民族藥地板藤中總黃酮含量的測定

張文平 張曉平 鄧 杰 饒高雄，3*

1.云南中醫學院中藥學院， 云南 昆明 650500；2.山東中醫藥大學藥學院，山東 濟南 250355； 3.云南特安吶制藥股份有限公司，云南 文山 663000

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民族藥地板藤中總黃酮含量的測定

張文平1張曉平2鄧 杰1饒高雄1，3*

1.云南中醫學院中藥學院， 云南 昆明 650500；2.山東中醫藥大學藥學院，山東 濟南 250355； 3.云南特安吶制藥股份有限公司，云南 文山 663000

目的：建立地板藤藥材中總黃酮含量的測定方法。方法：采用分光光度法，以蘆丁為參照品，硝酸鋁作顯色劑，在510nm處測定樣品中總黃酮的含量。結果：蘆丁在0.014～0.084mg·mL-1范圍內呈良好的線性關系，r=0.9964，平均加樣回收率為101.16%，RSD=1.75%。結論：該方法簡便、快速，結果準確、可靠，重現性好，適用于地板藤中總黃酮含量的測定。

地板藤；總黃酮；紫外分光光度法

地板藤為桑科植物地石榴(FicustikouaBur.)的藤莖，資源豐富，主要分布于云南、貴州、廣西、西藏、四川、甘肅、陜西南部等地;云南省內以滇南、滇東南資源最為豐富，主產于文山、玉溪、紅河等地，該藥材是云南省地方習用藥材，也是彝、壯、苗、哈尼等民族廣泛使用的民族藥，用藥歷史悠久，是獨具特色的地方中草藥之一[1]。本品性涼，味苦、微澀，具有清熱利濕、收斂止痢、解毒消腫的功效，主要用于痢疾、泄瀉、黃疸、水腫、風濕疼痛和無名腫毒[1]。2015版藥典并未收載該藥，僅有地方標準可供參考[2]。地板藤藥材中黃酮類成分含量較多，在心血管系統、抗菌抗病毒、抗炎抗氧化和保肝方面具有較好的生物活性[3-6]。但該藥材質量穩定度不高，因此其黃酮類成分含量的測定對地板藤藥材質量標準的制定及該藥材的推廣意義重大。筆者采用紫外分光光度法對地板藤中的總黃酮進行測定，以期為地板藤質量標準的提高和藥材中黃酮類化合物的開發及利用提供科學依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-2450可見紫外掃描儀(日本島津科技公司)，UV-2000可見紫外分光光度計(上海奧析科學儀器有限公司)，YB-500型多功能粉碎機FA1004N電子天平(上海津平科學儀器有限公司)，YP502電子天平(上海津平科學儀器有限公司)。

1.2 試劑與樣品 蘆丁對照品(批號：150427A，蘆丁含量≥98%，南京景竹生物科技有限公司)；其它試劑均為分析純。地板藤藥材購于昆明螺螄灣藥材市場或采挖于云南宣威、昆明西山、昆明呈貢、楚雄等地且采收時間不同，經曬干粉碎后備用。藥材來源詳見表1。

表1 地板藤藥材來源

2 方法與結果

2.1 標準溶液的制備 精密稱取3.5mg蘆丁標準品，用無水甲醇溶解定容于10mL容量瓶中，搖勻。此蘆丁對照品溶液濃度為0.35mg·mL-1，備用。

2.2 樣品溶液的制備 準確稱取粉碎干燥的地板藤5g，加50mL甲醇，加熱回流2h，抽濾，并用甲醇沖洗濾渣3次，合并濾液，定容至100mL。

2.3 測定波長的選擇 準確量取標準溶液和樣品溶液適量，置于10mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液0.2mL，混勻，放置5min；再加10%硝酸鋁溶液0.2mL，放置6min；然后加4%氫氧化鈉溶液2mL，混勻，放置15min，定容，過濾，在200～800nm波長處掃描，對照品與供試品溶液顯色后均在510nm波長處有最大吸收，故將510nm作為測定波長。紫外掃描光譜詳見圖1。

2.4 標準曲線的繪制 精密吸取蘆丁標準溶液0.0 、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4mL于10mL容量瓶中，用60%乙醇補充至5mL，加入5%亞硝酸鈉溶液0.2mL，混勻，放置5min；再加入10%硝酸鋁溶液0.2mL，搖勻，放置6min；然后加入4%氫氧化鈉溶液2.0mL，再加入60%乙醇至刻度，搖勻，放置15min后，分別于510nm波長處測定吸收度，以吸收度值(A)對濃度(C)進行線性回歸，得回歸方程Y=10.88X-0.1173，r=0.9963。結果表明，蘆丁檢測濃度在0.014～0.084mg/mL范圍內線形關系良好。標準曲線見圖2。

2.5 方法學考查

2.5.1 精密度試驗 取“2.1”項下溶液于510nm波長處測吸收度5次。結果，吸收度平均值為0.5696，RSD=0.36%。表明該方法精密度良好。

2.5.2 重現性試驗 準確稱取藥材樣品5.0g，共5份，按所定條件進行平行試驗，依法處理，于510nm波長處測定吸收度。結果顯示，總黃酮的平均含量為0.013%，RSD=1.26%，表明本方法重現性良好。

2.5.3 穩定性試驗 取“2.2”項下供試品溶液，于0、2、4、6、24h時測定吸收度。結果顯示，吸收度RSD=1.21%，表明藥材經提取后，溶液在24h內穩定性良好。

2.5.4 加樣回收率試驗 精密稱取地板藤藥材5份，5.0g/份，分別加入標準品溶液0.3mL(濃度為90.5μg·mL-1)于10mL容量瓶，按樣品溶液的制備方法處理，依法測定含量，計算加樣回收率和RSD值。測得平均回收率為98.94%，RSD=1.91%。結果見表2。

2.6 樣品含量測定 分別用“2.2”項下方法提取樣品溶液，精密移取1mL于10mL容量瓶中，按“2.3”中方法配制各樣品供試液，平行測定5次，以標準曲線計算出藥材總黃酮含量。實驗結果見表3。

表2 地板藤藥材中總黃酮加樣回收率試驗結果

表3 不同產地地板藤中總黃酮含量

2.7 結果 不同產地的地板藤藥材總黃酮含量差異較大，其中來源于楚雄、云南宣威的地板藤藥材中總黃酮含量最低為0.48%，購于昆明螺螄灣藥材市場和采挖于昆明呈貢的地板藤藥材中總黃酮含量最高為1.84%。

3 討論與小結

3.1樣品前處理方法的選擇

為了準確測定樣品中總黃酮含量，根據參考文獻對提取方法、提取時間、提取料液比、提取預處理進行了考察。在所考察的加熱回流提取、超聲提取方法中，加熱回流提取方法的提取率更高，但用石油醚50mL加熱回流1h預處理后，總黃酮量損失較多。在所考察的提取時間加熱回流提取1.5h和2.0h中，加熱回流2.0h能更多提取出樣品總黃酮。提取料液比1∶10提取率較好。最終選擇準確稱取粉碎干燥的地板藤5g，加50mL甲醇，加熱回流2h，抽濾，并用甲醇沖洗濾渣3次，合并濾液，定容至100mL。

3.2 對照品的選擇

經查文獻[4-6]，發現至今沒有對地板藤總黃酮含量測定的相關研究，而相關研究表明地板藤中確實含蘆丁、柚皮素、槲皮素等黃酮類成分，對蘆丁、槲皮素、地板藤提取液進行了紫外200～800nm全波長掃描[7-10]，蘆丁與地板藤提取液在510nm處有共同吸收，槲皮素與地板藤提取液無共同吸收峰。故本實驗選用蘆丁作為對照品。

3.3小結

黃酮類化合物分布廣泛，具有多種生物活性，地板藤中含有多種黃酮類成分，但有關地板藤總黃酮含量測定目前尚未見報道。故本研究用分光光度法對地板藤中的總黃酮進行測定，并進行了方法學的考察。結果表明本實驗方法操作簡單易行，結果準確可靠，為地板藤質量標準的提高與地板藤黃酮類化合物的開發和利用提供科學依據。

[1]國家中醫藥管理局中華本草編委會. 中華本草(第2卷)[M].北京:人民衛生出版社，2001：3.

[2]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部) [S]．北京：中國醫藥科技出版社出版，2015．

[3]郭良君，譚興起，鄭巍，等. 地瓜藤化學成分研究[J]. 中草藥, 2011, 42(9)：1709-1711.

[4]關永霞，楊小生，佟麗華，等. 苗藥地瓜藤化學成分的研究[J]. 中草藥，2007，38(3)：342-344.

[5]楊世波，張潤芝，江志勇，等. 地板藤根的化學成分研究[J]. 中成藥， 2014，36(3)：554-558.

[6]唐麗萍，房秀艷，蔣暉，等． 云南習用藥材地板藤的質量標準研究[J]. 云南中醫學院學報，2007，30(4)：13-16.

[7]呂鵬，賈秀梅，張振凌，等. 懷山藥及非藥用部位總黃酮含量測定[J]. 中國實驗方劑學雜志，2012，18(2)：65-68.

[8]鐘方麗，王曉林，孫曉雨，等. 刺玫葉中金絲桃苷和總黃酮含量的測定[J]. 食品科學，2013，34(2)：231-235.

[9]李艷提，趙金鳳，張衛明，等. 羅布麻茶總黃酮含量測定方法研究[J]. 食品科技，2010，35(6)：274-277.

[10]郭麗冰，王蕾. 降香總黃酮含量測定方法的研究[J]. 中藥材，2008，31(5)：694-696.

Study on the Determination Method of Total Flavonoids in Ficus Tikoua Bur.

ZHANG Wenping1ZHANG Xiaoping2DENG Jie1RAO Gaoxiong1,3*

1.College of Pharmaceutical Science,Yunnan University of TCM, Kunming 650500, China; 2.College of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Ji’nan 250355, China; 3.Yunnan Daphne Pharmaceutical Co.LTD, Wenshan 663000，China

Objective To establish methods for the determination of total flavonoids in Ficus tikoua Bur. Methods Total flavonoids were quantified by UV spectrophotometry at 510nm, using rutins as reference substance and aluminum nitrate as chromogenic agent. Results The linear ranges of rutin was 0.014～0.084 mg·mL-1(r=0.9964) and the average recovery rate was 101.16% withRSDof 1.75%. Conclusion The method was simple, rapid and accurate, which can be used for the total flavonoids of Ficus tikoua Bur.

Ficus Tikoua Bur.; Total Flavonoids; UV Spectrophotometry

云南省科技強省計劃項目-特色天然藥調經養顏膠囊大品種培育及二次開發(2014AE007)；大學生創新創業計劃項目—民族藥地板藤止血作用、hplc指紋圖譜與質量標準完善研究(31050401000)。

張文平(1981-)，女，漢族，講師，博士研究生在讀，研究方向為中藥藥劑與質量標準。E-mail：455692426@qq.com

饒高雄(1965-)，男，漢族，教授，碩士研究生導師，研究方向為中藥化學及中藥質量控制。E-mail：917884128@qq.com

R284.1

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1007-8517(2017)11-0025-03

2017-01-07 編輯：梁志慶)