咪鮮胺及2，4，6-三氯苯酚在牛奶中的殘留檢測方法

吳瓊，呂岱竹，韓丙軍，黃海珠，張艷玲

（1.中國熱帶農業科學院分析測試中心，海南海口571101；2.農業部熱作產品質量安全風險評估實驗室（海口），海南海口571101；

3.海南省熱帶果蔬產品質量安全重點實驗室，海南海口571101）

咪鮮胺及2，4，6-三氯苯酚在牛奶中的殘留檢測方法

吳瓊1，2，3，呂岱竹1，2，3，韓丙軍1，2，3，黃海珠1，2，3，張艷玲1，2，3

（1.中國熱帶農業科學院分析測試中心，海南海口571101；2.農業部熱作產品質量安全風險評估實驗室（海口），海南海口571101；

3.海南省熱帶果蔬產品質量安全重點實驗室，海南海口571101）

建立了牛奶中咪鮮胺及2，4，6-三氯苯酚殘留的氣相色譜質譜（GC-MS）檢測方法。牛奶樣品經乙腈-丙酮（7∶3）提取，凝膠滲透色譜（GPC）凈化，GC-MS檢測，內標法定量。結果表明，在牛奶中咪鮮胺和2，4，6-三氯苯酚的定量限分別為0.05，0.025 mg/kg；最小檢出量分別為0.2，0.5 ng；咪鮮胺在牛奶中的平均回收率為82.6%～109.1%，相對標準偏差（RSDs）為1.7%～4.0%；2，4，6-三氯苯酚在牛奶中的平均回收率為85.3%～99.3%，相對標準偏差（RSDs）為2.6%～5.8%。該方法提取效果好，具有良好的回收率和重復性。

氣相色譜質譜法；咪鮮胺；代謝物；牛奶；殘留

咪鮮胺（prochloraz）是一種廣譜殺菌劑，對大田作物、水果蔬菜、草皮及觀賞植物上的多種病害具有防治作用；另外，咪鮮胺還可用于柑橘、香蕉等水果收獲后的產品保鮮，其應用范圍較為廣泛[1-4]。有關咪鮮胺的用量各國都有嚴格的規定，如CAC、歐盟和日本都規定了咪鮮胺在生乳中的MRL值，分別為0.05，0.4，0.05 mg/kg，我國尚未制定。

有關咪鮮胺在水果上的殘留檢測方法已有一些報道，主要是采用氣相色譜法（GC）[5-6]、液相色譜法（LC）[7-10]、液相色譜串聯質譜法（LC-MS/MS）等分析方法[11-12]。咪鮮胺屬于低毒殺菌劑，但是其代謝物2，4，6-三氯苯酚具有一定的環境毒理作用，對水生物極毒。目前尚未見有關采用氣相色譜-質譜聯用法（GC-MS）同時分析牛奶中咪鮮胺及其代謝物2，4，6-三氯苯酚殘留的方法。

本研究采用溶劑提取的方法，通過GC-MS快速檢測牛奶中咪鮮胺及其2，4，6-三氯苯酚的殘留量，旨在建立咪鮮胺及2，4，6-三氯苯酚在牛奶中的殘留分析方法。

1 材料和方法

1.1 儀器與主要試劑

氣相色譜型號Thermo Trace Ultra GC，配RSH Tri Plus自動進樣器，Xcalibur軟件；色譜柱Thermo Fisher TR-5MS，0.25 μm，0.32 mm×60 m；質譜儀型號Thermo DSQII；R-210型旋轉蒸發器（上海申生科技有限公司）；氮吹儀TTL-DCII（北京同泰聯科技發展有限公司）；高速分散均質機T25 DS25（德國IKA（廣州）儀器實驗室技術有限公司）；全自動凝膠色譜凈化系統GPC（德國LcTech公司）。

咪鮮胺標準品（純度99.7%，購自德國Dr. Ehrenstorfer公司），2，4，6-三氯苯酚（純度99.7%，購自德國Dr.Ehrenstorfer公司），環氧七氯標準品（純度99.5%，購自德國Dr.Ehrenstorfer公司）。

乙腈、丙酮、環己烷和乙酸乙酯均為分析純；正己烷為色譜純；氯化鈉于600℃灼燒后使用。

1.2 樣品提取

稱取10.00 mL牛奶樣品，向樣品中加入20 mL乙腈-丙酮混合溶劑（1∶1，體積比）。用勻質機在15 000 r/min勻質3 min。吸取上清液于裝有氯化鈉的離心管中，離心分層，取上清液于100 mL雞心瓶中。殘渣用20 mL乙腈-丙酮混合溶劑（1∶1，體積比）重復提取1次，合并2次提取液。將提取液于40℃水浴旋轉蒸發近干，用環己烷-乙酸乙酯混合溶劑（1∶1，體積比）進行溶劑替換，最后濃縮至約5 mL，待凈化。

1.3 凝膠滲透色譜凈化

1.3.1 條件凈化柱400 mm×25 mm，內裝BIOBeads S-X3填料或相當者；檢測波長254 nm；流動相為環己烷-乙酸乙酯混合溶劑（1∶1，體積比）；流速5 mL/min；進樣量5 mL；開始收集時間15 min；結束收集時間40 min。

1.3.2 凈化將濃縮的提取液轉到10 mL容量瓶中，用5 mL環己烷-乙酸乙酯混合溶劑（1∶1，體積比）分2次洗滌雞心瓶，并轉移至上述10 mL容量瓶中，再用上述溶劑定容至刻度，搖勻。經0.45μm濾膜過濾到10 mL試管中，供凝膠滲透色譜儀凈化，收集15～40 min的餾分于100 mL雞心瓶中，在40℃水浴旋轉蒸發至0.5 mL。用氮氣吹干，再用0.5 mL正己烷溶解殘渣，供氣相色譜-質譜進行檢測。同時取不含農藥及相關化學品的樣品，按上述步驟制備空白樣品提取液，用于配制基質標準工作液。

1.4 氣相色譜質譜儀測定條件

載氣為氦氣（純度99.999%），流速為1.0mL/min；進樣口溫度280℃，進樣量2 μL，不分流進樣，延時采集時間5 min；柱溫程序，100℃保持1 min，30℃/ min升至130℃，保持0 min，15℃/min升至280℃，保持23 min。色譜-質譜接口溫度300℃，離子源溫度230℃；電子能量70 eV；離子化方式EI。保留時間和監測離子如表1所示。

表1 GC-MS/SIM分析咪鮮胺及2，4，6-三氯苯酚殘留量的相關參數

1.5 標準曲線的繪制

試驗采用內標法單離子定量測定。用正己烷分別配制100 μg/mL的咪鮮胺、2，4，6-三氯苯酚，以及10 μg/mL的內標物質環氧七氯標準品母液。用空白樣品溶液配制標準工作溶液，濃度分別為0.50，0.80，1.0，2.0，4.0 μg/mL，采用1.4的儀器條件進樣分析，以咪鮮胺進樣濃度（μg/mL）為橫坐標，咪鮮胺與環氧七氯峰面積比為縱坐標，繪制標準曲線；以2，4，6-三氯苯酚進樣濃度（μg/mL）為橫坐標，2，4，6-三氯苯酚與環氧七氯峰面積比為縱坐標，繪制標準曲線。

1.6 準確度和精密度的測定

在沒有檢出咪鮮胺和2，4，6-三氯苯酚的牛奶樣品中分別添加不同含量水平的咪鮮胺和2，4，6-三氯苯酚標準溶液，添加水平咪鮮胺分別為0.05，0.2，0.4 mg/kg，2，4，6-三氯苯酚分別為0.025，0.1，0.4 mg/kg。按照所建立的前處理和檢測方法進行添加回收試驗。

2 結果與分析

2.1 線性分析

在0.50～4.0 μg/mL范圍內，咪鮮胺和2，4，6-三氯苯酚的峰面積比響應值（y）和濃度（x）均具有良好的線性關系，咪鮮胺回歸方程為y＝7.162 4x－1.597 2，R2＝0.997 5；2，4，6-三氯苯酚回歸方程為y＝0.470 8x－0.015 3，R2＝0.999 7（圖1，2）。

2.2 回收率和精密度分析

表2 咪鮮胺和2，4，6-三氯苯酚在牛奶中的添加回收率

添加回收試驗結果（表2）表明，在添加水平為0.05～0.4 mg/kg，咪鮮胺在牛奶中的平均回收率為82.6%～109.1%，相對標準偏差為1.7%～4.0%；在添加水平為0.025～0.4 mg/kg，2，4，6-三氯苯酚在牛奶中的平均回收率為85.3%～99.3%，相對標準偏差為2.6%～5.8%。二者均符合農藥殘留試驗的要求[13]。

2.3 色譜條件的優化

本試驗采用GPC法去除牛奶中的脂肪等大分子干擾物，所選用的BIO-Beads S-X3填料對目標物沒有影響，無可逆吸附，色譜的分離度也比較好。咪鮮胺和2，4，6-三氯苯酚的SIM色譜如圖3所示。

2.4 靈敏度分析

在所選定的檢測條件下，儀器對咪鮮胺和2，4，6-三氯苯酚最小檢出量分別為0.2，0.5 ng；牛奶中咪鮮胺和2，4，6-三氯苯酚的定量限（LOQ）分別為0.05，0.025 mg/kg。

3 結論與討論

本試驗的檢測方法采用乙腈-丙酮混合溶劑（1∶1，體積比）作為牛奶樣品的提取液，提取效果較好，雜質峰較少。本研究結果表明，在添加水平為0.05～0.4 mg/kg時，咪鮮胺在牛奶中的平均回收率在82.6%～109.1%，相對標準偏差在1.7%～4.0%；在添加水平為0.025～0.4 mg/kg時，2，4，6-三氯苯酚在牛奶中的平均回收率在85.3%～99.3%，相對標準偏差在2.6%～5.8%。該方法分離效果好，靈敏度、準確度、精密度均符合農藥殘留分析的要求。

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Determination of Prochloraz and 2，4，6-trichlorophenol Residues in Milk

WUQiong1，2，3，L譈Daizhu1，2，3，HANBingjun1，2，3，HUANGHaizhu1，2，3，ZHANGYanling1，2，3
（1.Analysis&TestingCenter，Chinese AcademyofTropical Agricultural Sciences，Haikou 571101，China；2.Agricultural MinistryLaboratoryfor Tropical Crop Product Qualityand SafetyRisk Assessment，Haikou 571101，China；3.Hainan Provincial KeyLaboratoryofQualityand Safetyfor Tropical Fruits and Vegetables，Haikou 571101，China）

A gas chromatographyand mass spectrometry（GC-MS）method was established for the determination ofprochloraz and 2,4,6-trichlorophenol residues in milk.The milk samples were extracted with acetonitrile-acetone（7∶3）solvent and purified by using GPC.The final extract was injected into GC-MS and quantified by internal standard method.The result showed that the limits of quantification（LOQs）were 0.05,0.025 mg/kg for prochloraz and 2,4,6-trichlorophenol,limit of detection of prochloraz and 2,4, 6-trichlorophenol were 0.2,0.5 ng.The recoveries of prochloraz and 2,4,6-trichlorophenol spiked in milk were 82.6%-109.1%and 85.3%-99.3%with the relative standard deviations（RSDs）1.7%-4.0%and 2.6%-5.8%.The results showthat the proposed method is sensitive and accurate for the determination ofprochlorazand 2,4,6-trichlorophenol in milk.

GC-MS;prochloraz;metabolites;milk;residue

TS252.7

：A

：1002-2481（2017）06-0937-04

10.3969/j.issn.1002-2481.2017.06.18

2017-02-16

中國熱帶農業科學院院本級基本科研業務費專項（1630042014006）

吳瓊（1984-），女，黑龍江牡丹江人，助理研究員，主要從事農藥殘留試驗研究工作。