性腺激素釋放激素激動劑對子宮內膜異位癥在位及異位內膜細胞凋亡的影響

李靜,石巍，魏曼

(鄭州大學第三附屬醫院婦產科,河南鄭州450052)

性腺激素釋放激素激動劑對子宮內膜異位癥在位及異位內膜細胞凋亡的影響

李靜,石巍，魏曼

(鄭州大學第三附屬醫院婦產科,河南鄭州450052)

目的分析子宮內膜異位癥在位及異位內膜細胞凋亡受到性腺激素釋放激素激動劑的影響。方法以30例子宮內膜異位癥患者為研究對象，均給予體外培養，并利用不同濃度的性腺激素釋放激素激動劑處理在位細胞和異位細胞，觀察細胞生長及細胞凋亡受到性腺激素釋放激素激動劑的影響情況。結果子宮內膜異位癥在位細胞核異位細胞生長率與性腺激素釋放激素激動劑濃度及作用時間呈反比。性腺激素釋放激素激動劑作用24 h后，高濃度在位、異位細胞凋亡率均高于低濃度，差異具有統計學意義（P＜0.05）。結論子宮內膜異位癥在位及異位內膜細胞在性腺激素釋放激素激動劑作用下加速凋亡，可促進患者康復。

性腺激素釋放激素激動劑；子宮內膜異位癥；細胞凋亡

子宮內膜異位癥為臨床常見病，多發于育齡期女性，內膜異位至盆腔腹膜為主要發病部位，卵巢、輸尿管等也可發病。研究顯示，合并不孕癥的患者約占子宮內膜異位癥患者的30%，嚴重影響患者的生活質量[1]。臨床治療子宮內膜異位癥時，多采用手術方式，而在控制病情進展、減少術后復發方面，藥物治療具有重要作用，本研究中以收治的子宮內膜異位癥患者為研究對象，體外培養在位及異位內膜細胞，并給予性腺激素釋放激素激動劑，觀察期對細胞凋亡的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料以本院2014年10月～2015年10月收治的子宮內膜異位癥患者30例為研究對象，年齡29～43歲，平均（36.7±2.3）歲。納入標準：均給予手術治療，術前未接受激素治療，無其他婦科合并癥，經病理學檢查明確。

1.2 方法

1.2.1 內膜細胞培養方法術中，每名患者均收治典型卵巢異位內膜病灶、子宮在位內膜，用于體外培養，培養方法為組織塊消化法。剪碎組織，在37℃下，利用0.1%Ⅳ型膠原酶笑話，時間為2～3 h，完成后，離心細胞，在細胞培養瓶中接種，培養液選擇為改良杜氏伊格爾培養基（內含胎牛血清10%、谷氨酸10 mmol/L、胰島素0.1 U/mL、青霉素及鏈霉素各100 mg/mL），培養時間12 h，之后利用倒置顯微鏡進行1次細胞形態觀察，24 h后，培養液更換，內膜細胞如未貼壁，直接剔除，以后培養液更換時間為2～3 d，細胞平的80%～90%被細胞鋪滿時，開始傳代培養。

1.2.2 細胞增殖活性檢測方法內膜細胞增殖活性利用四甲胺偶氮唑藍比色法（MTT）檢測。首先，制動單細胞懸液，同樣采用改良杜氏伊格爾培養基進行，內膜細胞進入到對數生長期后，在96孔培養板中接種內膜細胞，每孔接種密度為1×104個，完成后，于CO2培養箱中放置培養板，進行24 h培養。其次，加入性腺激素釋放激素激動劑，劑量濃度分別為100 ng/mL、200 ng/mL，每個濃度中，包含空白孔、對照孔、3個平行孔，培養時間分別為12 h、24 h、36 h、48 h，完成后，將20μLMTT溶液（5 mg/mL）加入到每個孔中，在37℃下，將其放置在培養箱中，繼續4 h，培養終止，孔內上清液去除，再將二甲基亞砜150μL加入到每個孔中，振蕩10 min，充分溶解藍紫色結晶物。最后，利用MTT比色，波長570 nm，利用酶聯免疫檢測儀，將各孔吸光度（A）值測定。

1.2.3 細胞凋亡率檢測方法細胞凋亡檢測利用AnnexinV-FITC/PI，利用胰酶消化培養24 h后不同濃度的各孔中的細胞，洗滌液為磷酸緩沖液，洗滌次數2次，細胞混勻采用AnnexinV-FITC/PI與緩沖液進行，并記錄細胞數量，細胞濃度調整為1×104/mL，將AnnexinV-FITC溶液5μL、PI溶液10μL分別加入到100μL懸浮細胞中，室溫下，進行15 min孵育，避免光照，將磷酸緩沖液混勻細胞400μL加入，數據應用流式細胞儀檢測。

1.3 統計學方法采用SPSS18.0統計分析，計數資料利用χ2檢驗，P＜0.05表明差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 內膜細胞培養結果由體外培養結果可知，30例患者中，成功培養在位內膜細胞29例，成功率96.7%；成功培養異位內膜細胞24例，成功率80.0%。

2.2 在位、異位內膜細胞生長率受性腺激素釋放激素激動劑影響情況由細胞增殖活性檢測結果可知，性腺激素釋放激素激動劑濃度越高、培養時間越長時，細胞生長率越低。見表1。

表1 在位、異位內膜細胞生長率受性腺激素釋放激素激動劑影響情況（%）

2.3 在位、異位內膜細胞凋亡率受性腺激素釋放激素激動劑影響情況由細胞凋亡率檢測結果可知，性腺激素釋放激素激動劑濃度為100 ng/mL時，在位、異位細胞凋亡率均低于濃度為200ng/mL時，差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 在位、異位內膜細胞凋亡率受性腺激素釋放激素激動劑影響情況（%）

3 討論

近年來，人們的生活方式發生了比較大的改變，由此提高了子宮內膜異位癥的發病率。子宮內膜異位癥多見于育齡期女性，癥狀表現為痛經、性交痛、不孕等，對患者身體健康及生活質量產生比較大的影響。臨床治療子宮內膜異位癥時，多給予患者手術治療，可將病灶組織有效的清除，并解除盆腔粘連，但深層浸潤病灶無法清除，導致殘留病灶組織，提高了術后復發率，影響患者術后妊娠[2]。

隨著子宮內膜異位癥治療水平的提升，臨床中開始較為廣泛的應用性腺激素釋放激素激動劑，取得了良好的治療效果。性腺激素釋放激素激動劑在多種激素依賴性疾病中均有較好的療效，通常認為，促性腺激素釋放激素受體在此種藥物的作用下受到調節，從而顯著降低促性腺激素以及雌激素水平，發揮間接性的療效[3]。近年研究顯示，除了下丘腦一垂體軸外，病變組織以及正常組織中也有促性腺激素釋放受體的表達。

細胞凋亡中，凋亡刺激信號作用于有核細胞中，將細胞內的死亡機制啟動，促使細胞發生程序性的變性及壞死。子宮內膜細胞的凋亡可自發性進行，說明內膜組織的結構及功能正常，當患者患有子宮內膜異位癥時，內膜組織的結構及功能受到影響發生異常，從而影響內膜細胞的自發性凋亡，造成患者病情進展[4]。研究發現，子宮內膜異位癥患者內膜中的各個調控蛋白發生變化時，在位內膜細胞的凋亡特性也會發生相應的改變[5]。子宮內膜細胞處于增生期時，會增加Bel-2蛋白表達，與正常子宮內膜細胞相比，Bel-2/bax蛋白比值更高，提高了內膜細胞抵抗凋亡刺激信號的能力，降低內膜細胞凋亡率；內膜細胞處于分泌期時，盡管會降低Bel-2蛋白表達，而且不會明顯提高Bax蛋白，但與正常分泌期內膜細胞相比，Bel-2/bax蛋白比值依然比較高，從而抑制細胞凋亡[6]。經由本研究的結果可知，子宮內膜異位癥患者在位內膜細胞及異位內膜細胞的凋亡率均會受到性腺激素釋放激素激動劑的影響，而且性腺激素釋放激素激動劑的濃度越高時，細胞凋亡率越高，這說明，性腺激素釋放激素激動劑的濃度與子宮內膜異位癥在位及異位細胞凋亡率之間成正比。綜上所述，子宮內膜異位癥患者在位、異位內膜細胞增殖活性隨著性腺激素釋放激素激動劑濃度及培育時間的增加而降低，細胞凋亡率則隨之升高，表示子宮內膜細胞凋亡與性腺激素釋放激素激動劑之間關系密切，臨床治療子宮內膜異位癥患者時，可給予患者促性腺激素釋放激素激動劑藥物，以提升治療效果。

[1]王小霞，康佳麗，邵雪飛，等.GnRHa對子宮腺肌病在位內膜細胞凋亡及VEGF分泌的影響[J].細胞與分子免疫學雜志，2012，28（1）：72-75.

[2]王麗.子宮內膜異位癥不孕患者腹腔鏡術后應用促性腺激素釋放激素激動劑對妊娠影響研究[J].現代診斷與治療，2014，25（10）：2226-2227.

[3]佟玉.促性腺激素釋放激素激動劑對子宮內膜異位癥不孕患者遠期妊娠率的影響[J].中國現代藥物應用，2016，10（4）：187-188.

[4]余莎，謝梅青.GnRH-a對內異癥在位子宮內膜細胞HOXA10表達的影響[J].海南醫學院學報，2016，22（3）：225-228.

[5]黃鳳英，王煥萍，伍媚，等.GnRHⅡ與GnRHⅠa對子宮內膜異位癥患者離體間質細胞增殖抑制的影響[J].中南大學學報(醫學版)，2011，36（6）：554-558.

[6]洪湘蘭.GnRHa對子宮內膜異位癥術后的療效觀察[J].當代醫學，2012，18（36）：54-55.