埃索美拉唑鈉的微生物限度方法研究

鄭 露

重慶市食品藥品檢驗檢測研究院、重慶市藥物過程與質量控制工程技術研究中心，重慶 401121

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埃索美拉唑鈉的微生物限度方法研究

鄭 露

重慶市食品藥品檢驗檢測研究院、重慶市藥物過程與質量控制工程技術研究中心，重慶 401121

目的：建立通過驗證的埃索美拉唑鈉的微生物限度檢測方法。方法：用薄膜過濾加200mL pH7.0的無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗的方法檢查該品需氧菌總數，用常規培養法檢查該品霉菌和酵母菌總數；直接薄膜過濾法檢查控制菌大腸埃希菌。結果：對埃索美拉唑鈉進行微生物限度檢查可用薄膜過濾法。結論：應優先采用薄膜過濾法，以去除埃索美拉唑鈉的抑菌效力，為其微生物檢驗方法的確立提供了實驗室檢測根據。

埃索美拉唑鈉；微生物限度；方法學驗證

埃索美拉唑鈉是治療胃食管反流病等酸相關疾病的首選藥物，抑酸效率很高且持續時間長，有可能有一定的抑菌作用[1]，按照2015年版《中國藥典》四部[2]規定，對其微生物限度檢查時要有必要的方法進行適用性試驗。因此筆者進行了埃索美拉唑鈉的微生物限度方法適用性試驗，并對結果進行分析如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 SHH-250LD生化培養箱(重慶四達)、HVA-110高壓滅菌器(日本HIRAYAMA)、5A10003電子天平(上海越平科技儀器有限公司)、MZ-301微生物限度儀(美卓生物科技有限公司)。

1.2 樣品 埃索美拉唑鈉(福安藥業股份有限公司)。1.3 菌種 金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、銅綠假單胞菌[CMCC(B)10104]、枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]、黑曲霉[CMCC(F)98003]、大腸埃希菌[CMCC(B)44102]均由中國藥品生物制品檢定所提供。

1.4 培養基 胰酪大豆胨液體培養基、胰酪大豆胨瓊脂培養基、沙氏葡萄糖瓊脂培養基、麥康凱液體培養基、麥康凱瓊脂培養基。以上培養基由北京三藥科技開發公司提供。

2 方法與結果

2.1 菌液制備 取經35℃培養18～24 h的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌液體培養物分別用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋成適宜濃度的菌懸液。取經25℃培養18～24 h的白色念珠菌液體培養物用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋成適宜濃度的菌懸液。取經25℃培養6天的黑曲霉菌斜面培養物，加入含0.05%(mL/mL)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后吸出懸液(用管口帶有薄的無菌棉花或紗布能過濾菌絲的無菌毛細吸管至無菌試管內)，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的孢子懸液。

2.2 供試液的制備 精密稱取樣品10g，加pH7.0 NaCl-蛋白胨緩沖液至100mL使濃度成1:10的澄明供試液。2.3 驗證方法 按照《中國藥典》2015年版[1]四部通則1105、1106微生物限度檢查法進行微生物限度方法適用性檢查，采用常規法、薄膜過濾法、以及薄膜過濾加沖洗液沖洗的方法驗證。

2.4 需氧菌總數計數驗證 進行3次獨立的平行試驗，并分別計算每種菌每個方法的回收率。

2.4.1 常規法 取供試液1mL和2.1項下制備的菌懸液1mL同時加入平皿中，倒入胰酪大豆胨瓊脂培養基35℃培養，同時按照相同的方法測試所加入試驗菌的菌數，計算回收率。

2.4.2 過濾法 取供試液1mL和2.1項下制備的菌懸液1mL混勻，薄膜過濾，倒入胰酪大豆胨瓊脂培養基35℃培養，同時按照相同的方法測試所加入試驗菌的菌數，計算回收率。2.4.3 過濾加沖洗法 取供試液1mL薄膜過濾，過濾完畢，用100、200、400mL pH7.0的無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗，在最后一次的沖洗液中加入2.1項下的試驗菌懸液1mL混勻，過濾。倒入胰酪大豆胨瓊脂培養基35℃培養，同時按照相同的方法測試所加入試驗菌的菌數，計算回收率。

2.4.4 結果 回收率計算公式：各菌株回收率={[(試驗組菌數—供試液對照組菌數)]}÷菌液組菌數×100%。

由表1可知，常規法檢查時，金葡、銅綠和枯草的試驗回收率很低，達不到藥典要求。由表1、表2可知，枯草芽孢桿菌對該品種的藥品較為敏感，因此過濾加沖洗法只采用了枯草芽孢桿菌進行驗證。結果詳見表1、表2、表3。

表1 常規法三次獨立試驗回收率結果

表2 過濾法三次獨立試驗回收率結果

表3 過濾加沖洗法三次獨立試驗回收率結果

2.5 霉菌和酵母菌總數驗證

2.5.1 方法 方法同上2.4.1中的常規法驗證，25℃培養，進行3次獨立的平行試驗。

2.5.2 結果 常規法驗證結果見表4。

表4 霉菌和酵母菌總數方法適用性試驗

2.6 控制菌大腸埃希菌驗證2.6.1 試驗組方法 ①取1∶10供試液10mL與每1mL含菌量不大于100 cfu大腸埃希菌同時加入于100mL胰酪大豆胨液體培養基中，按《中國藥典》2015年版四部通則1106微生物限度檢查法中控制菌檢查：大腸埃希菌檢查方法進行檢查。②取1∶10供試液10mL與每1mL含菌量不大于100 cfu大腸埃希菌混勻，薄膜過濾，將膜取下加入于100mL胰酪大豆胨液體培養基中，按《中國藥典》2015年版四部通則1106微生物限度檢查法中控制菌檢查：大腸埃希菌檢查方法進行檢查。

2.6.2 樣品組方法 取1∶10供試液10mL加入于100mL胰酪大豆胨液體培養基中，按《中國藥典》2015年版四部通則1106微生物限度檢查法中控制菌檢查：大腸埃希菌檢查方法進行檢查。

2.6.3 陽性對照方法 將1mL含菌量不大于100 cfu大腸埃希菌加入于100mL胰酪大豆胨液體培養基中，按《中國藥典》2015年版四部通則1106微生物限度檢查法中控制菌檢查：大腸埃希菌檢查方法進行檢查。

2.6.4 陰性對照 取稀釋液10mL加入于100mL胰酪大豆胨液體培養基中，按《中國藥典》2015年版四部通則1106微生物限度檢查法中控制菌檢查：大腸埃希菌檢查方法進行檢查。

2.6.5 結果 大腸埃希菌驗證結果詳見表5。

表5 控制菌大腸埃希菌方法適用性試驗

注：“—”表示無菌生長； “+”表示試驗菌生長良好；陽性對照組均生長良好，陰性對照組均無菌生長。

3 討論

產品按《中國藥典》(2015年版)[2]四部通則1105、1106微生物限度檢查法進行微生物限度方法適用性檢查，結果表明可用薄膜過濾，用200mL pH7.0的無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗的方法檢查本品需氧菌總數，用常規培養法檢查本品霉菌和酵母菌總數，控制菌大腸埃希菌的檢查用直接薄膜過濾法可行。

埃索美拉唑鈉為抑制胃酸過多的一款首選藥物，關于它的微生物限度方法學研究還沒有見到相關的報到，此次研究表明其具有一定的抑菌作用，與劉志武等[3]關于注射用埃索美拉唑鈉的研究結果相符。另外，在對其進行微生物檢測時要用一定的方法去除其抑菌效力。研究為埃索美拉唑鈉的微生物檢驗方法的確立提供了實驗室檢測依據。

[1]李潔.埃索美拉唑與其他類質子泵抑制劑抑酸效果比較研究[J].食品與藥品, 2012, 14(7): 281-282.

[2]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(四部)[S].北京: 中國醫藥科技出版社,2015:1105-1106.

[3]劉志武，武會芝，王霞，等. 注射用埃索美拉唑鈉無菌及細菌內毒素檢查方法學的研究[J].中國藥業指南,2014,12(22):10-11.

投稿注意事項

表和圖：分別按其在文中出現的先后順序連續編碼，并按先見文后見表(圖)的原則排列。每幅表(圖)均應冠有表(圖)題，說明性的文字應置于表(圖)下方的注釋中，本刊采用三線表(頂線、表頭線、底線)。

Validation of Microbial Limit Study of Esomeprazole Sodium

ZHENG Lu

Chongqing Institute for Food and Drug Control，Chongqing 401121，China

Objective To validate the microbial limit tests of Esomeprazole sodium. Methods Compare studing with the conventional method, membrane-filter procedure, membrane-filter procedure and washing methods. Results Membrane-filter procedure and washing 200mL with pH 7.0 method can be used to examin total amount of aerobe, conventional culture method can be used to check the mold and yeast, direct membrane-filter procedure can be used to examin mould and saccharomycetes and Escherichia coli count. Conclusion Membrane- filter procedure should be considered preferentially in performing microbial limit test for Esomeprazole sodium.

Esomeprazole Sodium; Microbial Limit; Method Validation

鄭露(1984-) ，女，工程師,研究方向為微生物檢驗。E-mail：386557782@qq.com

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1007-8517(2017)11-0022-03

2017-04-01 編輯：陶希睿)