人環狀RNA-0046366與肝細胞脂肪變性的相關性及其機制研究

郭行雅，章瑞南，何崇信，孫 芳，范建高，潘 勤

上海交通大學醫學院附屬新華醫院消化內科，上海 200092

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人環狀RNA-0046366與肝細胞脂肪變性的相關性及其機制研究

郭行雅，章瑞南，何崇信，孫 芳，范建高，潘 勤

上海交通大學醫學院附屬新華醫院消化內科，上海 200092

目的 探討人環狀RNA-0046366(circRNA-0046366)表達變化對肝細胞脂肪變性的影響及其機制。方法 將肝HepG2細胞株隨機分為正常對照組(n=3)和脂肪變性模型組(n=3)，分別給予高糖DMEM、高脂培養基(油酸∶棕櫚酸=2∶1, 0.5 mmol/L)誘導24 h。采用油紅O染色及甘油三酯(Triglyceride，TG)、丙二醛(Malonyldialdehyde，MDA)檢測，觀察肝細胞的脂肪變性及脂質過氧化。以實時熒光定量PCR(Real-Time PCR)法檢測circRNA-0046366在脂肪變性前后的表達改變。在circBase數據庫搜索、circRNA-miRNA互補序列分析的基礎上，預測circRNA-0046366的靶miRNA及其下游基因。 通過Spearman相關性分析，揭示circRNA-0046366水平與靶miRNA表達、下游mRNA表達、肝細胞脂肪變性及脂質過氧化指標的相關性。結果 與正常對照組相比，脂肪變性模型組的肝細胞內脂滴、TG[(24.4±2.4) μmol/gvs(263.7±17.5) μmol/g，P<0.05]及MDA[(0.6±0.1) μmol/gvs(1.8±0.2) μmol/g，P<0.05]含量明顯升高。circRNA-0046366表達水平在脂肪變性的肝細胞中則顯著降低(P<0.05)。circRNA-0046366可與過氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisome proliferator-activated receptor α, PPARα)競爭性結合miR-34a，從而阻斷miR-34a對PPARα翻譯抑制作用。相關性分析顯示，肝細胞的circRNA-0046366與PPARα表達水平呈顯著正相關(r=0.78，P<0.05)，與miR-34a表達水平(r=-0.83，P<0.05)、TG(r=-0.72，P<0.05)及MDA(r=-0.69，P<0.05)含量則呈顯著負相關。結論 肝細胞的circRNA-0046366水平與脂肪變性及脂質過氧化呈負相關。其機制可能與靶向結合miR-34a，從而解除PPARα的表達抑制相關。

環狀RNA；肝細胞；脂肪變性；微小RNA；過氧化物酶體增殖激活受體α

近年研究[1-2]顯示，miRNA與肝細胞脂肪變性密切相關，miR-181d、miR-10b等11種miRNA均可靶向調節脂質代謝相關基因的表達水平，從而干預細胞內甘油三脂(Triglyceride,TG)的轉運、合成、氧化，在此基礎上影響肝細胞的脂肪變程度。 然而迄今為止，對肝細胞脂肪變相關miRNA的調控機制仍不明確。

20世紀70年代在RNA病毒中發現一類非編碼RNA—環狀RNA(circular RNA，circRNA)[3]，近年來高通量測序結合轉錄組分析發現，circRNA大量存在于真核細胞中[4-6]。circRNA可通過堿基互補充當miRNA海綿(miRNA sponge)[7-8]，與miRNA發生競爭性結合，進而解除其對下游靶基因的轉錄抑制作用。……