慢病毒介導過表達NTCP的NTCP-SK-Hep1細胞系構建

勾 英，劉正蕓，肖冬焱，周艷萌，羅 果，高興紅，王 歡,3

(1.遵義醫學院 醫學微生物學教研室，貴州 遵義 563099；2.遵義醫學院 醫學與生物學研究中心，貴州 遵義 563099；3.貴州省普通高等學校 傳染病與生物安全特色重點實驗室，貴州 遵義 563099)

基礎醫學研究

慢病毒介導過表達NTCP的NTCP-SK-Hep1細胞系構建

勾 英1,2，劉正蕓2,3，肖冬焱1,2，周艷萌1，羅 果2,3，高興紅2,3，王 歡1,2,3

(1.遵義醫學院 醫學微生物學教研室，貴州 遵義 563099；2.遵義醫學院 醫學與生物學研究中心，貴州 遵義 563099；3.貴州省普通高等學校 傳染病與生物安全特色重點實驗室，貴州 遵義 563099)

目的 建立鈉離子-牛磺膽酸共轉運蛋白(NTCP)過表達的肝癌細胞系，以作為研究乙肝病毒(HBV)感染的細胞模型。方法 構建NTCP慢病毒重組質粒 Gv-NTCP，挑取克隆進行PCR擴增和序列測定；將陽性重組質粒與慢病毒輔助質粒共轉染HEK293T細胞，包裝Gv-NTCP慢病毒并進行病毒滴度測定；Gv-NTCP慢病毒感染人肝癌細胞株SK-Hep1，嘌呤霉素篩選，通過熒光顯微鏡，PCR和Western blot檢測NTCP的表達。結果 測序結果證實Gv-NTCP慢病毒載體構建成功；在HEK293T細胞中包裝的Gv-NTCP慢病毒滴度為2.0×108TU / mL；該病毒感染SK-Hep1細胞后，在熒光顯微鏡下可見感染細胞表達綠色熒光，PCR結果顯示感染組的NTCP表達明顯增高，WB結果顯示感染組的NTCP蛋白表達明顯增高。結論 成功建立了NTCP過表達的人肝癌細胞系NTCP-SK-Hep1。

鈉離子-牛磺膽酸共轉運蛋白；肝癌細胞；慢病毒載體

鈉離子-牛磺膽酸鈉共轉運多肽(Na+/taurocholate cotransportingpolypeptide,NTCP)是多次跨膜糖蛋白，主要在肝細胞的基底膜上表達。它是溶質載體蛋白(solute carrier family 10， SLC10)家族中發現的第一個轉運體蛋白，主要介導鈉依賴性膽汁酸從血液中的攝取，參與類固醇硫酸鹽的攝取[1]，在膽汁酸的腸肝循環中發揮重要作用[2]。……