HLA-B27在疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者中的檢測(cè)與分析

王師，王楚，車(chē)艷紅，張琦，張火兵，童能勝

（1.北京中同藍(lán)博臨床檢驗(yàn)所，北京100076；2.中國(guó)康復(fù)研究中心北京博愛(ài)醫(yī)院脊柱脊髓神經(jīng)功能重建科，北京100068）

HLA-B27在疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者中的檢測(cè)與分析

王師1，王楚2，車(chē)艷紅1，張琦1，張火兵1，童能勝1

（1.北京中同藍(lán)博臨床檢驗(yàn)所，北京100076；2.中國(guó)康復(fù)研究中心北京博愛(ài)醫(yī)院脊柱脊髓神經(jīng)功能重建科，北京100068）

目的通過(guò)檢測(cè)疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者HLA-B27（human leucocyte antigen-B27，人類(lèi)白細(xì)胞抗原-B27）的表達(dá)情況，探討HLAB27在疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者中的分布及相關(guān)的臨床意義。方法選取1 009例疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者為研究對(duì)象，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)的方法檢測(cè)外周血中HLA-B27的表達(dá)情況。結(jié)果在1 009例疑似患者中，男497例，其中HLA-B27陽(yáng)性患者為102例，占20.5%；女512例，其中HLAB27陽(yáng)性患者為63例，占12.3%，男性明顯高于女性（P＜0.05）。20～40歲年齡階段的HLA-B27陽(yáng)性患者占63.3%，高于其他年齡階段（P＜0.05）。結(jié)論在疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者中，男性青壯年HLA-B27陽(yáng)性率較高，HLA-B27的檢測(cè)有助于強(qiáng)直性脊柱炎的早期診斷。

HLA-B27；強(qiáng)直性脊柱炎；流式細(xì)胞術(shù)

HLA(human leucocyte antigen)-B27屬于主要組織相容性復(fù)合（major histocompatibility complex，MHC）I型分子,它是由重鏈和微球蛋白以及組裝在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的抗原肽組成，表達(dá)于所有的真核細(xì)胞表面，研究表明：淋巴細(xì)胞中高表達(dá)的HLA-B27參與多種疾病的發(fā)生過(guò)程[1]。強(qiáng)直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是一種以胸、頸、腰段的脊柱韌帶和關(guān)節(jié)以及骶髂關(guān)節(jié)等部位炎癥引起的疼痛為特征的炎癥性的自身免疫性疾病，它多發(fā)生于青年和中年人群中的一種疾病，起病隱襲，病程較長(zhǎng)，容易造成患者不可逆的脊柱關(guān)節(jié)受損，在發(fā)病的早期難以精準(zhǔn)的診斷[2-3]。目前臨床上對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎的診斷主要是通過(guò)計(jì)算機(jī)斷層掃描（computer tomography，CT），但是這種診斷具有滯后性，即患者從發(fā)生癥狀到臨床確診往往會(huì)滯后三到五年，延誤了疾病的治療。研究發(fā)現(xiàn)，強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)生與HLA-B27的異常表達(dá)有著密切的關(guān)系，因此，HLA-B27的檢測(cè)在強(qiáng)直性脊柱炎的早期診斷中具有重要的意義，是臨床診斷和鑒別診斷強(qiáng)直性脊柱炎的重要參考指標(biāo)[4-6]。本文采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)本檢驗(yàn)所收到的1 009例疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者的血液樣本進(jìn)行的HLA-B27表面抗原的檢測(cè)，以了解京津冀地區(qū)不同性別和年齡階段疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者中HLA-B27的表達(dá)情況，并對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎患者的早期診斷提供重要的臨床參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選擇1 009例2016年1月～2016年11月京津冀地區(qū)醫(yī)院送檢到本檢驗(yàn)所疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者的外周血樣本，其中男497例，女512例；年齡1～80歲，平均年齡（35.4±13.8）歲。

1.2 主要儀器與試劑儀器為BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD Biosciense Becton,Dickinson and Company）。主要試劑：BD Calibrte 3-color kit；HLA-B27檢測(cè)試劑盒（流式細(xì)胞法），試劑盒內(nèi)的試劑主要為HLA-B27-FITC(luoresceinisothiocyanate)/CD3-PE(phycoerythrin)流式抗體，HLA-B27 Calibrte beads，10×HLA-B27 BD FACS Lysing Solution；鞘液；FACS Clean液。以上試劑均購(gòu)于美國(guó)BD Biosciense Becton,Dickinson and Company。

1.3 方法根據(jù)試劑盒提供的檢測(cè)方法進(jìn)行操作，將30 μLHLA-B27-FIT/CD3-PE抗體與50μL外周血共孵育15 min，加入2 mL稀釋好的1×HLA-B27 BD FACS Lysing Solution溶血素，10 min后300 g離心5 min去上清，加入2 mL流式清洗液300 g離心5 min去上清，加入300μL 1%多聚甲醛溶液混勻后按儀器操作規(guī)程進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0進(jìn)行對(duì)獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析與處理，計(jì)數(shù)資料采用率（%）來(lái)表示，計(jì)數(shù)資料間的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HLA-B27在疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者不同性別之間表達(dá)情況在1 009例疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者的標(biāo)本中，HLA-B27陽(yáng)性患者為165例（16.4%），HLA-B27陰性患者為844例（83.6%）。男性疑似患者為497例，其中HLA-B27陽(yáng)性患者為102例（20.5%）；女性疑似患者為512例，其中HLA-B27陽(yáng)性患者為63例（12.3%）。在HLA-B27陽(yáng)性疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者中，男性明顯多于女性（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 不同性別患者HLA-B27表達(dá)情況Table 1Expression of HLA-B27 in patients with different gender

2.2 HLA-B27在疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者不同年齡階段之間表達(dá)情況在不同年齡階段統(tǒng)計(jì)分析中，疑似強(qiáng)直性脊柱炎陽(yáng)性患者HLA-B27陽(yáng)性主要集中在20～40歲年齡階段（P＜0.05）。男性患者20～40歲年齡階段HLA-B27陽(yáng)性占到66.7%，明顯高于其他年齡階段（P＜0.05）；同樣在女性患者20～40歲年齡階段HLA-B27陽(yáng)性占到57.7%，明顯高于其他年齡階段（P＜0.05）。其次，40～60歲年齡階段的患者HLAB27陽(yáng)性也高于其他兩個(gè)年齡階段（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 不同年齡階段患者HLA-B27表達(dá)情況[n（%）]Table 2Expression of HLA-B27 in different age groups of patients [n（%）]

3 討論

強(qiáng)直性脊柱炎作為一種慢性自身免疫學(xué)疾病，發(fā)病初期比較隱蔽，病程較長(zhǎng)，一旦確診即為中后期，對(duì)脊柱和關(guān)節(jié)造成不可逆轉(zhuǎn)的損害。強(qiáng)直性脊柱炎會(huì)造成椎間盤(pán)的鈣化和骨化，患者中后期會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的關(guān)節(jié)強(qiáng)直以及脊柱畸形，發(fā)病十年內(nèi)就可以造成患者嚴(yán)重的不可逆轉(zhuǎn)的關(guān)節(jié)功能障礙，致殘率較高[7]。這種疾病常發(fā)生于青壯年人群中，發(fā)病初期表現(xiàn)為骨關(guān)節(jié)處的疼痛，與很多炎癥性疾病相似，無(wú)明顯的骨骼炎癥性變化，致使其早期很難通過(guò)計(jì)算機(jī)斷層掃描確診，也容易被誤診為其他關(guān)節(jié)疾病。因此，強(qiáng)直性脊柱炎的早期診斷尤為重要[8-10]。

目前強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，研究發(fā)現(xiàn)，HLA-B27的表達(dá)與強(qiáng)直性脊柱炎有著密切的關(guān)系。HLA-B27是一類(lèi)表達(dá)于所有有核細(xì)胞上的MHC I類(lèi)分子，參與多種細(xì)胞信號(hào)傳遞與免疫調(diào)控，與強(qiáng)直性脊柱炎有著明顯的相關(guān)性[11]。在強(qiáng)直性脊柱炎患者中，約90%的患者表現(xiàn)為HLAB27陽(yáng)性，而在正常人群中，HLA-B27陽(yáng)性只占5%左右，但在我國(guó)，強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)病率約為0.3%，即約6%HLA-B27陽(yáng)性人群會(huì)患有強(qiáng)直性脊柱炎[12]。

本研究結(jié)果顯示，在京津冀地區(qū)的疑似患強(qiáng)直性脊柱炎患者中，男女比例約為1：1，HLA-B27陽(yáng)性患者為占16.4%；在HLA-B27陽(yáng)性患者中，HLA-B27陽(yáng)性男性患者在男性患者中所占的比例為20.5%，HLA-B27陽(yáng)性女性患者在女性患者中所占的比例僅為12.3%，男性明顯多于女性，具有顯著差異，表明京津冀地區(qū)疑似會(huì)強(qiáng)直性脊柱炎患者中強(qiáng)直性脊柱炎的患者男性可能會(huì)多于女性。在疑似會(huì)強(qiáng)直性脊柱炎患者中，20～40歲年齡階段的HLA-B27陽(yáng)性患者（63.3%）高于其他年齡階段，預(yù)示著強(qiáng)直性脊柱炎在青壯年人群中的發(fā)病率會(huì)明顯高于其他階段。在臨床診斷中，利用流式細(xì)胞術(shù)方便、快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)對(duì)疑似會(huì)強(qiáng)直性脊柱炎患者檢測(cè)HLAB27，從而能實(shí)現(xiàn)對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎的早期診斷。對(duì)于強(qiáng)直性脊柱炎患者，在發(fā)病早期，骶髂關(guān)節(jié)出現(xiàn)炎癥之前，X光片或者計(jì)算機(jī)斷層掃描都難以確診強(qiáng)直性脊柱炎，因此，對(duì)于疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者進(jìn)行HLA-B27檢測(cè)為強(qiáng)直性脊柱炎的早期診斷提供了新的思路并具有重要的臨床參考價(jià)值，對(duì)于HLA-B27陽(yáng)性患者給予相應(yīng)的治療，就能夠預(yù)防髖關(guān)節(jié)和強(qiáng)直脊柱強(qiáng)直等強(qiáng)直性脊柱炎并發(fā)癥，從而避免對(duì)造成脊柱不可逆的損傷[13-14]。由于本研究缺少進(jìn)一步的臨床癥狀表現(xiàn)和最終的確診結(jié)果，HLA-B27陽(yáng)性在男女間以及不同年齡階段間的分布雖有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但并不能直接表明疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者HLA-B27陽(yáng)性與患有強(qiáng)直性脊柱炎具有一一相對(duì)應(yīng)的關(guān)系，HLA-B27陽(yáng)性與強(qiáng)直性脊柱炎的確切的關(guān)系還有待進(jìn)一步研究。

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Detection and analysis of HLA-B27 in patients with suspected ankylosing spondylitis

Wang Shi1，Wang Chu2，Che Yan-hong1，Zhang Qi1，Zhang Huo-bing1,Tong Neng-sheng1
(1.Beijing CIC Clinical Laboratory,Beijing，100076,China；2.Department of Spinal and Neural Function Reconstruction,China Rehabilitation Research Center,Beijing Boai Hospital,Beijing，100068,China)

ObjectiveTo detect the expression of HLA-B27 in patients with suspected ankylosing spondylitis,and then to explore the distribution and clinical value of HLA-B27.MethodsA total of 1 009 patients with suspected ankylosing spondylitis were enrolled in this study,flow cytometry was performed to detect the positive expression of HLA-B27 in peripheral blood.ReslutsAmong all patients,the rate of positive HLAB27 in male patients(n=497)was 20.5%(102cases),while the rate of positive HLA-B27 in female patients(n=512)was 12.3%(63cases).The rate of positive HLA-B27 in male patients was significantly higher than females patients.The rate of positive HLA-B27 patients at the age of 20-40 was higher than the patients with other age stages(P＜0.05).ConclusionIn patients with suspected ankylosing spondylitis,the highest rate of positive HLA-B27 was found in young adults,this study was essential for the early diagnosis of ankylosing spondylitis.

HLA-B27;Ankylosing Spondylitis;Flow Cytometry

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.18.013

共同第一作者：王師，王楚

張火兵，E-mail：zhanghuobing2010@163.com；童能勝，E-mail：tnsh8656@163.com