSD法，不齊時選用Dunnett's T3檢驗。P＜0.05時差異有統計學意義。

3 實驗結果

3.1 補中益氣湯對小鼠糞便含水率的影響與正常組相比，模型組小鼠糞便含水率下降，差異有統計學意義（P<0.05）；與模型組比較，中藥組糞便含水率升高，差異有統計學意義（P<0.05），西藥組雖也有所升高，但差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

3.2 補中益氣湯對小鼠腸道推進率的影響與正常組比較，模型組小鼠腸道推動率下降，差異有統計學意義（P<0.05）；與模型組比較，各藥物干預組腸道推動率有上升，且差異有統計學意義（P<0.05）；中藥組較西藥組腸推動率有所升高，但差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

表1 各組小鼠糞便含水率及腸道推進率比較

表1 各組小鼠糞便含水率及腸道推進率比較

注：與正常組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05

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3.3 補中益氣湯對小鼠結腸組織VIP水平的影響

與正常組比較，模型組小鼠結腸VIP濃度升高，差異有統計學意義（P<0.05）；與模型組比較，各藥物干預組小鼠結腸VIP濃度均有降低，差異有統計學意義（P<0.05）；西藥組較中藥組VIP濃度下降明顯，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

表2 各組小鼠結腸VIP含量

表2 各組小鼠結腸VIP含量

注：與正常組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與中藥組比較，#P<0.05；VIP：血管活性腸肽

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4 討論

STC為臨床常見病，其病情頑固，治療困難，目前病因尚不明確，臨床上并無針對STC的特效藥，現多采用瀉劑或促動力藥對癥處理，療效欠佳，且副作用多。

STC屬中醫“便秘”范疇，基本病機為熱結、寒凝、氣滯、氣血陰陽虧虛等，導致大腸傳導失司發為便秘[6]。臨床上，STC多表現為排便困難、便意減弱或消失，且常常伴有納差乏力、神疲氣短等癥狀，與中醫脾氣虛關系密切。趙蕾等[7]研究發現慢性功能性便秘人群中，以氣虛型（70.6%）最多見，顯示脾氣虛在慢性便秘發病中起著重要的作用。

補中益氣湯出自李東垣《內外傷辨惑論·卷中·飲食勞倦論》，原方由黃芪、人參、白術、升麻、柴胡、陳皮、當歸、炙甘草等八味中藥構成，為補氣升陽，甘溫除熱的代表方。補中益氣湯具有雙向調節作用，能促進或抑制腸道蠕動，恢復腸道功能[8]。何云貴[9]運用補中益氣湯治療慢性便秘150例，結果顯示治療組總有效率為96.6%，療效明顯優于莫沙必利組（68%）。另有學者[10]認為，補中益氣湯具有補氣通便之效，運用補中益氣湯治療結腸慢傳輸型便秘，并與西藥組（西沙比利）進行比較，顯示中藥組有效率高于西藥組，差異有統計學意義（P<0.05）。

血管活性腸肽（VIP）是腸神經系統中主要的抑制性遞質之一，能夠調節腸道平滑肌的舒張，促進胃腸道腺體分泌，抑制腸道蠕動。動物實驗研究[11]發現，慢性便秘模型組大鼠結腸組織VIP表達高于正常組，差異有統計學意義（P<0.05），提示VIP的分布異常可能與慢性便秘發病有關。

本研究顯示，補中益氣湯能夠提高STC模型小鼠糞便含水率及腸道推動率，從而改善便秘癥狀，同時降低腸抑制遞質VIP的水平。補中益氣湯改善脾虛型慢傳輸便秘的癥狀的作用機制可能與降低結腸VIP水平有關。

［1］Frattini JC，Nogueras JJ.Slow transit constipation:a review of a colonic functional disorder［J］.Clin Colon Rectal Surg，2008，21：146-152.

［2］楊向東，賀百林，賈英田.慢傳輸型便秘機理的研究近況［J］.結直腸肛門外科，2011，17（04）：264-267.

［3］鄒穎，鄭學寶，戴世學，等.小鼠脾虛便秘模型的建立［J］.北京中醫藥，2009，28（01）：60-62.

［4］夏旭婷，樊俊陽，王碧玉，等.脾虛證慢傳輸型便秘小鼠模型構建方法的比較研究［J］.湖南中醫藥大學學報，2014，34（12）：4-7+81.

［5］趙偉，孫國志.不同種實驗動物間用藥量換算［J］.畜牧獸醫科技信息，2010，05：52-53.

［6］吳勉華，王新月.中醫內科學［M］.北京：中國中醫藥出版社，2012：237.

［7］趙蕾，廖秀軍，楊關根，等.慢性功能性便秘基本證型分布特點及相關因素分析［J］.中國中西醫結合雜志，2014，34（10）：1173-1177.

［8］李巖，吳春明，李雪，孫寧.補中益氣湯對小鼠胃腸運動雙向調節作用和抗炎作用的研究［J］.醫藥論壇雜志，2011，32（22）：18-19+22.

［9］何云貴.補中益氣湯化裁方治療習慣性便秘150例［J］.光明中醫，2010，25（06）：975-976.

［10］宋衛國.補中益氣湯加減治療結腸慢傳輸型便秘的臨床觀察［J］.實用中西醫結合臨床，2010，10（05）：56-57..

［11］杜麗娟，唐學貴，吳至久，李敏.VIP在慢性便秘大鼠結腸肌間神經叢中的表達和意義［J］.醫學理論與實踐，2011，24（15）：1755-1756.

（收稿：2016-08-16修回：2016-10-09）

Effects of Buzhongyiqi Decoction on Vasoactive Intestinal Peptide in Colonic Tissue in Slow Transit Con－stipation Mice with Spleen Deficiency

XU Jiagan1,SHI Wei1,YE Ying1,SHI Jia1,GAO Xiangfu2,LONG Huizhen21 The First Clinical Medical College,Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou(310053),China;2 Department of Internal Chinese Medicine,the First Hospital Affiliated to Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou(310000),China

ObjectiveTo investigate the effects of buzhongyiqi decoction on vasoactive intestinal peptide（VIP）in slow transit constipation（STC）mice with spleen deficiency,in an attempt to explore the underlying mechanism.MethodsThirty-two male Kunming mice were randomly divided into normal group（n=8）and model group（n= 24）.The model group was copied to STC model with spleen deficiency by folium sennae+limited water+control diet. Then,the model group were randomly divided into model control group,Chinese herb group（buzhongyiqi decoction）and western medicine group（mosapride）.Each group was treated one time a day by gavage with its corresponding drug,the course lasted for 7d.After the last treatment,the moisture content of feces,intestinal propulsion rates and the content of VIP in colonic tissue were detected.ResultsMoisture content of feces and intestinal propulsion rate in Chinese herb group were（55.5±10.90）%and（69.84±9.67）%,respectively,which were higher than those in model control group[（45.50±13.04）%and（50.44±14.45）%,P<0.05].VIP level of Chinese herb group was lower than that of model control group[（156.73±11.41）ng/L vs（245.12±12.43）ng/L,P<0.05].The moisture content of feces and Intestinal propulsion rate in western medicine group were（52.83±12.43）%and（65.15±13.56）%; no significant difference was found between Chinese herb group and western medicine group（P>0.05）.The VIP level of western medicine group[（120.91±17.65）ng/L]was significantly lower than that of Chinese herb group（P< 0.05）.ConclusionBuzhongyiqi decoction can increase the moisture content of feces and intestinal propulsion rate and improve symptoms of STC with spleen deficiency.The underlying mechanism might be related to the decreaseof VIP in colonic tissue.

mice;slow transit constipation;buzhongyiqi decoction;spleen deficiency;vasoactive intestinal peptide

浙江省大學生科技創新活動計劃（新苗人才計劃）項目（No.2015R410027）

1浙江中醫藥大學第一臨床醫學院（杭州310053）；2浙江中醫藥大學附屬第一醫院中醫內科（杭州310000）

徐嘉淦，Tel：15700067082；E-mail：574800732@qq.com