P2X7受體在宮頸癌組織中的表達及其與病理相關參數的關系研究

汪靜文， 徐明娟

(第二軍醫大學第三附屬東方肝膽外科醫院婦產科， 上海 201600)

P2X7受體在宮頸癌組織中的表達及其與病理相關參數的關系研究

汪靜文， 徐明娟

(第二軍醫大學第三附屬東方肝膽外科醫院婦產科， 上海 201600)

目的：探討配體門控離子通道受體(P2X7)在宮頸癌組織中的表達及其與病理相關參數的關系。方法：收集2013年1月至2015年6月門診因宮頸病變行宮頸活檢、LEEP手術治療的90例CIN患者(CIN組)以及73例宮頸癌患者(宮頸癌組)和112例子宮肌瘤全子宮切除術患者(正常子宮組)的宮頸組織石蠟標本。采用免疫組織化學法檢測3組研究對象宮頸組織中P2X7受體表達差異，分析P2X7受體在宮頸癌組織中表達與其分期間的關系， 探討P2X7受體的表達強度與宮頸病變患者高危型HPV陽性CT值間關系及其與病理相關參數的關系。結果：宮頸癌組宮頸組織中P2X7受體陰性表達率90.41%最高，CIN組73.33%次之，子宮肌瘤全子宮切除術組4.46%最低，3組之間兩兩相較有統計學意義(P<0.05)；P2X7受體在宮頸癌組織中表達陰性率Ⅱ期高于I期(P<0.05)；隨著P2X7受體表達強度增加，宮頸病變患者高危型HPV陽性CT值隨之升高，不同強度之間兩兩相較有統計學意義(P<0.05)，P2X7受體陰性表達患者宮頸癌病灶大小≥4cm所占百分比較陽性表達組明顯高(P<0.05)。結論：P2X7受體在宮頸癌組織中陰性表達率較正常宮頸組織明顯高，其在宮頸癌組織中表達與宮頸癌病理分期、高危型HPV陽性CT值及病理相關參數存在一定關聯，對指導本病診治提供重要參考價值。

宮頸癌；P2X7受體；宮頸組織；免疫組織化學法

宮頸癌為臨床常見女性生殖道惡性腫瘤，以接觸性出血為主要臨床表現，因其可發生周圍浸潤及遠處轉移，對女性身心健康造成嚴重影響，雖目前細胞學、宮頸高危人乳頭瘤病毒等對本病早期診斷提供了重要參考，在一定程度上提高了宮頸癌早期準確診斷率，然而仍有20%的宮頸癌患者確診時仍處于中晚期，致使遠期預后效果不佳[1,2]。相關文獻報告指出通過探討宮頸癌發生及進展過程中相關生物學機制對改善患者遠期預后效果有著重要參考價值[3]。宮頸癌發病機制較復雜，目前對其病因尚未完全明確，然而近期一項文獻報告指出P2X7受體在婦科疾病腫瘤中發揮重要作用[4]，但一直以來對P2X7受體在宮頸癌組織中的表達及其與病理相關參數的關系研究較少涉及，為此筆者于本文展開臨床對照性研究，結果報告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料:收集2013年1月至2015年6月我院門診收治的112例子宮肌瘤全子宮切除術患者(正常宮頸組，平均年齡47.24±9.80)、90例宮頸癌前病變(CIN)患者(CIN組，平均年齡46.83±9.92)及住院手術治療的73例宮頸癌患者(宮頸癌組，平均年齡46.53±9.42)為研究對象。其中宮頸癌組鱗癌73例，患者的分期情況為，Ia1期5例(7%)，Ia2期1例(1%),Ib1期21例(29%)，Ib2期9例(12%)，IIa1期23例(32%)，IIa2期11例(15%)，IIb期3例(4%)。CIN組患者中，CIN I 47例(52%)，CIN II-III 43例(48%)。

1.2 入組標準: ①經手術病理學證實為宮頸癌；②納入研究前未接受放化療及免疫治療；③子宮無先天畸形；④對本研究及目的知情并自愿簽署知情同意書，征得本院倫理委員會批準同意。排除標準：①納入研究前有婦科手術史；②合并凝血功能障礙；③合并嚴重心、肝、腎等重要臟器功能障礙；④對本研究依從性不高。子宮肌瘤全子宮切除術組年齡30～66(47.24±9.80)歲，體重48～72(63.87±7.03)kg；CIN組年齡31～61(46.83±9.92)歲，體重49～72(64.01±7.51)kg；宮頸癌組年齡32～59(46.53±9.42)歲，體重49～73(63.91±7.11)kg。3組研究對象上述基線資料相較無明顯差異(P>0.05)，具有可比性。

1.3 研究方法①試劑：P2X7抗體(美國Santa Cruz)，稀釋比1：200，二抗GTVisionIII抗鼠/兔通用型免疫組化學試劑盒及DBA顯色劑(K5007)購自丹麥Dako公司。②檢測方法：免疫組織化學法，采集3組研究對象宮頸組織并制成標本，將石蠟切片置于烘箱中62℃烤1～2h，常規脫蠟、水化；用PH=6.0的0.01mol/L檸檬酸鈉抗原修復液修復；3%H2O2抑制內源性過氧化物酶室溫孵育；血清封閉后孵育一抗、二抗， DAB顯色3～5min；蘇木素復染45s，流水沖洗5min；鹽酸酒精分化1s,流水沖洗15min；梯度酒精脫水，二甲苯透明，樹脂封片；鏡下(購自上海精密儀器有限公司的Stemi508OLIPICS電子顯微鏡)觀察，細胞核呈藍色，陽性產物呈棕黃色或黃色。③結果判斷：陽性顯色為棕黃色顆粒，可依據切片中陽性細胞百分比和著色強度進行半定量分級評分：陽性細胞的百分比≤10%為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，≥76%為4分。著色強度：0分為不著色，1分淺黃色，2分黃色，3分棕褐色。取上述兩項分值的乘積作為總積分：0分為陰性(-)，1-4分為弱陽性(+)，6-8分為陽性(++)，9-12分為強陽性(+++)。其中陽性表達率=(陽性+強陽性)/總例數×100%。

1.4 觀察指標:①3組研究對象宮頸組織中P2X7受體表達差異。②P2X7受體在宮頸癌組織中表達與宮頸癌分期間的關系，宮頸癌分期標準：Ⅰ期：Ⅰa 鏡下浸潤癌。所有肉眼可見的病灶，包括表淺浸潤，均為ⅠB；Ⅰa1 間質浸潤深度<3 mm，水平擴散≤7 mm；Ⅰa2 間質浸潤深度3～5 mm，水平擴散≤7 mm；Ⅰb 肉眼可見癌灶局限于宮頸，或者鏡下病灶>Ⅰa2；Ⅰb1 肉眼可見癌灶最大徑線≤4 cm；Ⅰb2 肉眼可見癌灶最大徑線>4 cm；Ⅱ期 腫瘤超越子宮，但未達骨盆壁或未達陰道下 1/3；Ⅱa 無宮旁浸潤；Ⅱb 有宮旁浸潤。③P2X7受體的表達強度與宮頸病變患者高危型HPV陽性CT值間的關系。④P2X7受體與宮頸癌病理相關參數的關系。

2 結 果

2.1 3組研究對象宮頸組織中P2X7受體表達差異:宮頸癌組宮頸組織中P2X7受體陰性表達率最高，CIN組次之，子宮肌瘤全子宮切除術組最低，3組之間兩兩相較有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 3組研究對象宮頸組織中P2X7受體表達差異n(%)

表2 P2X7受體在宮頸癌組織中表達與宮頸癌分期間的關系n(%)

2.2 P2X7受體在宮頸癌組織中表達與宮頸癌分期間的關系：P2X7受體在宮頸癌組織中表達陰性率Ⅱ期高于Ⅰ期，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2。

2.3 P2X7受體表達強度與宮頸病變患者高危型HPV陽性CT值間的關系：隨著P2X7受體表達強度增加，宮頸病變患者高危型HPV陽性CT值隨之升高，不同強度之間兩兩相較差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 P2X7受體表達強度與宮頸病變患者高危型HPV陽性CT值間的關系

2.4 P2X7受體與宮頸癌病理相關參數的關系:P2X7受體陰性表達患者宮頸癌病灶大小≥4cm所占百分比較陽性表達組明顯高，差異有統計學意義(P<0.05)；2組其它病理參數相較無明顯差異(P<0.05)，經見表4。

表4 P2X7受體與宮頸癌病理相關參數的關系n(%)

3 討 論

宮頸癌是目前國內發病率較高的惡性腫瘤，因本病早期易發生髂內淋巴結、閉孔淋巴結轉移以及宮旁組織浸潤程度較高，目前臨床對其治療尚缺乏行之有效的治療方法，患者遠期生存指標較差，此外患者無瘤生存期和疾病無進展生存期較短，一直以來臨床對宮頸癌患者遠期預后效果尚缺乏靈敏指標[5]。近年來細胞學檢查及宮頸HPV檢查在提高宮頸癌早期診斷水平中有著重要臨床意義，其中P2X7受體在宮頸癌中的作用備受關注[6]。

早期相關文獻報告指出P2X7受體參與細胞因子釋放、骨重塑、炎癥反應及神經源性疼痛及婦科腫瘤等疾病中，因而臨床可考慮對宮頸癌患者組織中P2X7受體表達進行檢測分析可能對疾病診治有一定指導意義[7]。本文在既往研究基礎上另展開臨床對照性研究，研究結果顯示宮頸癌患者宮頸組織中P2X7受體陰性表達率90.41%最高，宮頸癌前病變患者73.33%次之，子宮肌瘤全子宮切除術組4.46%最低，各組之間相較有統計學意義，且P2X7受體在宮頸癌組織中表達陰性率隨著宮頸癌分期增加而升高，同時隨著P2X7受體表達強度增加，宮頸病變患者高危型HPV陽性CT值隨之升高， 此外P2X7受體陰性表達患者宮頸癌病灶大小≥4cm所占百分比較陽性表達組明顯高，初步證實了P2X7受體在宮頸癌患者宮頸組織中陽性表達率明顯降低，并且P2X7受體高陰性表達在宮頸癌患者分期及宮頸病變患者高危型HPV陽性鑒別診斷中有明顯應用價值。P2X7受體屬于胞外核苷酸激活的嘌呤類受體P2受體中的配體門控的離子通道受體，ATP為其天然配體，受適當濃度配體刺激后，P2X7受體調控非選擇鈣離子通道，當ATP濃度升高時，各種陽離子均可通過分子量較大的有機陽離子，引起細胞膜通透性增高，使細胞外本不該通過的物質進入細胞內，最終導致細胞溶胞死亡[8,9]。研究表明P2X7受體在正常宮頸細胞中表達比癌細胞表達水平高，在正常子宮，多數P2X7受體存在外宮頸上皮組織[10,11]；此外P2X7受體與配體結合后可通過膜孔形成、增強Ca離子內流以及依賴Ca離子活化的線粒體途徑等機制誘導細胞凋亡。早期一項研究結果表明，P2X7受體特效激動劑BzATP可誘導正常及癌變宮頸細胞凋亡，并且這種作用在正常細胞中明顯強于宮頸癌細胞[12]；子宮癌細胞可能通過下調P2X7的mRNA繼而逃避生長控制，國外一學者研究結果表明，在腫瘤形成早期會出現一定的P2X7受體缺失[13]，此外臨床標本檢查表明P2X7受體的mRNA、蛋白表達水平在非典型增生、子宮內膜癌中低于正常組織[14]。

綜上，P2X7受體在宮頸癌患者癌變組織中的表達較正常宮頸組織存在明顯差異，本次研究初步證實了宮頸癌發病機理可能與P2X7受體表達水平下降有關，為宮頸癌的診治療提供新的研究方向和研究基礎。

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1006-6233(2017)05-0806-04

長海醫院“1255”學科建設計劃，(編號：CH125512105)

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10.3969/j.issn.1006-6233.2017.05.030