益生菌對結直腸息肉內鏡下切除后腸道菌群的影響

聶剛　張茜玲

【摘要】 目的：觀察益生菌對結直腸腺瘤患者內鏡下切除術后腸道菌群的影響。方法：選取40例結直腸腺瘤患者，以10例健康體檢者作對照為正常組，采集糞便標本，測定腸道菌群，觀察不同組間患者腸道菌群構成變化。將40例結直腸腺瘤患者隨機分成3組：手術對照組10例，內鏡下切除術后不予益生菌治療；美常安組患者15例，在結腸鏡下切除腺瘤后給予美常安（枯草桿菌二聯活菌腸溶膠囊）口服（2粒，3次/d）；培菲康組患者15例，在結腸鏡下切除腺瘤后給予培菲康（雙歧桿菌三聯活菌膠囊）口服（2粒，2次/d）。總療程均為4周，分別采集術前和術后的糞便標本進行檢測，對比兩種益生菌對腸道菌群的影響。結果：結直腸腺瘤患者存在腸道菌群紊亂，與正常組相比，結直腸腺瘤患者糞便中的糞腸球菌、雙歧桿菌及乳桿菌數量明顯下降，而大腸桿菌數目明顯上調，差異均有統計學意義（P<0.05），擬桿菌數量比較差異無統計學意義（P>0.05）。與術前比較，服用兩種益生菌后患者糞便中的雙歧桿菌、乳桿菌數量均上調，而大腸桿菌數量降低，差異均有統計學意義（P<0.05）；糞腸球菌的數量較術前有所上升，但差異無統計學意義（P>0.05）；擬桿菌數量在治療前后比較差異均無統計學意義（P>0.05）。結論：結直腸腺瘤患者存在腸道菌群改變，益生菌制劑可使結直腸腺瘤患者的有助于恢復腸道菌群，在結直腸腺瘤的治療中有重要的臨床意義。

【關鍵詞】 大腸癌； 結直腸腺瘤； 腸道菌群； 益生菌

Effect of Probiotic on Intestinal Flora in Patients after Resection of Colorectal Adenomas/NIE Gang，ZHANG Xi-ling.//Medical Innovation of China，2017，14（16）：009-012

【Abstract】 Objective：To observe the effect of probiotic on intestinal flora in patients after resection of colorectal adenomas.Method：Forty patients with colorectal adenomas were selected to test the changes of intestinal flora，the results were compared with 10 cases of healthy physical examination.Patients with colorectal adenomas were divided into three groups，the operational control group with 10 cases of colonoscopy surgery without other special treatments，the observation group of 15 cases were given Medilac-s （two tablets，three times a day） or Bifico （two tablets，twice a day）.After colonoscopy surgery， for a period of treatment 4 weeks，the changes of intestinal flora and the recurrence of colorectal adenomas of all groups were observed.Result：The intestinal flora disturbance was confirmed in patients with colorectal adenomas.Compared with the normal group，the numbers of dung enterococcus， bifidobacterium and lactobacillus were decreased in patients with colorectal adenomas，otherwise，the numbers of escherichia coli were increased，the differences were statistically significant（P<0.05），but there was no difference in Bacteroides（P>0.05）.After using two kinds of probiotics，the numbers of Bifidobacterium and Lactobacillus were increased in patients with colorectal adenomas，otherwise，the numbers of Escherichia Coli were decreased，the differences were statistically significant（P<0.05）.The numbers of dung Enterococcus were insignificant increased（P>0.05）.There was no difference in Bacteroides（P>0.05）.Conclusion：Patients with colorectal adenomas existed intestinal flora changes.Intestinal flora could be recovered by probiotics among patients with colorectal adenomas.It has an important clinical significance in the treatment of colorectal adenomas.

【Key words】 Colorectal cancer； Colorectal adenomas； Intestinal flora； Probiotics

First-authors address：The University Affiliated Hospital，Chongqing Medical University，Chongqing 401331，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.16.003

大腸癌是歐美國家常見的消化系腫瘤，在我國其發病率也已升至惡性腫瘤發生率的第4～6位，其中約3/4患者系由大腸腺瘤發展而來[1]。國內外推薦的結直腸腺瘤（colorestal adenoma，CRA）的主要治療手段是內鏡下息肉切除治療，全美息肉研究機構證實，結腸鏡切除腺瘤性息肉可預防結直腸癌的發生[2]，雖然通過內鏡早期發現大腸腺瘤樣息肉而摘除可減少部分大腸癌的發生，但復發率高達40%～50%[3]。目前國內外已有多項研究發現大腸腫瘤患者存在腸道菌群改變[4]，提示腸道菌群紊亂可能參與了腺瘤癌變的進展過程。研究表明，補充益生菌可調節調節腸道免疫[5-6]、修復腸上皮屏障功能[7]、抑制腫瘤細胞增殖等[8]。目前關于預防性服用益生菌對結直腸腺瘤患者腸道菌群的系統性研究暫未見相關報道。本課題擬通過觀察大腸腺瘤內鏡切除后服用益生菌對腸道菌群的影響，進一步證實腸道菌群在大腸腺瘤患者中的意義，為臨床治療提供依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年5月-2016年5月收集的正常人群10例，結直腸腺瘤患者40例，結直腸腺瘤患者均符合臨床診斷標準。將上述對象分為四組，正常人群為正常組，隨機選取10例結直腸腺瘤患者作為手術對照組，其余30例隨機分成組培菲康組和美常安組，每組各15例。三組患者的一般資料比較差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性，見表1。所選病例患者在采樣前1個月未使用抗生素、微生態活菌制劑和聚乙二醇等瀉藥。研究方案通過醫院倫理學委員會審核，并獲得患者知情同意書。

1.2 排除標準 （1）家族性腺瘤性息肉病或遺傳性非息肉病結腸癌患者；（2）有腹瀉、活動性消化性潰瘍或胃、腸出血史等消化道疾病史；（3）1周內服用過阿司匹林、華法林等抗凝藥物；（4）接受放化療及免疫治療的患者；（5）合并心、腦、血管、肝、腎、肺、胰腺、內分泌和造血系統嚴重原發性疾病，以及患有其它正在用藥治療，影響試驗藥物觀察的患者；（6）準備妊娠、已妊娠或哺乳期婦女、精神病患者；（7）有吸毒史；（8）年齡在18歲以下，70歲以上；（9）不符合納入標準，未按規定用藥，無法判斷療效，資料不全而影響療效安全性者。

1.3 方法 正常組：無結直腸腺瘤的正常人群。手術對照組：結直腸腺瘤內鏡下切除后不另做治療。培菲康組：結直腸腺瘤內鏡下切除后，培菲康（雙歧桿菌三聯活菌膠囊，由上海信誼藥廠有限公司生產）2粒，2次/d，連續服用4周。美常安組：結直腸腺瘤內鏡下切除后，美常安（含枯草桿菌、腸球菌二連活菌腸溶膠囊，由北京韓美制藥公司生產）2粒，3次/d，連續服用4周。診療前、治療第4周后收集糞便標本，查大便細菌計數。療程中禁用其他對消化系統有影響的藥物，平時多食新鮮、粗纖維食物，忌食辛辣、炙博、肥膩及腌制品。所有結直腸腺瘤均采內鏡下切除。術后觀察切口部位是否出現穿孔、出血現象，將結腸腺瘤進行病理組織學檢查。

1.4 糞便培養及計數 正常人群組及結直腸腺瘤患者在治療前后均留取糞便標本。取新鮮糞便0.1 g于EP管中并盡快送檢（時間<30 min），加入生理鹽水倍比稀釋，震蕩混勻，用接種環分別接種至不同的培養基上，需氧菌放置于37 ℃有氧條件下培養24～48 h計數，厭氧菌采用抽氣換氣法培養72 h后計數，使用ALB半自動微生物鑒定系統（法國生物梅里埃公司）行細菌鑒定，結果以每克糞便中菌落形成單位的對數值（l g CFU/g）表示，代表菌群有：需氧菌2種（大腸桿菌、糞腸球菌），厭氧菌3種（雙歧桿菌、乳桿菌、擬桿菌）。

1.5 觀察指標 觀察正常組人群和結腸腺瘤患者糞便菌群構成情況，對比服用益生菌前后結腸腺瘤患者腸道菌群的變化情況。

1.6 統計學處理 使用SPSS 20.0統計軟件進行分析，計量資料采用（x±s）表示，比較采用配對t檢驗，計數資料采用 字2檢驗，多組數據比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

結直腸腺瘤患者存在腸道菌群紊亂，與正常組相比，術前對照組、培菲康組、美常安組患者糞便中的糞腸球菌、雙歧桿菌及乳酸桿菌數量均明顯下降（P<0.05）。大腸桿菌在術前對照組、培菲康組、美常安組與正常組對比，差異均有統計學意義（P<0.05）。擬桿菌數量各組間比較均差異均無統計學意義（P>0.05）。對照組患者糞便中的菌群術后與術前比較，差異無統計學意義（P>0.05）。經過兩種益生菌治療后的培菲康組、美常安組患者糞便中的雙歧桿菌、乳酸桿菌數量上調（P<0.05），大腸桿菌數量下調（P<0.05），而糞腸球菌數目有所上調但差異無統計學意義（P>0.05）。見表2。

3 討論

結直腸癌已嚴重危害人類的健康，而結腸腺瘤是臨床上常見的消化道類疾病，是一種結腸的良性腫瘤，被公認為癌前病變[9]。目前普遍認為，大腸腺瘤在大腸癌形成發展過程中不可避免，積極根除大腸腺瘤可以降低大腸癌的發生率[10]，但是由于其在結腸鏡下易發生穿孔、大出血等現象，結腸腺瘤復發的機率較大[11]。

人體微生態系統以腸道微生態系統最主要、最復雜，含有微生物400多種，其中雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、糞鏈球菌占98 %以上，與人體的能量、物質代謝關系密切，參與維持人體健康。

已有多項研究證實，結腸癌人群與健康人群腸道微生物存在構成差異，表現為明顯的菌群穩態失衡[12-13]。Scanlan等[4]通過對結直腸癌和腺瘤性息肉病患者腸道菌群構成進行分析，發現結直腸癌及腺瘤性息肉病患者腸道菌群多樣性和優勢菌群降低，提示腸道菌群結構組成的改變可能對結腸癌的發生有促進作用。目前認為腸道菌群是影響CRC發生的環境因素之一，與之相關的主要功能包括調控腸上皮細胞增殖、分化，合成必需營養成分和/或生物活性成分，抑制病原體過度繁殖并激活腸道免疫系統等。腸道菌群失調和結腸癌之間的關系近年來已受到國內外廣泛關注，對于腸道菌群失調參與結腸癌的發生發展也有了一定的認識，腸道菌群的作用已成為CRC發病機制研究中新的熱點[14]。目前認為，腸道菌群紊亂失調會釋放大量的細菌毒素，誘發結腸炎等炎性腸病，腸道屏障功能的損傷會引起非致病性細菌的轉位，進而影響免疫系統穩態，導致腸道黏膜促炎癥反應信號傳導機制異常，使其向致癌相關的免疫反應轉變，進而誘導結腸癌的發生[15]。同時，腸道微生物參與營養代謝過程中的某些產物對腸道上皮細胞具有毒性作用，致使受損腸道黏膜上皮瘤化。目前學術界認為，腸道內微生物所致的局部和全身的慢性炎癥是導致腫瘤發生的主要機制[16]。

益生菌作為臨床上最常用的微生態制劑，已被廣泛應用于多種疾病的防治。體外研究亦發現，益生菌能夠影響結腸癌細胞的增殖、凋亡和黏附等惡性生物學行為[17]。研究表明腸道菌群失調介導的慢性和低炎癥狀態容易刺激腫瘤的形成，主要與免疫細胞及其產生的細胞因子有關[18]。腸道菌群失調致代謝能力的改變，由于腸道厭氧菌產生一系列的代謝酶作用于不同的底物，產生致癌物質而引發結直腸癌[19]。培菲康是含有雙歧桿菌、乳酸桿菌、糞腸球菌等活性成分，而美常安是含有高濃縮枯草桿菌、屎腸球菌的新型微生態制劑，目前已在腹瀉及潰瘍性結腸炎等疾病的防治中起到重要作用[20]。本文對結直腸腺瘤患者及正常人群的腸道菌群結構進行了簡單的分析，發現糞腸球菌、雙歧桿菌及乳桿菌數量明顯下降，而大腸桿菌數量明顯上調，提示結直腸腺瘤患者存在腸道菌群紊亂。服用益生菌制劑后，患者糞便中的乳酸桿菌、雙歧桿菌數量上調，而大腸桿菌數量降低，考慮為美常安中的枯草桿菌利用生物奪氧作用降低腸道定植部位的氧濃度，造成適合厭氧菌群生長的環境，促進雙歧桿菌等有益菌的生長，從而抑制大腸桿菌等致病菌的生長。而培菲康可以直接提供機體活性的雙歧桿菌，從而抑制大腸桿菌的生長，益生菌制劑可以糾正結直腸腺瘤患者腸道菌群紊亂，提示益生菌可以對結直腸腺瘤患者具有臨床治療作用，為臨床防治結直腸腺瘤提供新的思路和治療手段。

參考文獻

[1]陳灝珠.實用內科學[M].北京：人民衛生出版社，2005：1934.

[2] Zauber A G，Winawer S J，OBrien M J，et al.Colonoscopic polypectomy and long-term prevention of colorectal-cancer deaths[J].The New England Journal of Medicine，2012，366（8）：687-696.

[3]房靜遠.大腸癌的化學預防：問題與希望并存[J].中華內科雜志，2009，48（2）：93-94.

[4] Scanlan P D，Shanahan F，Clune Y，et al.Culture-independent analysis of the gut microbiota in colorectal cancer and polyposis[J].Environmental Microbiology，2008，10（3）：789-798.

[5] De Moreno，De Leblanc A，Perdigon G.The application of probiotic fermented milks in cancer and intestinal inflammation[J].The Proceedings of the Nutrition Society，2010，69（3）：421-428.

[6] Pagnini C，Saeed R，Bamias G，et al.Probiotics promote gut health through stimulation of epithelial innate immunity[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2010，107（1）：454-459.

[7] Normand S，Delanoye-Crespin A，Bressenot A，et al.Nod-like receptor pyrin domain-containing protein 6 （NLRP6） controls epithelial self-renewal and colorectal carcinogenesis upon injury[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2011，108（23）：9601-9606.

[8] Baldwin C，Millette M，Oth D，et al.Probiotic Lactobacillus acidophilus and L. casei mix sensitize colorectal tumoral cells to 5-fluorouracil-induced apoptosis[J].Nutrition and Cancer，2010，62（3）：371-378.

[9] Wu X F，Lian N Q，Lu C F，et al.Research progress on effect of intestinal flora on chronic liver diseases[J].Chinese Pharmacological Bulletin，2013，29（12）：1644-1647.

[10]朱浩，孫明軍.大腸側向發育型腫瘤內鏡下的診斷與治療[J].臨床消化病雜志，2011，23（6）：343-346.

[11]王少軍，胡乃中，石海，等.結腸高危性腺瘤的臨床分析及Decorin在腺瘤中的表達與意義[J].中國腫瘤臨床，2010，37（12）：685-688.

[12] Ma X，Hua J，Li Z.Probiotics improve high fat diet-induced hepatic steatosis and insulin resistance by increasing hepatic NKT cells[J].Journal of Hepatology，2008，49（5）：821-830.

[13] Icaza-Chavez M E.Gut microbiota in health and disease[J].Revista de Gastroenterologia de Mexico，2013，78（4）：240-248.

[14] Shen X J，Rawls J F，Randall T，et al.Molecular characterization of mucosal adherent bacteria and associations with colorectal adenomas[J].Gut Microbes，2010，1（3）：138-147.

[15] Kinnebrew M A，Pamer E G.Innate immune signaling in defense against intestinal microbes[J].Immunological Reviews，2012，245（1）：113-131.

[16] Konstantinov S R，Kuipers E J，Peppelenbosch M P.Functional genomic analyses of the gut microbiota for CRC screening[J].Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology，2013，10（12）：741-745.

[17] Zhu Y，Michelle L T，Jobin C，et al.Gut microbiota and probiotics in colon tumorigenesis[J].Cancer Letters，2011，309（2）：119.

[18] Singh N，Gurav A，Sivaprakasam S，et al.Activation of gpr109a，receptor for niacin and the commensal metabolite butyrate，suppressescolonic inflammation and carcinogenesis[J].Immunity，2014，40（1）：128-139.

[19] Vos W M D，Vos E A D.Role of the intestinal microbiome inhealth and disease： from correlation to causation[J].Nutr Rev，2012，70（Suppl 1）：S45-S56.

[20]陳方，姚莉亞，潘勇裕.培菲康在腸道菌群失調中的雙向調節作用[J].中國醫藥導刊，2008，10（3）：418-419.

（收稿日期：2017-03-16） （本文編輯：周亞杰）