GC法測定柴胡揮發(fā)油中3種成分的含量

裴曉麗，王 瑞，周 曉

（山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024）

GC法測定柴胡揮發(fā)油中3種成分的含量

裴曉麗，王 瑞，周 曉

（山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024）

●中醫(yī)藥學(xué)在世界上首先發(fā)現(xiàn)了中藥并首創(chuàng)了方劑，醫(yī)方是“除疾 保性命之術(shù)”，而劑則有“調(diào)百藥齊，和之所宜”之功。采用現(xiàn)代藥物制劑技術(shù)重新研究并升華古典方劑之術(shù)，開創(chuàng)未來藥物制劑技術(shù)和新劑型藥物研究的全新思維和方向。

目的：建立柴胡揮發(fā)油中α-蒎烯、對(duì)傘花烴和萜品油烯含量的測定方法。方法：采用水蒸氣蒸餾法與鹽析法提取柴胡中的揮發(fā)油，毛細(xì)管氣相色譜法測定柴胡中的揮發(fā)油。色譜條件：HP-5毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μ m）；采用程序升溫：初始溫度70℃，以1.5℃/min升至130℃；進(jìn)樣器溫度：250℃，檢測器（FID）溫度：250℃；分流比15∶1。結(jié)果：在本色譜條件下，柴胡揮發(fā)油中α-蒎烯、對(duì)傘花烴和萜品油烯與其他組分能得到良好分離；α-蒎烯、對(duì)傘花烴和萜品油烯分別在1.32×10-2～10.56×10-2mg/mL（r=0.991 0）、1.74×10-2～13.92×10-2mg/mL（r=0.993 5）和1.37×10-2～11.04×10-2mg/ mL（r=0.995 0）范圍呈良好線性，加樣回收率分別為97.50%、98.81%、98.17%。結(jié)論：該法簡便、準(zhǔn)確，可用于柴胡中揮發(fā)油的含量測定。

柴胡；揮發(fā)油；氣相色譜

柴胡為傘形科植物柴胡Bupleurum Chinense DC.或狹葉柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd.的干燥根，辛、苦，微寒，歸肝、膽、肺經(jīng)，有疏散退熱、疏肝解郁和升舉陽氣之功效。用于感冒發(fā)熱，寒熱往來，胸脅脹痛，月經(jīng)不調(diào)，子宮脫垂，脫肛等的治療［1］。揮發(fā)油作為柴胡主要的化學(xué)成分和活性成分，具有較高的研究價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)采用氣相色譜法對(duì)柴胡揮發(fā)油中的α-蒎烯、對(duì)傘花烴和萜品油烯進(jìn)行含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)藥材

柴胡藥材購自河北安國藥材市場，由山西中醫(yī)學(xué)院王兵老師鑒定為正品。

1.2 儀器與試劑

島津氣相色譜儀（GC-2010 E）、揮發(fā)油提取器、十萬分之一天平（梅特勒-托利多，AB135-S）；正己烷、氯化鈉（天津科密歐試劑有限公司）、α-蒎烯對(duì)照品（批號(hào)7785-26-4，Aladdin Chemistry Co.Ltd）、對(duì)傘花烴對(duì)照品（批號(hào)CAS99-87-4，東京化成工業(yè)株式會(huì)社）、萜品油烯對(duì)照品（批號(hào)T0817，梯希愛上海化成工業(yè)發(fā)展有限公司）、莰烯（批號(hào)CAS79-92-5，東京化成工業(yè)株式會(huì)社）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

HP-5毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；程序升溫：初溫70℃，以1.5℃/min升至130℃；流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量1.0 μL，分流比15∶1。氣化室溫度250℃，檢測器（FID）溫度250℃。采用內(nèi)標(biāo)法定量，內(nèi)標(biāo)物為莰烯。在此色譜條件下，柴胡揮發(fā)油中幾種待測組分的色譜峰與其他成分色譜峰達(dá)到基線分離。供試品溶液與對(duì)照品溶液的色譜圖見圖1和圖2。

圖2 對(duì)照品、內(nèi)標(biāo)物混合液GC色譜圖

2.2 揮發(fā)油的提取

取柴胡粉末50 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加入10%的氯化鈉水溶液［2］400 mL，浸泡16 h，用揮發(fā)油提取器回流20 h，得揮發(fā)油，將所得的揮發(fā)油加正己烷定容至0.4 mL，即得揮發(fā)油的供試品溶液。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取α-蒎烯、對(duì)傘花烴和萜品油烯對(duì)照品適量，分別用正己烷溶解并制成濃度為1.32 mg/mL、1.74 mg/mL和1.38 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.4 內(nèi)標(biāo)物的制備

精密稱取莰烯適量，用正己烷溶解并制成濃度為2.4 mg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性范圍 精密吸取上述各對(duì)照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL和0.8 mL，分別置5個(gè)10 mL的量瓶中，同時(shí)分別加入上述內(nèi)標(biāo)物溶液0.4 mL，用正己烷定容至刻度，制成5個(gè)不同濃度的對(duì)照品混合溶液與內(nèi)標(biāo)物的混合溶液。按2.1所述色譜條件測定，以進(jìn)樣濃度（X）為橫坐標(biāo)，A對(duì)照/A內(nèi)標(biāo)峰面積之比（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到各組分回歸方程。α-蒎烯線性回歸方程為Y=1.068 1X-0.509 4，相關(guān)系數(shù)為0.991 0，線性范圍為1.32×10-2～10.56×10-2mg/mL。對(duì)傘花烴回歸方程為Y=1.074 4X-0.348 3，相關(guān)系數(shù)為0.993 5，線性范圍為1.74×10-2～13.92×10-2mg/mL。萜品油烯回歸方程為Y=1.051 8X-0.556 3，相關(guān)系數(shù)為0.995 0，線性范圍為1.37×10-2～11.04×10-2mg/mL。

2.5.2 精密度試驗(yàn) 取柴胡（2016安國地產(chǎn)）粉末50 g，精密稱定，按照“2.2”項(xiàng)下方法制備揮發(fā)油供試品溶液，精密加入內(nèi)標(biāo)物溶液莰烯16 μL，混合均勻，進(jìn)樣1.0 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，分別得各組分峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值，α-蒎烯、對(duì)傘花烴和萜品油烯的RSD分別為2.45%、2.03%和1.68%（n=6）。表明儀器精密度良好。

2.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取柴胡（2016安國地產(chǎn)）粉末50 g，精密稱定，按照“2.2”項(xiàng)下方法制備揮發(fā)油供試品溶液，精密加入內(nèi)標(biāo)物溶液莰烯16 μL，混合均勻，分別于0 h，2 h，4 h，6 h，8 h，10 h進(jìn)樣1.0 μL，計(jì)算各組分峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比，結(jié)果RSD分別為2.09%、1.85%和1.64%（n=6）。表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取柴胡（2016安國地產(chǎn)）粉末50 g，精密稱定，按照“2.2”項(xiàng)下方法平行制備揮發(fā)油供試品溶液6份，各精密加入內(nèi)標(biāo)物溶液莰烯16 μL，混合均勻，分別進(jìn)樣1.0 μL，在上述色譜條件下測得α-蒎烯、對(duì)傘花烴和萜品油烯的含量平均值分別為3.82×10-3mg/g（RSD值為2.56%）、4.39×10-3mg/g（RSD值為2.11%）和11.04× 10-3mg/g（RSD值為1.85%）。結(jié)果表明，該方法的重復(fù)性良好。

2.5.5 回收率試驗(yàn) 取9份已知含量的內(nèi)蒙野生柴胡粉末50 g，精密稱定，按照“2.2”項(xiàng)下方法制備揮發(fā)油供試品溶液，精密加入內(nèi)標(biāo)物溶液莰烯16 μL，再分別精密加入高、中、低3種濃度的各自對(duì)照品溶液，搖勻。按2.1所述色譜條件進(jìn)樣測定，并計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率測定表 （n=9）

3 樣品測定

分別取不同產(chǎn)地柴胡粉末50 g，精密稱定，按照“2.2”項(xiàng)下方法制備揮發(fā)油供試品溶液，精密加入內(nèi)標(biāo)物溶液莰烯16 μL，混合均勻，按2.1所述色譜條件進(jìn)樣測定。不同產(chǎn)地柴胡中3種組分含量見表2。

表2 不同產(chǎn)地柴胡中3種揮發(fā)油成分的含量（×10-3mg/g）

4 討 論

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，柴胡揮發(fā)油中α-蒎烯、對(duì)傘花烴和萜品油烯的含量均不高，新樣品與舊樣品揮發(fā)油量差異明顯。由于柴胡中揮發(fā)油的含量較少，約占0.15%［3］，且提取過程中受溫度的影響較大，極易揮發(fā)，對(duì)揮發(fā)油的提取造成了一定的困難。本次實(shí)驗(yàn)通過采用水蒸氣蒸餾法與鹽析法結(jié)合的方式提取揮發(fā)油，增強(qiáng)了揮發(fā)油的析出程度。在柴胡浸提時(shí)間的選擇上主要通過觀察揮發(fā)油提取器中揮發(fā)油的顏色判斷，當(dāng)提取時(shí)間為20 h時(shí)，揮發(fā)油顏色呈橙黃色，提取時(shí)間過長時(shí)，揮發(fā)油顏色加深，變?yōu)樯詈稚踔廉a(chǎn)生沉淀，發(fā)生變質(zhì)［4］。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典一部［S］.北京：中國中醫(yī)藥科技出版社，2015：198.

［2］林燁，張軍，席曉榮.正交法優(yōu)化柴胡揮發(fā)油測定方法［J］.中國實(shí)用醫(yī)藥，2009，4（6）：54-55.

［3］李秀琴，孫秀燕，何仲貴，等.柴胡揮發(fā)油提取方法的研究［J］.中國藥學(xué)雜志，2004，39（2）：103-105.

［4］韓毅麗，張海波，元倩倩，等.不同產(chǎn)地柴胡揮發(fā)油中有效成分的氣相色譜研究［J］.山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，15（5）：39.

（編輯：梁葆朱）

Determination of component contents of volatile oil from bupleurum by GC

Pei Xiaoli，Wang Rui，Zhou Xiao
（Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To establish a method for the determination of α-pinene，p-cymene and terpinolene in bupleurum volatile oil.Methods：Volatile oil in bupleurum was extracted by steam-distilation and salting and their contents were determined by GC.GC was conducted on HP-5 capillary column（30 m×0.25 mm，0.25 μm）.Temperature program：the initial temperature was set at 70℃，then increased to 130℃at 1.5℃/min.The temperature of inject and FID detector was 250℃and the split ratio was 15∶1.Results：α-pinene，p-cymene and terpinolene in bupleurum volatile oil were separated from other constituents under the chromatographic conditions.The linear range of α-pinene，p-cymene and terpinolene were respectively 1.32×10-2～10.56×10-2mg/mL（r=0.991 0）、1.74×10-2～13.92×10-2mg/mL（r=0.993 5）and 1.37×10-2～11.04×10-2mg/mL（r=0.995 0）.Their recovery rates were respectively 97.50%，98.81%and 98.17%.Conclusion：This method is simple，accurate and suitable for the determination of component contents of volatile oil in bupleurum.

bupleurum；volatile oil；GC

R284.2

A

1671-0258（2017）02-0022-03

山西省教育廳科技研究開發(fā)項(xiàng)目（20111113）；山西中醫(yī)學(xué)院博士基金項(xiàng)目

裴曉麗，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，E-mail：peixl@sina.com

王瑞，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail：wrgreentea@163.com