屏障環境《實驗動物機構質量和能力的通用要求(GB/T27416-2014)》的踐行與探索

趙 勇， 陳國強， 張 璐， 朱敏娟， 崔淑芳， 江文正

(1.上海實驗動物研究中心，上海 201203; 2.第二軍醫大學 實驗動物研究中心，上海 200433；3.華東師范大學 生命科學學院，上海 200241)

屏障環境《實驗動物機構質量和能力的通用要求(GB/T27416-2014)》的踐行與探索

趙 勇1， 陳國強1， 張 璐2， 朱敏娟1， 崔淑芳2， 江文正3

(1.上海實驗動物研究中心，上海 201203; 2.第二軍醫大學 實驗動物研究中心，上海 200433；3.華東師范大學 生命科學學院，上海 200241)

《實驗動物機構質量和能力的通用要求》(GB/T27416-2014)國家標準發布以來，上海市越來越多的實驗動物設施參照該標準完善管理，實驗動物設施管理水平得到了提高。現從我國現行實驗動物相關法規、國家標準出發，通過2015年度對上海市140個實驗動物屏障設施的年檢情況匯總以及對30%以上的屏障設施單位實地監督抽查，梳理了目前上海市轄區內實驗動物屏障環境設施該標準執行的基本情況，總結了各類實驗動物屏障設施在實施《實驗動物機構質量和能力的通用要求》(GB/T27416-2014)管理過程中固化下來的主要管理經驗和做法，探討實驗動物屏障環境的規范化管理。

國家標準； 屏障環境； 實驗動物機構； 管理經驗

0 引 言

實驗動物機構是科學研究的基礎平臺，實驗動物屏障設施的管理質量關系到工作人員健康、環境安全、實驗動物福利與健康、動物實驗結果等重大科學問題和社會倫理問題[1]。隨著基因工程技術和精準醫學生物技術的迅猛發展，實驗動物屏障設施內部開展的動物實驗也呈現出多樣化。實驗動物模型的制造與使用，使動物實驗周期顯著延長；廣泛應用的免疫缺陷動物容易受到各種病原微生物感染卻不能正常產生免疫應答反應，以及各類疾病模型動物生物學屬性的差異，對實驗動物設施環境質量控制和整個實驗過程的動態管理都提出了更高的要求。通過制定和實施實驗動物屏障設施運行管理標準操作規程，實現規范化管理、提高管理水平[2]，國家推薦標準《實驗動物機構質量和能力的通用要求(GB/T27416-2014)》涵蓋了實驗動物機構、質量和能力等各要素，適應國際實驗動物使用和管理的發展趨勢，成為現階段推動我國實驗動物產業建設與發展的重要技術文件。自2014年9月《實驗動物機構質量和能力的通用要求(GB/T27416-2014)》發布以來，上海市實驗動物設施在實踐中不斷積累經驗，屏障設施的整體管理水平逐步提升。現依據我國現行實驗動物管理法規、國家標準，對上海市140家不同實驗動物屏障設施的管理方法進行研究、總結，探討建立了一套符合現階段實驗動物屏障設施水平的基礎管理制度。

基于善待實驗動物的理念和為了獲得準確的動物實驗數據，各個國家對動物實驗的管理都非常重視：歐盟理事會于1986年頒布了《關于保護用于實驗和其他科學目的的動物的各成員國法律、條例和行政規定》的第86-609-EEC號指令；1996年，由美國國家研究委員會公布了AAALAC International 認證，堅持實驗動物設施應科學、人道地護理和使用動物的承諾。日本，1980年針對實驗動物頒布了總理府告示第6號《實驗動物飼養管理標準》以及總學庶第1513號《關于策劃制定動物實驗指導方針》；我國自1988年國務院批準發布《實驗動物管理條例》以來，國家科學技術委員會與國家技術監督局于1999年聯合發布了《實驗動物質量管理辦法》；2001年，國家科技部、衛生部等七部局聯合發布了《實驗動物許可證管理辦法(試行)》，使實驗動物管理正式納入國家行政許可管理體系。隨著實驗動物科學發展，各國都持續完善實驗動物相關法律和技術標準[3-4]。

獲得準確的動物實驗數據，必須依靠標準化的實驗動物、科學嚴謹的動物實驗過程、適合實驗動物的生存和實驗環境。實驗動物設施管理的核心包括人、設施和實驗動物三個要素，本文從這3個方面總結了近年來上海市不同實驗動物屏障設施建立的管理制度體系，遴選出在實踐工作中得到良好執行的管理策略框架和管理思路，形成了管理制度體系的基本目錄。

1 管理組織與人員

實驗動物設施內部工作人員包括：設施管理者、動物實驗人員、動物飼育人員、設施維保人員、環境檢測人員、檢查人員及來訪者等。

1.1 實驗動物管理委員會

歐美等國以實驗動物福利、倫理工作為出發點，實現實驗動物、從業人員、設施環境、以及操作規程等全面的管理。2006年，科技部根據我國實驗動物單位實際情況發布了《關于善待實驗動物的指導性意見》，成為我國第一個關于實驗動物福利的政府指導性文件，“意見”指出“實驗動物生產單位及使用單位應設立實驗動物管理委員會(或實驗動物道德委員會、實驗動物倫理委員會等)”，為完善實驗動物設施管理和實驗動物學術國際交流奠定了基礎。

規范管理應首先完善管理組織建設。上海市發揮行政審批和年檢、抽查過程中核查實驗動物設施管理委員會的組織變動情況以及相關活動記錄等方式，推動各單位完善實驗動物管理委員會的組織機構建設，發揮職能，逐步實現了以實驗動物設施管理委員會作為設施運行主導組織的管理模式。上海市現有169個實驗動物行政許可設施已全部建立了實驗動物管理委員會或倫理、福利委員會，實現了在實驗動物管理委員會領導下對設施進行全面管理的運行模式，取得了良好的效果。

實驗動物管理委員會的主要職能主要有以下6個方面：①保證本單位實驗動物設施、環境符合善待實驗動物的要求，決策設施建設、規劃與升級、改造；②制定設施內部人才培養計劃，保證各類技術人員配備合理，使實驗動物從業人員得到必要的培訓和學習；③審核動物實驗方案，確保實驗設計合理；④制定實驗動物設施運行規章制度體系，監控運行效果，并對其進行持續修訂、完善；⑤對實驗動物的使用方案進行倫理、福利審查，協調本單位實驗動物的應用，盡可能合理地使用動物以減少實驗動物的使用數量[5]；⑥確保設施安全運行，制定并實施實驗動物設施應急預案。

實驗動物管理委員會的管理文件分為2類:

(1) 組織管理類。實驗動物管理委員會委員組成、任命書;實驗動物管理委員會的工作依據和職責;實驗動物管理委員會設施檢查指導原則;實驗動物管理委員會檢查內容清單。

(2) 職能類。設施運行年(季)度內部評審制度;設施年度改造、整修計劃會議制度;設施管理制度與操作規程修訂制度;實驗動物管理和使用方案評審制度;實驗動物管理委員會定期檢查制度;實驗動物管理委員會保密制度;實驗動物管理委員會記錄的保存制度;實驗動物不當飼養與使用的舉報和投訴政策;違反動物福利行為的處罰管理辦法;工作人員繼續教育職業規劃政策;實驗動物設施運行應急預案實施細則。

1.2 人員管理

實驗動物工作單位應當根據需要配備科技人員和經過專業培訓的飼育人員。各類人員都要遵守實驗動物飼育管理的各項制度，熟悉、掌握操作規程[6]。

應該針對進入屏障環境的各類人員制定相應的進入條件以及進入設施后的活動權限。上海市實驗動物工作人員的培訓主要涵蓋了6類基本內容：①國家、國際相關政策、法規教育和實驗動物倫理、福利、善待實驗動物等人文思想教育。②實驗動物生物學特性與飼育技能培訓。各類實驗動物設施，根據設施許可范圍以及動物實驗內容，對飼育人員和從事動物實驗的技術人員開展的針對性實驗動物生物學特性教學。③根據設施各階段開展的動物實驗內容，定期針對性組織實驗人員進行的相關動物實驗操作技能培訓。④根據各實驗動物設施運行管理體系以及人流、物流、動物流的個性設置要求，進行設施準入教育。⑤在設施管理制度修訂后開展宣教活動。⑥對設施運行維護保障人員進行管理培訓，增強工程人員進入屏障實驗環境的自我保護意識，同時避免因工程人員管理疏漏導致屏障環境污染的情況。

相關人員培訓的管理規章制度主要有:

(1) 基礎管理類。培訓手冊建立管理制度;培訓記錄管理制度;檔案管理制度;國家、地方相關法律、法規與國家標準培訓制度;設施安全教育制度;從業人員職業健康管理規范;屏障設施流程與規章制度培訓制度;善待實驗動物文明公約。

(2) 業務技能培訓類。公共衛生防護知識培訓;實驗動物飼養管理與動物實驗人員個人防護指導原則;洗眼站、洗眼液、傷口處理盒和急救箱的維護規程;設施內受到意外傷害的醫學咨詢與檢查規范;實驗動物飼育管理培訓規范;動物實驗專業技能培訓規范;設備使用與維護規章制度;國內(外)實驗動物專題會議與交流。

2 運行動態管理

目前，上海市實驗動物使用許可證141張，生產許可證28張，有國家嚙齒類實驗動物種子中心上海分中心和國家兔類實驗動物種子中心[7]。其中，具有使用許可證的屏障設施有123個，占使用許可證設施總數的87%，生產許可證屏障設施17個，占生產許可證設施總數的60%。上海市的實驗動物屏障環境設施，使用期最長的已連續運行滿14年，面積最小的屏障環境僅有24 m2。在設施管理上具有以下特點：①屏障設施內部應用不同品種和不同微生物級別的實驗動物；有的設施使用范圍囊括SPF級、清潔級和普通級3個微生物等級的實驗動物。②隨著基因工程技術發展，在實驗動物使用許可設施普遍存在生產、繁育基因改造的實驗動物的情況以及制造實驗動物疾病模型的應用，使用許可證設施飼育實驗動物和動物實驗的周期越來越長，逐漸失去了屏障設施在一批動物實驗結束后的空置期消毒條件。③ 以人源性腫瘤動物模型為代表的人源化動物模型研究，對實驗動物的倫理審查以及屏障環境的疾病預防、控制工作提出了新的要求。④實驗動物設施間實驗動物模型的流動性增加，一些屏障環境隔離檢疫設施不完善，大多數設施尚不能滿足實驗動物微生物凈化工作的需求[8]。⑤個別較早建立的實驗動物屏障設施，還處于普通環境內部設置超凈工作臺開展清潔級動物實驗的情況。

屏障設施的規劃布局和建筑施工質量是實驗動物屏障設施長期安全穩定運行的保障[9]。我們應該根據設施特點，個性化建立各屏障設施管理規章制度體系。實驗動物屏障設施管理規章制度(SMP)一般包括以下幾個方面內容。

(1) 組織機構建設類。組織機構圖;根據各崗位需求建立任職資格和職責標準文件,包括(機構負責人的任職資格和職責，質量保證部、實驗人員、實驗動物管理人員、獸醫、飼養員、檔案管理員、設施及安全管理人員、計算機網絡、儀器管理員、研究專員、毒麻藥及危險化學品管理員、物流運輸人員、醫廢及實驗動物尸體管理人員、值班員等的任職資格和職責)。

(2) 環境管理類。實驗動物設施人流、物流和動物流流程管理制度;實驗動物飼養設施清潔頻率的指導原則;常用消毒液的配制和使用原則;動物設施環境質量標準監測原則;潔凈度檢測方法;實驗動物設施環境空氣沉降菌檢測方法;換氣次數的檢測方法;哨兵動物的設置和檢測方法;隔離觀察室管理制度;野鼠、蟲害防治規程。

(3) 設備管理類。樓宇自控系統的管理制度;樓宇自控系統報警處理程序;凈化空調系統的操作與維護規程;凈化壓縮空氣系統的操作與維護規程;風淋系統的使用與維護規程;換熱機組的使用與維護規程;供配電設備的使用與維護規程;純蒸汽發生器系統的使用與維護規程;污水處理設備使用維護規程;冷水機組系統的使用與維護規程;蒸汽減溫減壓系統的使用與維護規程;去離子水制備系統的使用與維護規程;壓縮空氣供應系統的使用與維護規程;高壓滅菌器的使用與周期檢定規程;清潔籠具管理制度;籠具標簽的記錄規程;動物籠具更換流程;動物籠具的清洗與消毒操作規程;生物安全柜的使用和維護規程;緊外燈的使用、維護和更換規程;層流柜(超凈工作臺和抽吸式工作臺)的使用和維護規程;過氧化氫蒸汽發生器的使用和維護規程;臟墊料收集臺的使用和維護規程;自動飲水系統的管理制度;獨立通風籠具的使用、維護和定期校驗制度。

(4) 儀器管理類。電子天平及標準砝碼的使用、維護和周期檢定管理制度;離心機的使用、校正與維護管理制度;移液器的使用、維護和周期檢定管理制度;微量注射泵的使用、維護和周期檢定管理制度;電子秤的使用、維護和周期檢定管理制度;溫、濕度計的使用和周期檢定管理制度。

(5) 動物管理類。動物飼育室值班制度;動物飼育室飼養員工作流程;動物的采購與供應商考查制度;實驗動物福利制度;實驗動物的接收與安置管理制度;新購進動物質量檢測制度;異常動物報告及處理制度;預防動物逃逸及逃逸動物處理方法;動物尸體和廢棄物的處理操作規程。

(6) 物資管理類。飼料、墊料供應商考查制度;飼料、輔料、墊料與食品添加劑的倉庫管理與成分抽檢制度;飼料、飲水與墊料滅菌效果監測制度;倉儲環境溫、濕度檢測控制管理;物品進出實驗動物屏障操作規程;常用物品存放管理制度;可重復使用的個人防護用品的清洗消毒管理制度;實驗動物設施用品的清潔消毒規程;實驗動物設施用品清洗消毒效果的評價制度;實驗用品、試劑帶入管理制度;籠具、食/飲具及玩具清潔消毒管理制度;化學品的安全管理制度;銳器的安全管理制度;廢物的處置管理程序。

3 實驗動物管理

上海市納入行政審批在屏障環境進行飼育和實驗的動物包括：SPF級小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠；清潔級小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔、沙鼠等。根據上海市生產許可證單位銷售的清潔級、SPF級小鼠情況分析，BALB/c裸鼠和C57BL/6小鼠生產銷售量逐年上升，可見基因工程和腫瘤模型實驗動物的使用品種和數量不斷增加[10]。進行基因工程和腫瘤模型研究的實驗動物不僅微生物、寄生蟲指標要符合要求[11-12]，更應保證實驗動物的遺傳質量。實驗動物的操作規程管理(SOP)[13]包括實驗動物、動物實驗和獸醫護理3個方面內容。

3.1 實驗動物管理操作規程

(1) 分組編號標識。實驗動物的篩選操作規程;實驗動物分組操作規程;實驗動物編號與標識操作規程;實驗動物擺放位置操作規程;飼養室門牌和實驗動物籠牌設置規程。

(2) 飼養管理類。實驗動物飼喂管理規程;實驗動物飲用水管理規程;實驗動物的墊料管理規程;動物的抓取操作規程;逃逸動物的處理規程;實驗動物環境豐富規程;實驗動物飼養方式與飼養密度的指導原則;實驗動物飲食限制指導原則。

(3) 實驗動物術后護理類。實驗動物手術記錄保存政策;實驗動物手術無菌技術政策;24 h實驗動物急診護理政策;實驗動物沐浴、修剪操作規程;實驗動物術后護理操作規程;實驗動物術后營養指導原則。

3.2 動物實驗操作規程

(1) 基本技能。實驗動物的抓取和固定操作規程;實驗動物給藥操作規程;實驗動物采血操作規程;實驗動物體重稱量操作規程;實驗動物尿液采集操作規程;實驗動物的逃脫預防和處理方法。

(2) 給藥。實驗動物口服(經口灌胃)給藥操作規程;實驗動物皮下給藥操作規程;實驗動物皮內給藥操作規程;實驗動物經皮給藥操作規程;實驗動物肌肉給藥操作規程;實驗動物腹腔給藥操作規程;實驗動物靜脈給藥操作規程;實驗動物直腸給藥操作規程;實驗動物陰道給藥操作規程;實驗動物眼睛給藥操作規程;實驗動物粘膜給藥操作規程;實驗動物關節內給藥操作規程;實驗動物給藥體積取舍以及注射器選擇規范。

(3) 觀察和檢查。實驗動物一般觀察操作規范;實驗動物體重測定技術規范;實驗動物攝食、攝水量測定技術規范;實驗動物體溫測定技術規范;實驗動物眼科檢查技術規范;實驗動物心電圖(ECG)檢查技術規范;實驗動物外周血壓測定技術規范;實驗動物皮膚過敏試驗征狀觀察技術規范;實驗動物刺激試驗征狀觀察技術規范;實驗動物遙測植入手術操作技術規范;實驗動物空中翻正反射試驗操作規范;實驗動物爬桿試驗操作規范;實驗動物致癌試驗動物籠旁觀察技術規范;實驗動物致癌試驗動物體格檢查技術規范。

(4) 標本采集與標識。血樣采集和保存規范;尿液采集和保存規范;糞便采集和保存規范;骨髓采集和保存規范。

(5) 臨床病理檢查。臨床病理工作流程;臨床病理試劑管理制度;白細胞分類計數技術規范;網織紅細胞計數技術規范;尿液沉渣鏡檢技術規范;糞潛血檢測技術規范;糞便常規檢查技術規范;腦脊液、腹水和漿膜液檢查技術規范;骨髓分類鏡檢技術規范;尿液生化學分析技術規范;淋巴細胞表型檢測技術規范;凝血常規指標分析測定技術規范;Na/K/Cl電解質測定技術規范;臨床病理質控的應用評價原則;臨床病理數據重測原則。

(6) 人道終點。實驗動物人道終點評判的指導原則;瀕死動物和死亡動物的處置方法。

3.3 獸醫職責

動物獸醫管理。實驗動物采購和接收管理原則;實驗動物的運輸技術規范;實驗動物檢疫程序;實驗動物體檢程序;實驗動物適應性飼養技術規范;實驗動物健康預防程序;異常動物評價規程;實驗動物的疼痛評估、鎮痛及鎮靜技術規范;實驗動物麻醉技術規范;實驗動物安樂死技術規范;實驗動物回收及再利用管理制度;實驗動物外科手術技術規范;常用獸藥管理制度;遺傳物質進出庫管理制度;遺傳物質受體動物及其后裔信息管理制度;生病動物的識別、診斷、治療、報告和處理技術規范;實驗動物專用藥物的管理;實驗動物術后護理的指導原則;動物手術后護理技術規范;實驗動物使用醫用藥品政策。

4 結 語

實驗動物環境是保證實驗動物質量、實現實驗動物福利、保障科研準確的重要基礎。實驗動物屏障設施沒有可完全照搬的管理制度，只有不斷適應科研、生產實際需要，著眼設施運行各環節管理制度的無縫銜接才是管理目標。在符合國家標準的前提下[14]，實驗動物管理委員會充分發揮職能，使管理制度成為設施安全、持續運行的保障，才能實現真正意義上的實驗動物設施動態科學管理。在實驗動物屏障環境的管理實踐中，不斷深入貫徹國家標準《實驗動物機構質量和能力的通用要求(GB/T27416-2014)》將為實現實驗動物機構認可制度的國際互認打下良好基礎[15]。

[1] 全國認證認可標準化技術委員會實驗室認可分技術委員會,GB/T 27416-2014《實驗動物機構 質量和能力的通用要求》理解與實施[M].北京：中國標準出版社,2015.

[2] 劉 艷,趙赤鴻,李曉燕，等.實驗動物屏障設施運行管理標準操作規程的制定和實施[J].中國醫學裝備，2014,11(1):14-16.

[3] 國科發財字[2001]545號.實驗動物許可證管理辦法(試行)[Z].2001.

[4] 賀爭鳴,李根平.用于科學目的的動物保護歐共體條例(2010/63/EU)”對我們的啟示[J].實驗動物與比較醫學,2012,32(2):156-158.

[5] 國科發財字〔2006〕398號.關于善待實驗動物的指導性意見[Z].2006.

[6] 中華人民共和國國家科學技術委員會發布.實驗動物管理條例[Z].1988.

[7] 國科財字(1998)009號.依托中科院上海實驗動物中心建立國家嚙齒類實驗動物種子中心(上海分中心)[Z].1998.

[8] 鄭振輝,周淑佩.實驗動物設施中動物檢疫室的設置[J].實驗動物科學,2010,27(5):64-65.

[9] 寇 舉,張來賓,胡士鵬,等.屏障系統環境因素對實驗動物的影響[J].畜牧與飼料科學,2016, 37(1):30-31.

[10] 富群華,高 誠.上海市嚙齒類實驗動物產業景氣指數[J].實驗動物與比較醫學,2015,35(3):238-241.

[11] 中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.中華人民共和國國家標準GB 14922.1-2001 實驗動物寄生蟲學等級及監測[S].2001.

[12] 中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局,中國國家標準化管理委員會發布.中華人民共和國國家標準GB14922.2-2011 實驗動物-微生物學等級及監測[S].2011.

[13] 張 瀟,趙明海,劉福生.標準操作規程(SOP)由來、書寫要求及其作用[J].實驗動物科學,2007,24(5):43-47.

[14] 中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局,中國國家標準化管理委員會發布.中華人民共和國國家標準GB14925-2010 實驗動物環境與設施[S].2010.

[15] 呂 京,史光華.實驗動物福利管理制度比較[J].實驗動物與比較醫學,2015, 35(6):504-509.

Practice and Exploration of Barrier Environment “General Requirements for Quality and Ability of Laboratory Animal Organizations (GB/T27416-2014)”

ZHAOYong1，CHENGuoqiang1，ZHANGLu2，ZHUMinjuan1，CUIShufang2,JIANGWenzheng3

(1. Shanghai Research Centre for Laboratory Animal, Shanghai 201203, China; 2. Center for Laboratory Animal, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China; 3. School of Life Sciences, East China Normal University, Shanghai 200241, China)

Since the national standard of “General Requirements for Quality and Ability of Laboratory Animal Organizations (GB/T27416-2014)” was released, the management has been improved for more and more experimental animal facilities in Shanghai city according to the standard, and the management level of laboratory animal facilities has also been improved. Based on the current related regulation and national standard for laboratory animal, annual inspection of 140 laboratory animal barrier facilities for the year of 2015 was summed up and more than 30% of the barrier facilities units were on-site inspected. The basic situation of the implementation of the standard for laboratory animal barrier facilities in Shanghai area was analyzed, the main management experience and practice in the implementation of “General requirements for quality and ability of laboratory animal organizations (GB/T27416-2014)” for various laboratory animal barrier facilities were summarized, and the standardized management for laboratory animal barrier environment was also discussed.

national standard； laboratory animal barrier environment； laboratory animal organizations； management experience

2016-08-21

趙 勇(1974-),男,黑龍江齊齊哈爾人,學士,助理研究員,研究方向:獸醫公共衛生。

Tel.:021-50339079；E-mail:zhaoyong@slarc.org.cn

Q 95-3

A

1006-7167(2017)04-0248-05