幾種餌料對分叉小猛水蚤生殖量的影響

王笑月+謝璽+李大成+劉衛(wèi)東+于佐安+李石磊

摘 要：在水溫23～26 ℃，鹽度32‰條件下，研究了幾種餌料單獨投喂及混合投喂對分叉小猛水蚤（Tisbe furcata）生殖量的影響，以探索培育該蚤適合的餌料品種及投喂方式。結(jié)果表明，餌料品種中，兩種金藻（球等鞭金藻3011和Sarcinochrysis marina Geitler）不適合作為分叉小猛水蚤的餌料；兩種硅藻（小新月菱形藻和多枝舟形藻）及代用餌料可以作為分叉小猛水蚤的餌料，但需要與亞心形扁藻混合投喂才能取得理想效果；亞心形扁藻最適合作為分叉小猛水蚤的餌料，與硅藻、金藻或代用餌料混合投喂效果均非常理想。投喂方式總的來說是混合投喂優(yōu)于單獨投喂，各種餌料單獨投喂時均不能取得非常理想的效果，混合投喂時混有亞心形扁藻的任何組合都取得了非常理想的效果。

關(guān)鍵詞：單胞藻；餌料；分叉小猛水蚤（Tisbe furcata）；橈足類

海洋橈足類是一種小型低等的海洋甲殼動物，隸屬于節(jié)肢動物門，甲殼綱，橈足亞綱。橈足類種類多、數(shù)量大、分布廣，是海洋食物鏈中的一個重要環(huán)節(jié)，在海洋生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)和能量流動中起著重要作用。同時，橈足類富含高度不飽和脂肪酸，是很多魚類、蝦蟹、海馬、海蜇等水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動物人工育苗的優(yōu)質(zhì)活餌料，一直受到廣泛關(guān)注。分叉小猛水蚤（Tisbe furcata） 廣泛分布于世界近岸海域 ，該蚤為底棲種類，是海參育苗池中常見的一種敵害橈足類，同時該蚤個體較小，適應(yīng)力強，繁殖力強，短時間即可獲得大量無節(jié)幼體和成體，因此又是一種很有發(fā)展前途的餌料培育對象[1]，并且是科學(xué)研究毒性試驗中一種非常理想的受試生物。研究分叉小猛水蚤的生長繁殖、生殖量變化因素對海參的橈足類敵害生物防治、海洋經(jīng)濟(jì)動物的優(yōu)質(zhì)活餌料開發(fā)利用及毒性試驗等海洋科學(xué)研究都具有重要意義。

國外學(xué)者對分叉小猛水蚤的形態(tài)、生活史、滲透調(diào)節(jié)、室內(nèi)培育等有過研究[2-4]，國內(nèi)學(xué)者對該蚤的外部形態(tài)和發(fā)育特征、溫度鹽度對該蚤的個體生長和種群增長有較詳細(xì)研究[1，5]，餌料生物對該蚤的產(chǎn)卵量、生殖等也有研究[6]，但只研究了金藻、鹽藻等少數(shù)幾種單胞藻餌料單獨投喂的影響，而對另外的單胞藻種類沒有涉及，對單胞藻混合投喂及代用餌料效果也沒有涉及。本試驗選用易培養(yǎng)的幾種單胞藻及不受溫度光照場地等條件限制的代用餌料對分叉小猛水蚤進(jìn)行了單獨與混合投喂試驗，研究不同餌料品種及投喂方式對分叉小猛水蚤生殖量的影響，探索在人工培育中適合該蚤繁殖的餌料種類及投喂方式， 旨在為橈足類的生長繁殖研究、生物防治和大規(guī)模人工培育提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 單胞藻培養(yǎng)及代用餌料來源

選用的五種單胞藻餌料：球等鞭金藻3011 （Isochrysis galbana Parks）（金1），金藻（Sarcinochrysis marina Geitler）（金2），亞心形扁藻（Platymonas subcordiformis）（扁），小新月菱形藻（Nitzschia closterium f.minutissima）（新月）和多枝舟形藻（Navicula ramosissima）（舟），均來自遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院藻種室，于實驗室內(nèi)室溫、自然光照，氮磷鐵簡易營養(yǎng)鹽配方，燒開并冷卻的砂濾海水培養(yǎng)至對數(shù)生長期備用。

代用餌料（代餌）為三種餌料（大連蛟龍水產(chǎn)餌料開發(fā)中心產(chǎn)品）的固定組合：海參開口餌料、螺旋藻粉、海洋紅酵母。在本試驗中此三種固定組合的代用餌料被視為與單胞藻并列的單獨投喂。

1.2 試驗動物獲取

分叉小猛水蚤于2016年7月4日取自遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院海參培育槽，在實驗室內(nèi)水溫23～25 ℃，用金藻、扁藻和硅藻混合餌料培育多代后，隨機挑選健康的掛卵成熟雌體用于試驗。

1.3 試驗設(shè)計

試驗于8月9日開始，8月28日結(jié)束。試驗共設(shè)11個投喂組：單獨投喂6組（分別為金1、金2、扁、新月、舟和代餌），混合投喂5組（金1+扁；金1+新月，新月+扁，金1+代餌，扁+代餌）。單胞藻單獨投喂組日投喂量（保證蚤的餌料充足適量）：金1組與金2組均為：20×104cell/mL，扁組為：5×104 cell/mL，新月組及舟組均為：50×104 cell/mL，代餌組為：稚參餌料50 mg/L+螺旋藻粉10 mg/L+海洋紅酵母2 mg/L三種固定組合。混合投喂各組投餌量為單獨投喂時的一半。每組設(shè)3個平行，每日各組加水后投餌一次，視殘餌情況酌情補充。初始培育容器為100 mL燒杯，每杯放入挑選好的掛卵分叉小猛水蚤3只，培育水體20 mL，此后每日加水量為原水量的一半至一倍，至100 mL時轉(zhuǎn)至500 mL燒杯中繼續(xù)培育，加水至300 mL時停止加水，改為隔日換水原水量的一半，直至試驗結(jié)束，試驗用水為燒開并放涼后的消毒海水，鹽度約32‰左右，培育溫度為實驗室內(nèi)自然水溫：23～26 ℃。每隔2～3 d取樣測各組生殖量（各杯總蚤數(shù)），得到投喂不同餌料時分叉小猛水蚤生殖量變化情況。

1.4 統(tǒng)計分析方法

利用Excel和SPSS16.0軟件對試驗結(jié)束時最終獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用單因素方差分（One-Way ANOVA）檢測，并結(jié)合Tukey test進(jìn)行多重比較處理組差異，顯著水平設(shè)置為P<0.05。分析不同餌料對分叉小猛水蚤生殖量的影響。

2 結(jié)果

2.1 20 d內(nèi)投喂不同餌料時分叉小猛水蚤生殖量變化

結(jié)果見表1及圖1，培育至7 d前，各組生殖量均比較少，沒有很大差別。此后，各組生殖量出現(xiàn)明顯不同。單獨投喂各組中，扁組隨試驗時間延長生殖量一直增大直至試驗結(jié)束，最終生殖量為4 703，其余各組均在11 d時或15 d時生殖量達(dá)到最大（其中新月組在11 d時達(dá)到最大，為6 906；其次代餌組在15 d時達(dá)到最大，為6 516；再次是舟組，11 d時生殖量最大，為4 013；金2和金1兩組最大時只有606和313），然后逐漸降低至試驗結(jié)束，最終生殖量均低于扁組。混合投喂各組中，（金1+代餌）組和（金1+新月）組在15 d生殖量達(dá)到最大（分別為3 466、2 333）而后逐漸降低，最終生殖量分別為：2 566和1 630，其余各組生殖量隨試驗時間延長基本逐漸增大，直至試驗結(jié)束時，（扁+代餌）、（扁+金1）和（扁+新月）組生殖量分別達(dá)到9 720、9 484、9 446。至20 d試驗結(jié)束時，各組生殖量由大至小依次為：（扁+代餌）>（扁+金1）>（扁+新月）>扁>代餌>新月>（金1+代餌）>（金1+新月）>舟>金2>金1。其中（扁+代餌）、（扁+金1）和（扁+新月）組生殖量最大；而金2組和金1組最小（分別只有210和160），生殖量最大的是最小的45倍以上。

2.2 試驗結(jié)束時（至20 d時）不同餌料對分叉小猛水蚤生殖量的影響

結(jié)果見圖2，各組對分叉小猛水蚤的生殖量影響差異顯著，金1和金2組生殖量顯著小于其它組，而金1和金2組間差異不顯著；（扁+代餌）、（扁+金1）和（扁+新月）組生殖量顯著大于其它組，而它們?nèi)M之間差異不顯著。單獨投喂組中扁組生殖量最大，代餌組、新月組次之；混合投喂時扁藻與其它任何一種餌料混合后都表現(xiàn)出顯著高于它們單獨投喂時生殖量。而金1與代餌或新月混合時生殖量都顯著比代餌及新月單獨投喂時低。綜合來看，混合投喂優(yōu)于單獨投喂；亞心形扁藻是最適合分叉小猛水蚤的餌料品種，與其它任何餌料混合投喂均取得了理想效果，代餌與兩種硅藻可以作為分叉小猛水蚤的餌料，但需要與扁藻混合投喂才能取得理想效果；兩種金藻均不適合作為分叉小猛水蚤的餌料。

3 討論

3.1 分叉小猛水蚤的發(fā)育繁殖特點

分叉小猛水蚤雌體具有卵囊，卵在卵囊內(nèi)受精后立即開始胚胎發(fā)育，直至孵出無節(jié)幼體，水溫22～25 ℃時胚胎發(fā)育需要24～26 h，產(chǎn)幼前發(fā)育期為8～10 d[6]。本試驗是23～26 ℃條件下，試驗中觀察到被挑選出的分叉小猛水蚤掛卵雌體次日開始產(chǎn)幼，并在短時間內(nèi)可以將卵囊內(nèi)的幼體全部產(chǎn)出，每個雌體產(chǎn)幼量為幾十至上百只，產(chǎn)出的無節(jié)幼體經(jīng)過5～7 d發(fā)育成熟并掛卵；產(chǎn)幼后的雌體經(jīng)過6 d左右又可以重新掛卵。本試驗在7 d前各組的生殖量只有幾百只以內(nèi)，這是因為試驗初始時被挑選出的掛卵雌體產(chǎn)出的幼體還沒有發(fā)育成熟并產(chǎn)幼。而在7 d后幼體發(fā)育成熟并開始產(chǎn)幼，生殖量明顯開始增大。

3.2 硅藻的抑制作用及分叉小猛水蚤開口餌料的粒徑

許多研究顯示，作為橈足類最主要食物來源的硅藻，特別是高濃度硅藻會對橈足類的生長和繁殖產(chǎn)生一定的抑制作用[7-10]，試驗中兩種硅藻均在11 d時生殖量達(dá)到較大值，而后迅速減少，可能與硅藻對分叉小猛水蚤繁殖有一定的抑制作用有關(guān)。在11 d前生殖量一直增大可能因為初孵幼體還存有母體給予的營養(yǎng)物質(zhì)一直沒有被消耗掉，而在11 d后硅藻才慢慢開始開始影響分叉小猛水蚤的繁殖；試驗中扁藻組從試驗開始時至15 d內(nèi)并沒有表現(xiàn)出生殖量的優(yōu)勢，但隨培育天數(shù)增加生殖量一直增大，到試驗結(jié)束時超過所有單獨投喂的其它各組達(dá)到最大。試驗結(jié)果與李捷[11]類似，解釋為雖然粒徑大的食物（扁藻）能夠保證無節(jié)幼體最終獲得較高的存活率和發(fā)育率，但在開口攝食期卻是粒徑較小的食物（兩種硅藻）效果更佳。另外本試驗中盡管兩種硅藻在較高濃度下（50×104 cell/mL）對分叉小猛水蚤的繁殖（生殖量）有一定的抑制作用，但生殖量顯著大于粒徑也比較小的兩種金藻組，可能因為金藻的營養(yǎng)成分更不能滿足分叉小猛水蚤的繁殖需要。

3.3 分叉小猛水蚤適宜的餌料品種及投喂方式

橈足類不能自我合成生長必需的氨基酸、多不飽和脂肪酸、蛋白質(zhì)和膽固醇等化合物，必須從其攝食的餌料中獲得這些營養(yǎng)物質(zhì)來維持其生長繁殖和發(fā)育[12]，不同的餌料營養(yǎng)成分不同[13-16]，因此在其它條件相同的情況下，用不同的餌料培育分叉小猛水蚤，其生殖量不同。混合投喂有助于平衡互補分叉小猛水蚤繁殖所需營養(yǎng)。從結(jié)果看，兩種金藻（球等鞭金藻3011和Sarcinochrysis marina Geitler）單獨投喂時生殖量很低，金1與代用餌料或硅藻小新月菱形藻混合后雖然生殖量有所增大，但并不能達(dá)到較理想的數(shù)值，可能因為試驗中的兩種金藻含有不利于分叉小猛水蚤繁殖的成分，不適合作為分叉小猛水蚤的餌料；扁藻單獨投喂時，生殖量逐漸增加，試驗結(jié)束時達(dá)到最大，特別是在與其它餌料混合時生殖量均達(dá)到很大的數(shù)值，可能因為扁藻含有利于分叉小猛水蚤繁殖的營養(yǎng)成分，并且在與其它餌料混合后營養(yǎng)得到更好的補充，是最適合作為分叉小猛水蚤的餌料品種，這與張展[17]培育雙刺紡錘水蚤雌體的結(jié)果相類似，與趙文[6]培育分叉小猛水蚤時金藻是最適合的餌料的結(jié)果有所不同。扁藻與其它硅藻、金藻或代用餌料混合投喂效果最好，種群密度（單位水體總蚤數(shù)）達(dá)到30只/mL以上，是培育分叉小猛水蚤最好的投喂方式。兩種硅藻（小新月菱形藻和多枝舟形藻）和代用餌料單獨投喂時雖然在試驗中期生殖量達(dá)到較大值，但不能持續(xù)，到試驗結(jié)束時生殖量有明顯下降，新月或代餌在與扁藻混合投喂時生殖量達(dá)到很高值，說明試驗中硅藻和代用餌料可以作為分叉小猛水蚤的餌料，但最理想是與扁藻混合投喂。

3.4 代用餌料的開發(fā)利用

考慮到單胞藻的培養(yǎng)受海水、溫度、光線、場地及人工等限制，代用餌料有不受這些條件限制、成本低易獲得等優(yōu)勢，可以作為分叉小猛水蚤的較為理想的餌料品種，更值得開發(fā)利用。本次試驗只采用了有限的幾種代用餌料品種固定配比，其它更理想的代用餌料品種及配比有待于進(jìn)一步研究開發(fā)。另外，本試驗只研究了各種餌料對分叉小猛水蚤生殖量多少的影響，而對投喂不同餌料后該蚤的營養(yǎng)成分及投喂海洋經(jīng)濟(jì)動物的實際效果有待于進(jìn)一步研究。

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