犬乳腺腫瘤病理組織學觀察及ER PR C-erbB-2的表達分析

劉廷江， 嵇辛勤， 主 性， 阮 涌， 王修江， 林聰宏，陳 強， 雷 云， 龍丹丹， 胡 焱， 萬 彪

(1. 遵義市農業委員會， 貴州遵義563000； 2. 貴州大學動物科學學院， 貴州貴陽550025；3.貴州省動物疫病研究所， 貴州貴陽550025； 4.貴陽黔靈動物醫院，貴州貴陽550000)

犬乳腺腫瘤病理組織學觀察及ER PR C-erbB-2的表達分析

劉廷江1， 嵇辛勤2，3， 主 性2， 阮 涌2， 王修江4， 林聰宏2，陳 強2， 雷 云2， 龍丹丹2， 胡 焱2， 萬 彪2

(1. 遵義市農業委員會， 貴州遵義563000； 2. 貴州大學動物科學學院， 貴州貴陽550025；3.貴州省動物疫病研究所， 貴州貴陽550025； 4.貴陽黔靈動物醫院，貴州貴陽550000)

通過對20例犬乳腺腫瘤進行病理組織學觀察、免疫組織化學染色，探討犬乳腺腫瘤病理形態學特點，ER、PR、C-erbB-2表達與乳腺腫瘤的關系。結果顯示，20例犬乳腺腫瘤，70%為惡性腫瘤，其中良性腫瘤有導管內乳頭狀瘤和纖維性瘤，惡性腫瘤有浸潤性導管癌，單純癌，小葉原位癌，癌肉瘤，腺癌，惡性腫瘤發病率高于良性腫瘤。免疫組化結果顯示-ER、PR在良性腫瘤的表達率均高于惡性腫瘤，P<0.05，差異顯著；C-erbB-2在惡性腫瘤中的表達高于良性腫瘤，P<0.05，差異顯著。提示，犬乳腺腫瘤惡性腫瘤發病率較高，ER、PR、C-erbB-2對犬乳腺腫瘤發病中的診斷、治療及預后有重要意義。

犬 ； 乳腺腫瘤 ； 免疫組織化學

犬乳腺腫瘤是犬機體正常組織細胞在促進因素的長期作用下，產生的細胞增生與異常分化而形成的病理性新生物。是犬類常見腫瘤，發病率較高，占犬腫瘤發生中的50%，母犬發病為主，臨床上發病率較高，且結構復雜[1-8]。犬乳腺腫瘤一般為6歲以后多發，平均年齡在9～10歲左右[9-11]。犬乳腺腫瘤的病因、腫瘤組織學特性、藥物及手術治療等與人類的乳腺腫瘤較為相似[12]，因此研究犬乳腺腫瘤是研究人類乳腺腫瘤的最佳切入口之一，它為研究人類乳腺腫瘤病提供了有效的動物模型。隨著醫療技術的不斷發展，對于犬乳腺腫瘤的診斷技術雖有了很大的提高，但主要以病理切片觀察為主，大多數病例并沒有得到完全的確診，在治療方面公認的治療主要以手術治療為主，惡性腫瘤很少采用化療或放療等治療措施，因此常出現癌細胞轉移的現象[13-14]。免疫組織化學是乳腺腫瘤研究的一種重要方法，在人類上研究較為成熟，但在犬乳腺腫瘤的研究上報道較少，在國內尚處于起步階段[15]。在乳腺腫瘤免疫組化研究當中，雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)是一個重要的檢測因子，其在犬乳腺組織的發育中有著重要作用，但其表達異常時，也常會引起乳腺腫瘤的發生[13]。

研究報道發現，表皮生長因子受體-2(C-erbB-2)的表達對乳腺癌細胞發生有著一定的影響作用，乳腺癌中C-erbB-2的表達情況，對于患者預后的判斷及治療方式的選擇有著重要的意義[16]。因此，本文通過對診療過程中獲得的犬乳腺腫瘤進行組織學形態觀察，將其分類，并用免疫組化法檢測ER、PR、C-erbB-2的表達情況，探索其在犬乳腺腫瘤中的表達差異及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料 材料來自貴州大學動物醫院，收集于2012年12月至2014年8月共20例，年齡在3～13歲之間，手術取下的腫瘤組織浸泡于4%多聚甲醛固定。免疫組化試劑盒，購自上海江萊生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 組織形態學觀察 取固定好后的腫瘤組織，石蠟包埋，3～5 μm連續切片，分別進行H.E.染色并分類。

1.2.2 ER、PR、C-erbB-2表達檢測 取4%多聚甲醛固定好的組織，采用免疫組化SP方法，DAB顯色進行檢測，具體操作按照購買試劑盒說明書進行。根據多功能真彩色細胞圖象分析管理系統，C-erbB-2蛋白以細胞膜出現棕黃色顆粒為陽性判定標準，ER、PR蛋白均以細胞核出現棕黃色為陽性判定標準進行判讀[17]。根據陽性細胞數和著色強度綜合計分，陽性細胞數目比例在0%～1%計分為0分，1%～10%為1分，10%～50%為2，50%～80%為3分，80%～100%為4分；著色強度方面計分：不著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。綜合兩者評分，≧2陽性[18]。

1.2.3 統計學處理 采用SPSS17.0軟件進行統計分析，采用χ2檢驗相關性分析，P<0.05為差顯著具有統計學意義。

1.2.4 組織形態學觀察 對收集的20例犬的乳腺腫瘤組織進行切片，結果參照《WHO乳腺腫瘤分類》(第四版)、《中國腫瘤病理學分類》第9分冊進行分類[19-20]，共觀察到7類乳腺腫瘤，其中惡性腫瘤的發生要高于良性腫瘤，良性腫瘤以導管內乳頭狀瘤居多，而惡性腫瘤以浸潤性導管癌發病較高，發生的腫瘤中可以看到，組織中的細胞和細胞核的大小、形狀不一致，細胞雜亂無章的堆積，形成不規則的實性細胞團塊、條索、小梁和不規則的腺管、乳頭，肌上皮細胞消失，細胞的胞膜和核膜消失，癌細胞突破管泡壁的基底膜向間質及周圍組織侵襲性生長，結締組織增生，大面積的纖維化等(見中插彩版圖1)，其分類和比例情況見表1。

表1 犬乳腺腫瘤分類情況

2 免疫組化結果

免疫組化部分表達情況見中插彩版圖2、圖3、圖4、圖7、圖6、圖7。在受體蛋白檢測發現(表2)，ER陽性在良性腫瘤中的表達率為83.33%(5/6)，高惡性腫瘤中的表達率為71.43%(10/14)，良性高于惡性腫瘤，P<0.05，差異顯著，PR陽性在良性腫瘤中的表達率為50%(3/6)，惡性腫瘤中的表達率C-erbB-2陽性表達良性為16.67%(1/6)，惡性腫瘤表達為35.71%(5/14)，惡性高于良性，P<0.05，差異顯著。

表2 乳腺腫瘤中ER,PR,C-erbB-2表達情況

3 討論

犬乳腺腫瘤是犬發病率較高的一類疾病，發病率有逐漸增高的趨勢，其結構較為復雜，惡性程度高，混合性較強，與人類乳腺腫瘤特點有所差異[21]，但有研究表明，人類與犬類的腫瘤生物學反應波譜、腫瘤發生學十分接近，且作為人類伴侶動物與人類的生活條件較為相似，故對人類的乳腺腫瘤研究參考具有重要價值[22]，近年來對犬乳腺腫瘤的關注度也越來越高[23]。犬乳腺腫瘤發病中，惡性腫瘤發病率較高，是造成犬死亡的一個重要因素，在調查的20例乳腺腫瘤當中，14例為惡性腫瘤，是良性腫瘤的兩倍，可見犬類乳腺腫瘤發病中惡性腫瘤的發病率較高，同時切片觀察中惡性腫瘤癌細胞形成的結構越復雜，其惡性程度就越高，對犬的傷害也越大，死亡率也越高。在送診的20例病例當中，多數犬發病較為嚴重，多數犬開始消瘦明顯，腫瘤表皮皮膚破潰，犬飲食較差或不吃東西，精神狀態很差。而此時診斷的病例多為中晚期，且可能惡性腫瘤已發生轉移，直接對治療恢復情況有嚴重的影響，常常預后不良，這也是直接造成該病高死亡率的一個重要因素。因此，如何提高乳腺腫瘤的早期診斷效率或尋找出更簡便的早期方便適用的診斷技術，是亟待解決的問題，也是一個值得探索的課題。

犬乳腺腫瘤手術治療是目前比較公認的治療方法[24]，但并不是所有犬都適用手術治療，且手術治療時，疑似轉移的情況，常需要后期進行輔助治療，這就需要醫生對腫瘤的發病情況和預后情況更加準確的把握。乳腺機體生理學反應當中，雌激素受體ER和孕激素受體PR分別是雌激素與孕激素的特異性結合蛋白[25]，通過雌激素與孕激素二者的共同協調作用，維持乳腺組織的正常發育，同時，二者作用的結果也會使乳腺癌發病的危險性增加，在乳腺腫瘤當中ER、PR對其預后判斷和治療都具有重要意義[26-27]，本試驗當中，ER、PR在良性腫瘤中的陽性表達均大于惡性腫瘤，且差異顯著，因此，一般情況下，雌激素受體、孕激素受體陽性表達的腫瘤常預后較好，但雌激素受體、孕激素受體不表達或表達量過高時也常提示乳腺腫瘤的惡性程度高，分化差，對治療的好轉率有嚴重的影響，這與相關研究報道一致[28]，故ER、PR對犬乳腺腫瘤的預后及治療具有一定的指導意義。

表皮生長因子受體2(C-erbB-2)的活性對調節細胞增殖及分化至關重要[29]。在正常乳腺組織中一般不表達或者微表達[30]，是乳腺癌重要的預后和預測性分子標記物，也是一個重要的乳腺腫瘤治療靶位[31-32]，本試驗中C-erbB-2陽性在惡性腫瘤中的表達高于惡性腫瘤，有明顯差異性，免疫組化觀察結果發現，當乳腺腫瘤的惡性程度較高時，C-erbB-2的表達量也較高，人乳腺癌C-erbB-2表達與腫瘤分化及淋巴轉移有關系[33]，而在犬中是否存在相同關系需要進一步研究，不過本試驗中發現， C-erbB-2的陽性表達對乳腺腫瘤的預后不是太好，有研究報道，當ER、PR、 C-erbB-2均不表達時常預后更差，治療效果并不是太好[34]，可見對犬乳腺腫瘤的預后指標不應單一來看，還需結合多個指標和綜合病情來具體分析，因此C-erbB-2時表達情況對犬乳腺腫瘤的預后和治療方案均有一定的指導意義。

4 結論

犬乳腺腫瘤危害犬生命較為嚴重的一種疾病，臨床發病情況中惡性腫瘤高于良性腫瘤，在該病的診療過程中，ER、PR陽性表達的腫瘤常預后較好，C-erbB-2的陽性表達對乳腺腫瘤的預后不是太好，雖然隨著醫療技術的不斷進步，各種先進的診療器械不斷應用于診斷治療，且治療方案在不斷完善，但該病的高發病率和致死率依然沒有得到很好的控制，這就需要我們獸醫工作者不斷的研究和探索，以達到的早診斷、早治療及根治的效果。

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Histopathological observation and C-erbB-2, Estrogen and Progesterone receptor expression in canine mammary tumor

LIU Ting-jiang1, JI Xin-qin2,3, ZHU Xing2, RUAN Yong2, WANG Xiu-jiang4, LIN Cong-hong2, CHEN Qiang2, LEI Yun2， LONG Dan-dan2，HU Yan2， WAN Biao2

(1.Zunyi Agriculture Committee， Zunyi 563000, China； 2.College of Animal Science， Guizhou University， Guiyang 550025， China； 3.Laboratory for Animal Disease of Guizhou, Guiyang 550025, China； 4.Qian ling animal hospital, Guiyang 550000, China)

In the present study, we detected the expression of ER, PR, and cerbb-2 using the methods of histopathological and immunohistochemical analysis on 20 cases of canine mammary tumors in this paper. Studying the pathological characteristics and the relationship of ER, PR, cerbb-2 on canine mammary tumor. The results showed 70% of the cases had malignant tumors including carcinosarcoma, infiltrative ductal carcinoma, lobular carcinoma in situ, and carcinoma simplex.Benign tumours included intraductal papilloma and fibrous disease, and the incidence was of benign tumors was lower than that of the malignant tumours. In immunohistochemistry, the rate of ER and PR expression sin benign tumours were higher than that in malignant tumors (P<0.05). The malignant tumors were higher than benign tumors in the cerbb-2 expression (P<0.05). It showed that the expressions of ER, PR, and cerbb-2 were important for canine mammary tumor diagnosis, treatment and prognosis

Canine ； mammary tumor ； Immuohistochemistry

JI Xin-qin

2016-09-20

劉廷江(1989-)，男，獸醫師，碩士，從事寵物診療及畜牧業技術推廣工作，E-mail:179471044@qq.com

嵇辛勤，E-mail：jxq972@aliyun.com

S852.35

A

0529-6005(2017)05-0082-03